公开(公告)号：CN110055254A

公开(公告)日：2019-07-26

申请号：CN201910352557.4

申请日：2019-04-28

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 孙建和 ,  程玉强 ,  伦敏翔 ,  严亚贤

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明公开了一种靶向敲除鸡IRF7基因的方法及其在疫苗制备中的应用；基于CRISPR/Cas9，设计针对鸡IRF7基因的gRNA靶序列并连接至VK001-02质粒，获得鸡IRF7基因打靶载体；利用脂质体将打靶载体转染至鸡成纤维细胞中。通过嘌呤霉素筛选转染成功的细胞后，经有限倍比稀释法筛选获得敲除chIRF7基因的鸡成纤维细胞。该敲除细胞系经TCID50验证表明其可使病毒滴度增高。该方法适用于鸡天然免疫模式识别受体所介导的干扰素表达通路中重要转录因子IRF7的作用及功能的研究。同时本发明所构建的敲除细胞系可使许多先天免疫通路所介导的干扰素β表达水平下调，利于病毒繁殖，可用于疫苗制备中病毒的扩增。

公开(公告)号：CN110055254B

公开(公告)日：2021-06-18

申请号：CN201910352557.4

申请日：2019-04-28

Applicant: 上海交通大学

Inventor： 孙建和 ,  程玉强 ,  伦敏翔 ,  严亚贤

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N5/10 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明公开了一种靶向敲除鸡IRF7基因的方法及其在疫苗制备中的应用；基于CRISPR/Cas9，设计针对鸡IRF7基因的gRNA靶序列并连接至VK001‑02质粒，获得鸡IRF7基因打靶载体；利用脂质体将打靶载体转染至鸡成纤维细胞中。通过嘌呤霉素筛选转染成功的细胞后，经有限倍比稀释法筛选获得敲除chIRF7基因的鸡成纤维细胞。该敲除细胞系经TCID50验证表明其可使病毒滴度增高。该方法适用于鸡天然免疫模式识别受体所介导的干扰素表达通路中重要转录因子IRF7的作用及功能的研究。同时本发明所构建的敲除细胞系可使许多先天免疫通路所介导的干扰素β表达水平下调，利于病毒繁殖，可用于疫苗制备中病毒的扩增。