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公开(公告)号：CN102676658A
公开(公告)日：2012-09-19
申请号：CN201210115339.7
申请日：2012-04-19
申请人： 江苏省农业科学院
摘要： 本发明涉及一种引起猪的多发性浆膜炎、关节炎、耳炎等的猪鼻支原体的巢式PCR检测方法，主要步骤包括：1）提取猪鼻支原体样品的DNA，低温保存备用；2）以一对特异性引物MhrP01、MhrP02对猪鼻支原体样品进行第一轮PCR扩增；3）以另一对特异性引物MhrP03、MhrP04对猪鼻支原体第一轮PCR产物进行第二轮PCR扩增；4）对扩增产物进行电泳检测。如果存在346bp的特异性条带，则确定所检测的病菌为猪鼻支原体。本方法在微量病原菌的存在下，都可以准确检出，只要有102CCU/mL病原菌存在，即可检测出。本发明的优点是检测速度快、特异性强、灵敏度高和易于推广。
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公开(公告)号：CN101565680B
公开(公告)日：2011-04-06
申请号：CN200910027159.1
申请日：2009-05-22
申请人： 江苏省农业科学院
摘要： 本发明公开了一种猪肺炎支原体P97R1基因重组毕赤酵母及表达蛋白，涉及生物蛋白制备领域。主要经基因的获得、表达载体的构建、目的蛋白的表达。利用PCR方法用设计的引物从猪肺炎支原体基因组DNA中扩增获得目的基因，再经酶切和连接克隆入酵母表达载体pPICZα-A，构建成分泌型重组酵母表达载体pPICZα-A/P97R1，pPICZα-A/P97R1经Sac I酶切线性化后电转化入毕赤酵母菌株GS115。重组的毕赤酵母经甲醇诱导分泌表达P97R1蛋白。该方法制备的猪肺炎支原体P97R1蛋白较纯，且具有良好的免疫反应性，可用于猪肺炎支原体P97蛋白的研究、猪肺炎支原体免疫检测试剂盒和基因工程疫苗的研制。
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公开(公告)号：CN101612122A
公开(公告)日：2009-12-30
申请号：CN200910033317.4
申请日：2009-06-18
申请人： 江苏省农业科学院
摘要： 本发明公开了一种适用于猪用活疫苗气雾免疫的方法。将猪用疫苗经稀释介质按说明书要求稀释成疫苗溶液，或比说明书要求稀释浓度高2～5倍，通过喷雾器，用抛射剂，控制喷射压力≤0.3MPa；气溶胶输出量为1－10mL/min气流温度≤50℃；空气相对湿度≥50％，将疫苗溶液制备成符合粒径分布1～10微米、雾粒浓度达80％以上及微生物学活性达到疫苗免疫要求的液相气溶胶，在气雾箱中以雾化方式对猪进行免疫。该方法可操作性强，可以标准化推广，用于猪的弱毒疫苗，尤其是针对猪呼吸道疾病疫苗的喷雾免疫。
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公开(公告)号：CN101565681A
公开(公告)日：2009-10-28
申请号：CN200910027160.4
申请日：2009-05-22
申请人： 江苏省农业科学院
摘要： 本发明公开了一种猪肺炎支原体P36基因重组毕赤酵母及表达蛋白，涉及生物蛋白制备领域。设计引物PCR获得P36目的基因后克隆入pPICZα－A表达载体，重组表达质粒pPICZα－A/P36转化感受态毕赤酵母(Pichia pastoris)X－33，筛选到重组毕赤酵母X－33/pPICZα－A/P36。表达蛋白制备方法为，将阳性酵母菌接种到BMGY中，经甲醇诱导表达，表达蛋白以可溶形式存在上清液中。该方法制备的猪肺炎支原体P36蛋白较纯，且具有良好的免疫反应性，表达蛋白可用于P36蛋白的研究、猪肺炎支原体免疫检测试剂盒和基因工程疫苗的研制。
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公开(公告)号：CN118852369A
公开(公告)日：2024-10-29
申请号：CN202410885092.X
申请日：2024-07-03
申请人： 江苏省农业科学院
IPC分类号： C07K14/30 , C12N15/31 , G01N33/569 , G01N33/543 , A61K39/02 , A61P31/04
摘要： 本发明涉及绵羊肺炎支原体检测领域，具体涉及绵羊肺炎支原体免疫相关蛋白、表达载体、重组菌株、试剂盒、检测绵羊肺炎支原体ELISA抗体的方法及其用途。本发明公开了一种绵羊肺炎支原体免疫相关蛋白，氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，或如SEQ ID NO:2所示。本发明通过对UlaD、T4SS基因进行PCR扩增、克隆、构建表达载体，然后通过原核表达系统获得了两种具有良好的免疫反应性的重组蛋白，并基于这两种蛋白通过优化间接ELISA检测方法中的条件和参数，分别建立了敏感性高、特异性强、重复性好、符合率好的绵羊肺炎支原体抗体的间接ELISA检测方法，为绵羊肺炎支原体抗体检测试剂盒的开发奠定了坚实基础，同时可作为亚单位疫苗的候选蛋白和药物，制备成抗绵羊肺炎支原体感染制剂。
