一种棉花启动子GbU6-5PS及应用

    公开(公告)号:CN105779449B

    公开(公告)日:2018-11-27

    申请号:CN201510885425.X

    申请日:2015-12-04

    Abstract: 本发明提供了一种棉花启动子GbU6‑5PS及应用,该棉花启动子GbU6‑5PS的正反链如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示,该启动子通过第一轮PCR扩增获得覆盖全长GbU6‑5启动子序列的片段,然后通过第二步进行第二轮PCR扩增,以GbU6‑5P为供体质粒模板,以AtU6‑26SK为受体质粒模板,采用Transfer PCR方法对GbU6‑5P启动子进行截短克隆得到。本发明的棉花启动子GbU6‑5PS不仅适合用于棉花,而且片段很短,长度只有105bp,符合构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的要求,能显著提高sgRNA的转录水平,进而可能提高基因组编辑效率。

    一种棉花启动子GbU6-7PS及应用

    公开(公告)号:CN105779448B

    公开(公告)日:2018-11-27

    申请号:CN201510885400.X

    申请日:2015-12-04

    Abstract: 本发明提供了一种棉花启动子GbU6‑7PS及应用,该启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,其互补链的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示;本发明棉花启动子GbU6‑7PS通过进行第一轮PCR扩增获得覆盖全长GbU6‑7启动子序列的片段,得到GbU6‑7P;再通过第二轮PCR扩增,以GbU6‑7P为供体质粒模板,以GbU6‑5P::GUS为受体质粒模板,采用Transfer PCR方法对GbU6‑7P启动子进行截短克隆后得到。本发明的棉花启动子GbU6‑7PS不仅适合用于棉花,而且片段很短,长度只有190bp,符合构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的要求,能显著提高sgRNA的转录水平,进而可能提高基因组编辑效率。

    确定棉纤维发育过程中上调基因和下调基因的方法

    公开(公告)号:CN105296604A

    公开(公告)日:2016-02-03

    申请号:CN201410366425.4

    申请日:2014-07-29

    Abstract: 本发明提供了一种确定在棉花纤维发育过程中上调或者下调基因的方法,包括:分别从处于棉纤维发育第一时期和第二时期的样本中获得第一转录组和第二转录组,测序获得第一转录组测序数据和第二转录组测序数据;分别基于第一转录组测序数据和第二转录组测序数据进行一级组装,获得第一和第二一级组装数据;合并第一和第二一级组装数据,利用第一一级组装数据和第二一级组装数据中有重叠的一级基因进行二级组装,获得二级组装数据;基于二级组装数据和参考基因的重叠关系进行三级组装,获得三级组装数据;计算三级组装数据中各三级基因在两样本中的表达量,根据表达量的差异是否显著,获得差异表达基因,确定在棉纤维发育过程中的上调基因或者下调基因。

    棉花中植物病毒介导的ABE碱基编辑系统的建立与应用

    公开(公告)号:CN119432902A

    公开(公告)日:2025-02-14

    申请号:CN202411539441.9

    申请日:2024-10-31

    Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域,尤其涉及一种棉花中植物病毒介导的ABE碱基编辑系统的建立与应用。本发明以CLCrV作为递送媒介,nCas9‑TadA7.10‑OE棉花作为转化受体,构建基于CLCrV介导的ABE碱基编辑系统。基因表达量结果显示nCas9在不同转基因株系中稳定遗传表达。将构建好的不同CLCrV‑ABEs病毒载体接种nC as9‑TadA7.10‑OE棉花并进行突变检测,深度测序结果表明CLCrV‑AtU6‑26::sgGhPEBP‑ABE能有效引起GhPEBP基因靶位点A碱基向G碱基的转换,编辑效率为6.18%~29.26%。同时,在GhPEBP发生碱基编辑的植株中进行脱靶检测,结果显示并没有在预测的潜在脱靶位点上检测到脱靶现象,表明CLCrV介导的ABE碱基编辑系统具有一定的基因编辑特异性。棉花中植物病毒介导的ABE碱基编辑系统的建立为在棉花中筛选高效sgRNAs以及棉花分子设计育种提供了有利技术工具。

    棉花中同时实现基因沉默和基因编辑的方法

    公开(公告)号:CN118440986A

    公开(公告)日:2024-08-06

    申请号:CN202410694225.5

    申请日:2024-05-31

    Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域,尤其涉及一种棉花中同时实现基因沉默和基因编辑的方法。本发明基于CLCrV和TRV介导的在棉花中同时实现基因沉默和基因编辑技术体系的建立,为后期沉默GhWUS基因表达并借助VIGE系统获得可遗传的基因编辑提供了重要的技术工具。TRV和CLCrV作为VIGS载体使用时,基因沉默效率会随着外源片段长度的增加而沉默效果越好,沉默表型也逐渐增强,但当外源片段长度超过1000bp时,完全没有沉默表型。此外,以这两种植物病毒作为VIGE载体时也会受到病毒自身承载力的限制,随着沉默片段的增长,可能会降低sgRNA在棉花体内系统的表达,导致基因编辑效率降低。

    一种棉花GhBsr-k1基因的应用
    9.
    发明公开

    公开(公告)号:CN111154794A

    公开(公告)日:2020-05-15

    申请号:CN202010039499.2

    申请日:2020-01-15

    Abstract: 本发明公开了提供一种棉花GhBsr-k1基因的应用,本发明根据同源基因的序列信息,采用RT-PCR方法从棉花中克隆得到了一个基因,命名为GhBsr-k1,如SEQ ID NO:1所示,对该基因进行表达模式分析和VIGS介导功能验证,结果表明GhBsr-k1在棉花抗黄萎病和/或枯萎病中发挥重要的负调控作用,通过沉默GhBsr-k1基因后,棉花增强了对黄萎病和枯萎病的抗性,表明该基因可用于棉花广谱抗病育种中,通过创制Ghbsr-k1的棉花突变体材料,以期大大增强棉花对黄萎病和/或枯萎病的抗性,从而减少每年因棉花病害对棉花产业所造成的直接经济损失。

    一种棉花启动子GbU6-5PS及应用

    公开(公告)号:CN105779449A

    公开(公告)日:2016-07-20

    申请号:CN201510885425.X

    申请日:2015-12-04

    Abstract: 本发明提供了一种棉花启动子GbU6?5PS及应用,该棉花启动子GbU6?5PS的正反链如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示,该启动子通过第一轮PCR扩增获得覆盖全长GbU6?5启动子序列的片段,然后通过第二步进行第二轮PCR扩增,以GbU6?5P为供体质粒模板,以AtU6?26SK为受体质粒模板,采用Transfer PCR方法对GbU6?5P启动子进行截短克隆得到。本发明的棉花启动子GbU6?5PS不仅适合用于棉花,而且片段很短,长度只有105bp,符合构建CRISPR/Cas9基因组编辑载体的要求,能显著提高sgRNA的转录水平,进而可能提高基因组编辑效率。

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