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公开(公告)号：CN103834715B
公开(公告)日：2015-07-22
申请号：CN201410094934.6
申请日：2014-03-16
Applicant: 国家烟草质量监督检验中心
IPC: C12Q1/02
Abstract: 一种电子烟烟液体外细胞毒性WST-8测试方法，包括以下步骤：1）配制实验试剂，2）细胞接种，3）电子烟烟液体染毒，4）WST-8染色，5）结果与分析。本发明相比现有技术具有以下特点：在整个试验过程中减少了多次洗涤细胞的试验步骤，操作更为简便；WST-8染色时无需进行更换培养液的步骤，可直接加入稀释培养液进行反应；WST-8产生的甲臜是水溶性的，省去了后续的溶解步骤，染色后1.5-2h内即可完成吸光值检测，测试周期短，方便快速。由于WST-8对细胞无毒性，本测定方法具有对细胞无损、检测通量高，灵敏度高，定量准确等优势。
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公开(公告)号：CN103197020B
公开(公告)日：2014-10-15
申请号：CN201310106355.4
申请日：2013-03-28
Applicant: 国家烟草质量监督检验中心
Abstract: 本发明公开了一种卷烟烟丝中保润剂的GC/MS测定方法，即1,2-丙二醇，丙三醇和三甘醇三种保润剂，其特征在于：将烟丝样品干燥，粉碎和过筛；萃取液分别经过分散固相萃取（SPE）离心管和滤膜净化处理后，通过气相色谱和质谱检测器（GC/MS），采用内标法定量检测烟丝中三种保润剂的含量。本方法提供的检测方法，提高了测量方法的重复性，萃取液净化方法简单有效，可减低样品液对色谱柱和离子源的污染，且灵敏度高，回收率好。
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公开(公告)号：CN103834716A
公开(公告)日：2014-06-04
申请号：CN201410094989.7
申请日：2014-03-16
Applicant: 国家烟草质量监督检验中心
Abstract: 一种电子烟烟液体外细胞毒性WST-1测试方法，其特征在于：包括以下步骤：1）配制实验试剂，2）细胞培养，3）细胞接种，4）电子烟烟液染毒，5）WST-1染色，6）结果与分析。本发明相比现有技术具有以下特点：针对大多数电子烟烟液样本密度大的特点，确立了采用质量称重配制电子烟染毒溶液的方法；通过细胞接种密度的优化步骤，通过WST-1染液反应时间的优化提高检测灵敏度；通过电子烟烟液染毒浓度的优化，确定了最佳染毒浓度，以获得最佳剂量效应曲线；WST-1染色减少了多次洗涤细胞的试验步骤，本测定方法还具有操作更快速简便、灵敏性更高、结果更稳定的优点。
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公开(公告)号：CN103399159A
公开(公告)日：2013-11-20
申请号：CN201310340682.6
申请日：2013-08-06
Applicant: 国家烟草质量监督检验中心
Abstract: 一种卷烟烟气致细胞DNA损伤的定量评价方法，属于卷烟烟气基因毒性的毒理学评价技术领域，其特征在于：是基于量子点标记荧光免疫法对烟气诱导的细胞DNA损伤标志物磷酸化的组蛋白（γH2AX）的定量测定方法；具体步骤包括：（1）细胞培养，（2）卷烟烟气染毒，（3）基于量子点标记荧光免疫法对细胞中γH2AX定量测定，（4）数据处理。本发明的优点在于：通过细胞固定和通透实现细胞样本的直接、高通量检测，省去了蛋白质提取步骤，提高检测速度；可实现96个样品的同时测定，具有高通量的优势。通过测定细胞中总H2AX的荧光信号可消除各检测孔中由细胞个数差异引起的信号偏差，减小平行样本荧光检测信号的偏差，提高方法重现性。
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公开(公告)号：CN103197020A
公开(公告)日：2013-07-10
申请号：CN201310106355.4
申请日：2013-03-28
Applicant: 国家烟草质量监督检验中心
Abstract: 本发明公开了一种卷烟烟丝中保润剂的GC/MS测定方法，即1,2-丙二醇，丙三醇和三甘醇三种保润剂，其特征在于：将烟丝样品干燥，粉碎和过筛；萃取液分别经过分散固相萃取（SPE）离心管和滤膜净化处理后，通过气相色谱和质谱检测器（GC/MS），采用内标法定量检测烟丝中三种保润剂的含量。本方法提供的检测方法，提高了测量方法的重复性，萃取液净化方法简单有效，可减低样品液对色谱柱和离子源的污染，且灵敏度高，回收率好。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103834716B
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201410094989.7
申请日：2014-03-16
Applicant: 国家烟草质量监督检验中心
