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公开(公告)号：CN110592192A
公开(公告)日：2019-12-20
申请号：CN201910447145.9
申请日：2019-05-27
IPC分类号： C12Q1/6844 , C12N15/11
摘要： 在大拷贝数野生型基因组DNA存在的情况下，当扩增小拷贝数癌细胞特异性突变时，常见的突变靶标基因和野生型对照基因之间的拷贝数比率为1/10000以下，这是早期癌症检测中的一个难题。为解决这一难题，我们发明了延迟性焦磷酸化激活性聚合反应(延迟性PAP)，可以将野生型基因的扩增产物积累延迟到更晚的时间或周期,例如延迟15个周期或30，000倍,因此可在低模板拷贝数比率的情况下准确可靠地扩增内对照以及靶标模板。
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公开(公告)号：CN104894105A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201510259340.0
申请日：2015-05-20
CPC分类号： C12Q1/6848 , C12Q1/6844 , C12Q2527/125
摘要： 本发明提供了用于制备PAP固体反应成分的冷冻干燥技术及由该技术获得的固体集成组合物与应用，该冷冻干燥技术包括：a)提供了一个由液体集成组合物的水溶液，包括有I)反应缓冲液、3′阻断性引物、脱氧核苷三磷酸、焦磷酸、荧光染料、聚合酶，但不含核酸模板，以及II)非还原性双糖；b)将液体集成组合物的水溶液通过冷冻干燥技术获得的固体集成组合物,使其易于存储和操作；该冷冻干燥后所得固体集成组合物通过加入含有核酸模板的水溶液进行溶解,进行PAP扩增。
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公开(公告)号：CN108624652B
公开(公告)日：2022-06-14
申请号：CN201810204861.X
申请日：2018-03-13
IPC分类号： C12Q1/6827
摘要： 通过全新的引物设计，多重焦磷酸化激活性聚合反应使用多对阻断性引物在一个反应内扩增位于同一位点的多个几乎相同序列的模板，大大提高了核酸扩增的工作效率。
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公开(公告)号：CN108624652A
公开(公告)日：2018-10-09
申请号：CN201810204861.X
申请日：2018-03-13
IPC分类号： C12Q1/6827
CPC分类号： C12Q1/6853 , C12Q1/6848 , C12Q1/6858
摘要： 通过全新的引物设计，多重焦磷酸化激活性聚合反应使用多对阻断性引物在一个反应内扩增位于同一位点的多个几乎相同序列的模板，大大提高了核酸扩增的工作效率。
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公开(公告)号：CN105112514A
公开(公告)日：2015-12-02
申请号：CN201510482091.1
申请日：2015-08-03
CPC分类号： C12Q1/6883 , C12Q1/6827 , C12Q1/6853 , C12Q2600/156
摘要： 本发明提供了GNAS基因突变检测试剂盒包括光学孔板及反应孔中标记的PAP聚合酶、缓冲剂、特异性引物、dNTP和PPi；所述试剂盒可用于检测全血白细胞基因组DNA中体细胞GNAS基因201密码子3种基因突变，即R201H(CGT-CAT)、R201L(CGT-CTT)和R201C(CGT-TGT)，从而辅助临床诊断体细胞GNAS基因突变所引起的MAS综合症。
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公开(公告)号：CN103266103A
公开(公告)日：2013-08-28
申请号：CN201310150085.7
申请日：2013-04-26
CPC分类号： C12N9/1252 , C12P19/34 , C12Q1/68 , C12Q1/6844 , C12Q2521/107 , C12Q2525/121 , C12Q2525/186 , C12Q2565/301
