一种基于iTRAQ标记测定烟碱诱导细胞差异表达蛋白质的方法

    公开(公告)号:CN107064338A

    公开(公告)日:2017-08-18

    申请号:CN201710116236.5

    申请日:2017-03-01

    IPC分类号: G01N30/02 G01N30/06

    摘要: 本发明为一种基于iTRAQ标记测定烟碱诱导细胞差异表达蛋白质的方法,提供一种烟碱暴露神经细胞差异蛋白质组的分析方法。具体而言,神经细胞经含有烟碱的培养基培养后,经蛋白质的抽提,蛋白浓度、样品质量及平行性的测定,酶解,iTRAQ标记和nano‑LC‑Q‑TOF分析鉴定后,进行搜库分析。本发明的方法定量分析了1mmol/L烟碱暴露1h SHSY‑5Y蛋白质的差异表达,其中参与MAPK级联生物过程和蛋白酶体信号通路的蛋白酶体蛋白,可能在烟碱成瘾中发挥重要作用,从而达到了解烟碱诱导神经细胞的差异表达蛋白质及差异蛋白质参与的生物过程的目的。

    一种唾液中甲醛-DNA加合物的测定方法

    公开(公告)号:CN105938124A

    公开(公告)日:2016-09-14

    申请号:CN201610226323.1

    申请日:2016-04-13

    IPC分类号: G01N30/02

    CPC分类号: G01N30/02 G01N2030/027

    摘要: 一种唾液中甲醛‑DNA加合物的测定方法,即唾液中HOMe‑dA、HOMe‑dG的测定方法,包括采用OG‑500唾液采集管收集唾液,对唾液进行DNA提取,DNA溶液进行酶水解并依次加入稳定同位素内标、还原剂NaBH3CN和DNA水解酶。水解液经Strata‑X小柱固相萃取,收集洗脱液,室温下氮吹至干,复溶于甲醇水溶液,引入LC‑MS/MS系统分析,可准确检测出Me‑dA、Me‑dG的含量水平。本发明采用稳定同位素作为内标定量分析物可以减少样品前处理过程中引起的误差,串联质谱法更好的提高了方法的选择性、准确性和灵敏度。通过色谱柱以及洗脱条件的选择与优化,较好的提高了色谱分离过程,缩短了色谱分析的时间,减少了有机溶剂的消耗量。

    一种乙醛-DNA加合物的测定方法

    公开(公告)号:CN105911163A

    公开(公告)日:2016-08-31

    申请号:CN201610226317.6

    申请日:2016-04-13

    IPC分类号: G01N30/02

    CPC分类号: G01N30/02 G01N2030/027

    摘要: 一种乙醛?DNA加合物的测定方法,即DNA中Ethylidene?dG和Propano?dG的测定方法,包括采用乙醛溶液暴露小牛胸腺DNA并加入精氨酸作为反应的催化剂,DNA溶液进行酶水解并依次加入稳定同位素内标、还原剂NaBH3CN和DNA水解酶。水解液经Strata?X小柱固相萃取,收集洗脱液并引入LC?MS/MS系统分析,可准确检测出Et?dG和Propano?dG的含量水平。本发明为全新的DNA中乙醛?DNA加合物的测定方法,采用稳定同位素作为内标定量分析物可以减少样品前处理过程中引起的误差,串联质谱法更好的提高了方法的选择性、准确性和灵敏度。通过色谱柱以及洗脱条件的选择与优化,较好的提高了色谱分离过程,缩短了色谱分析的时间,减少了有机溶剂的消耗量。

    一种以FMYYSSR-3标记对烟草原料进行鉴定的方法

    公开(公告)号:CN105063184A

    公开(公告)日:2015-11-18

    申请号:CN201510440177.8

    申请日:2015-07-24

    IPC分类号: C12Q1/68

    CPC分类号: C12Q1/6895 C12Q2600/156

    摘要: 本发明公开了一种应用FMYYSSR-3分子标记技术鉴定烟草原料的方法,属于分子生物学研究领域。本发明在经过烟草基因数据信息筛选后,确定以FMYYSSR-3标记,对样品是否为烟草进行鉴定。在以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,对各个样品的DNA进行提取后,以本发明所设计的引物对其进行PCR扩增,在经过电泳分析后,确定烟草物种的特异性条带位置,视待测样品在相应位置有无扩增条带产生来判断该样品是否为烟草。由于本方法以烟草物种DNA的特异性作为鉴定依据,因此与传统鉴定方法相比,有更加客观、更加准确、更加可靠的优点。

    一种电子烟烟液体外细胞毒性WST-8测试方法

    公开(公告)号:CN103834715B

    公开(公告)日:2015-07-22

    申请号:CN201410094934.6

    申请日:2014-03-16

    IPC分类号: C12Q1/02

    摘要: 一种电子烟烟液体外细胞毒性WST-8测试方法,包括以下步骤:1)配制实验试剂,2)细胞接种,3)电子烟烟液体染毒,4)WST-8染色,5)结果与分析。本发明相比现有技术具有以下特点:在整个试验过程中减少了多次洗涤细胞的试验步骤,操作更为简便;WST-8染色时无需进行更换培养液的步骤,可直接加入稀释培养液进行反应;WST-8产生的甲臜是水溶性的,省去了后续的溶解步骤,染色后1.5-2h内即可完成吸光值检测,测试周期短,方便快速。由于WST-8对细胞无毒性,本测定方法具有对细胞无损、检测通量高,灵敏度高,定量准确等优势。