Abstract: 一种电子烟烟液体外细胞毒性WST-1测试方法，其特征在于：包括以下步骤：1）配制实验试剂，2）细胞培养，3）细胞接种，4）电子烟烟液染毒，5）WST-1染色，6）结果与分析。本发明相比现有技术具有以下特点：针对大多数电子烟烟液样本密度大的特点，确立了采用质量称重配制电子烟染毒溶液的方法；通过细胞接种密度的优化步骤，通过WST-1染液反应时间的优化提高检测灵敏度；通过电子烟烟液染毒浓度的优化，确定了最佳染毒浓度，以获得最佳剂量效应曲线；WST-1染色减少了多次洗涤细胞的试验步骤，本测定方法还具有操作更快速简便、灵敏性更高、结果更稳定的优点。
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公开(公告)号：CN103808906B
公开(公告)日：2015-08-12
申请号：CN201410094851.7
申请日：2014-03-16
Applicant: 国家烟草质量监督检验中心
Abstract: 一种基于乳酸脱氢酶测定的电子烟烟液细胞毒性评价方法，包括以下步骤：1）配制实验试剂，2）细胞接种，3）电子烟烟液染毒，4）LDH测定，5）结果与分析。本发明针对大多数电子烟烟液样本密度大的特点，确立了采用质量称重配制电子烟染毒溶液的方法。本发明的评价方法通过细胞接种密度的优化、细胞裂解液的选择、LDH基质液反应时间的优化提高检测灵敏度，并通过电子烟烟液染毒浓度的优化，确定了最佳染毒浓度，以获得最佳剂量效应曲线。通过LDH的测定，可反映电子烟烟液对细胞膜的损伤程度，揭示电子烟的细胞毒性机理。此外，本测定方法还具有操作快速简便、灵敏性高、结果稳定的优点。
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公开(公告)号：CN103808917A
公开(公告)日：2014-05-21
申请号：CN201410094850.2
申请日：2014-03-16
Applicant: 国家烟草质量监督检验中心
Abstract: 一种电子烟烟液细胞增殖毒性评价方法，其特征在于：包括以下步骤：1）溶液的配制，2）细胞接种，3）电子烟烟液体染毒及BrdU掺入，4）BrdU掺入量的测定，5）结果与分析。本发明相比现有技术具有以下特点：（1）针对大多数电子烟烟液样本密度大的特点，确立了采用质量称重配制电子烟染毒溶液的方法。（2）通过细胞适用性验证步骤，本发明可能适用于多种贴壁培养细胞，可用于考察电子烟烟液对肺部不同细胞系的细胞毒性。（3）通过BrdU掺入时间和细胞膜通透液浓度的优化提高检测灵敏度。（4）并通过电子烟烟液染毒浓度的优化，确定了最佳染毒浓度，以获得最佳剂量效应曲线。此外，本测定方法还具有操作快速简便、灵敏性高、结果稳定的优点。
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公开(公告)号：CN103645327A
公开(公告)日：2014-03-19
申请号：CN201310684364.1
申请日：2013-12-16
Applicant: 国家烟草质量监督检验中心
IPC: G01N33/68
CPC classification number: G01N33/68 , G01N33/531
Abstract: 一种测定细胞DNA损伤标志物 H2AX含量的酶联免疫测定方法，其特征在于：是采用一种特异性H2AX抗体及酶标二抗对目标蛋白H2AX特异性夹心识别，加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有荧光产物，可根据底物的荧光值实现对H2AX定量测定的方法。并利用该方法定量检测出由于卷烟烟气暴露而导致的细胞中H2AX的含量变化，从而达到评价卷烟烟气基因毒性的目的。与传统有机染料相比，酶标抗体具有以下优势：酶的催化频率高,能放大反应效果，提高检测灵敏度；酶在室温下性质稳定且价格便宜，适于大量分析。酶联免疫分析方法具有快速、准确、高通量、高灵敏等优点。
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公开(公告)号：CN103808917B
公开(公告)日：2015-11-04
申请号：CN201410094850.2
申请日：2014-03-16
Applicant: 国家烟草质量监督检验中心
Abstract: 一种电子烟烟液细胞增殖毒性评价方法，其特征在于：包括以下步骤：1）溶液的配制，2）细胞接种，3）电子烟烟液体染毒及BrdU掺入，4）BrdU掺入量的测定，5）结果与分析。本发明相比现有技术具有以下特点：（1）针对大多数电子烟烟液样本密度大的特点，确立了采用质量称重配制电子烟染毒溶液的方法。（2）通过细胞适用性验证步骤，本发明可能适用于多种贴壁培养细胞，可用于考察电子烟烟液对肺部不同细胞系的细胞毒性。（3）通过BrdU掺入时间和细胞膜通透液浓度的优化提高检测灵敏度。（4）并通过电子烟烟液染毒浓度的优化，确定了最佳染毒浓度，以获得最佳剂量效应曲线。此外，本测定方法还具有操作快速简便、灵敏性高、结果稳定的优点。
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