摘要： 本发明提供了用于扩增核糖核酸的方法及分析该方法中RNA模板的方法，开发了一种RNA-PAP的新方法，其可以直接放大RNA模板而无需额外的处理；RNA-PAP为扩增RNA模板带来了一个全新的机理，其中RNA依赖性DNA焦磷酸化反应和RNA依赖性DNA聚合反应是用3'末端阻断性寡核苷酸引物所串联耦合的，由于这种串连耦合，使得RNA-PAP对RNA模板的不匹配性具有高度的选择性，从而提供了高度特异性的RNA模板的扩增；此外，经遗传工程产生的突变体聚合酶具有更高的RNA依赖性DNA焦磷酸化反应和RNA依赖性DNA聚合反应的效率。
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公开(公告)号：CN111172245A
公开(公告)日：2020-05-19
申请号：CN201911035316.3
申请日：2019-10-29
IPC分类号： C12Q1/6844 , C12N15/11
摘要： 本发明涉及用于测定核酸PAP扩增的焦磷酸化激活性荧光的全新荧光检测方法。荧光基团-淬灭基团双标记阻断性引物用于PAP反应，该引物的内部区域或5'末端核苷酸带有一个荧光基团，3'末端阻断性核苷酸则带有一个淬灭基团。多个荧光基团-淬灭基团双标记阻断性引物也用于多重PAP反应，这些引物则带有不同的荧光基团用以区分一个反应中的多个模板。
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公开(公告)号：CN103657617A
公开(公告)日：2014-03-26
申请号：CN201310098099.9
申请日：2013-03-25
IPC分类号： B01J20/281 , C12N15/10
CPC分类号： C12N15/101 , C07H21/00 , C07H21/02 , C07H21/04
摘要： 本发明提供了一种层析柱及核酸提取方法，所述层析柱包括至少两个不同的固体层，以双层层析柱为例，由第一固体层和第二固体层串联耦合组成，所述第一固体层是由阴离子交换膜或微珠组成，所述第二固体层是由硅胶膜或微珠组成，利用所述层析柱进行核酸提取时：（1）第一固体层，当含有核酸的第一溶液流经时，其中核酸结合到此层，并在第二溶液流经时核酸被洗脱；（2）第二固体层，当第二溶液流经时，其中被洗脱的核酸可结合到此层，并在第三溶液流经时被洗脱。在溶液经过第一固体层然后通过第二固体层这种方式下，从而使得第一固体层串联耦合到第二固体层；所述层析柱结构简单、使用方便，该核酸提取方法特别适合分离体积大而且浓度低的核酸。
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公开(公告)号：CN103657617B
公开(公告)日：2016-06-15
申请号：CN201310098099.9
申请日：2013-03-25
IPC分类号： B01J20/281 , C12N15/10
CPC分类号： C12N15/101 , C07H21/00 , C07H21/02 , C07H21/04
摘要： 本发明提供了一种层析柱及核酸提取方法，所述层析柱包括至少两个不同的固体层，以双层层析柱为例，由第一固体层和第二固体层串联耦合组成，所述第一固体层是由阴离子交换膜或微珠组成，所述第二固体层是由硅胶膜或微珠组成，利用所述层析柱进行核酸提取时：（1）第一固体层，当含有核酸的第一溶液流经时，其中核酸结合到此层，并在第二溶液流经时核酸被洗脱；（2）第二固体层，当第二溶液流经时，其中被洗脱的核酸可结合到此层，并在第三溶液流经时被洗脱。在溶液经过第一固体层然后通过第二固体层这种方式下，从而使得第一固体层串联耦合到第二固体层；所述层析柱结构简单、使用方便，该核酸提取方法特别适合分离体积大而且浓度低的核酸。
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公开(公告)号：CN203389364U
公开(公告)日：2014-01-15
申请号：CN201320138958.8
申请日：2013-03-25
CPC分类号： C12N15/101 , C07H21/00 , C07H21/02 , C07H21/04
摘要： 本实用新型提供了一种层析柱，所述层析柱包括至少两个不同的固体层，以双层层析柱为例，由第一固体层和第二固体层串联耦合组成，所述第一固体层是由阴离子交换膜或微珠组成，所述第二固体层是由硅胶膜或微珠组成，所述层析柱结构简单、使用方便，特别适合同時分离RNA和DNA，以及用于提取如病毒等被蛋白质包裹的核酸，和用于分离体积大而且浓度低的核酸，如血浆中提取少量的核酸；所提取的核酸可直接用于下游应用。
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