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公开(公告)号：CN115074297A
公开(公告)日：2022-09-20
申请号：CN202210874063.4
申请日：2022-07-25
申请人： 江苏省农业科学院
摘要： 本发明提供一种高效动物支原体培养基及其制备方法，属于动物医学领域。该高效动物支原体培养基，是在KM2培养基中添加FH和C4bp。本发明培养基的配制方法，包括如下步骤：在KM2培养基中添加无菌FH和C4bp，得到所述培养基。采用本发明动物支原体培养基能够显著提高动物支原体的CCU50值，显著降低疫苗生成成本和提高免疫效果。
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公开(公告)号：CN109321532B
公开(公告)日：2021-10-26
申请号：CN201811167484.3
申请日：2018-10-08
申请人： 江苏省农业科学院
IPC分类号： C12N5/20 , C07K16/10 , G01N33/535 , G01N33/569
摘要： 本发明公开了一种用于检测山羊副流感病毒3型（CPIV3）的双抗体夹心ELISA检测试剂盒及其应用。所述的试剂盒中含有由保藏编号为CCTCC NO.C201627和CCTCC NO.C2018151的杂交瘤细胞株分泌产生的抗CPIV3单克隆抗体2E6和1F8。本发明以纯化的1F8单抗为捕获抗体，以辣根过氧化物酶标记的2E6单抗为检测抗体，建立了检测CPIV3的双抗体夹心ELISA方法。本发明构建的试剂盒检测CPIV3病原快速、稳定、特异性好、灵敏度高，可快速检测样品中是否含有CPIV3病毒粒子；本发明适用于养殖场感染CPIV3的高通量检测。
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公开(公告)号：CN109022437B
公开(公告)日：2021-09-14
申请号：CN201810862854.9
申请日：2018-08-01
申请人： 江苏省农业科学院
IPC分类号： C12N15/113 , A61K48/00 , A61K31/7105 , A61P31/14
摘要： 本发明涉及一种抑制山羊副流感病毒3型（CPIV3）复制的靶标位点序列及其在制备抗山羊副流感病毒3型药物中的应用。所述抑制山羊副流感病毒3型复制的靶标位点序列位于干扰素调节基因2（IRF2）的3’UTR中，其核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示，受bta‑miR‑222序列直接靶定，从而降解IRF2的mRNA，降低IRF2蛋白的表达量，提高Ⅰ型干扰素表达水平，抑制CPIV3增殖。该靶标位点序列为研发新的治疗因CPIV3引发的疾病的抗病毒药物提供了一个新的药物靶点。此外还可应用于评价bta‑miR‑222调节IRF2转录水平，以及培育抗山羊副流感病毒3型转基因羊方面。
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公开(公告)号：CN112920976A
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202110341911.0
申请日：2021-03-30
申请人： 江苏省农业科学院
摘要： 本发明公开了一株绵羊肺炎支原体强毒株及其应用，所述绵羊肺炎支原体的分类命名为绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)NJ01株，已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO：M 2020907，保藏日期为2020年12月14日。所述的应用为上述绵羊肺炎支原体在感染发病和制备治疗羊支原体肺炎药物中的应用。本发明的绵羊肺炎支原体强毒株培育采用的支原体培养基，其制备简便、成本低、培养支原体变色快且滴度高。
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公开(公告)号：CN108949700B
公开(公告)日：2021-05-14
申请号：CN201810926226.2
申请日：2018-08-15
申请人： 江苏省农业科学院
摘要： 本发明属于兽用生物制品领域，公开了一种山羊副流感病毒3型JS14‑2株及其在制备灭活疫苗中的应用。分离纯化获得山羊副流感病毒3型JS14‑2病毒株后，将病毒液经离心、甲醛灭活，加入佐剂乳化制备获得灭活疫苗。本发明提供了一种可用于制备山羊副流感病毒3型灭活疫苗的病毒株，该毒株属于国内流行毒株，毒力强，抗原性好；该毒株在MDBK细胞上具有较好的生长特性，可以获得稳定的高滴度（大于等于107 TCID50/mL，血凝价大于等于28）；疫苗制备方法完善，免疫原性与免疫保护效果良好；使用免疫剂量低，安全性高，免疫持续期长，大大节约生产及使用成本，有利于在临床实际中有效的防控该病。
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