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公开(公告)号：CN116162692A
公开(公告)日：2023-05-26
申请号：CN202310055436.X
申请日：2023-01-18
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/6876 , C12Q1/6851 , C12N15/11
摘要： 本发明涉及一种端粒酶催化亚基TERT表达量检测试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括端粒酶TERT基因和内参GAPDH基因的RT‑PCR引物及探针、端粒酶TERT基因和内参GAPDH基因特异性的逆转录引物、阳性对照质控品和阴性对照质控品。本发明选择两种不同颜色标记的TaqMan探针分别检测内参基因及端粒酶cDNA，端粒酶活性检测准确度可达98％以上，准确度远高于现有的端粒酶活性检测技术；定量PCR法全程闭环操作，无产物交叉污染，操作简单，具有良好的市场应用前景。
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公开(公告)号：CN105695581B
公开(公告)日：2020-03-10
申请号：CN201610136155.7
申请日：2016-03-10
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/6869
摘要： 本发明涉及一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，包括：按照多个基因的相对表达量将相应的PCR引物分为两组，并在组内调整引物浓度比例；构建标准品竞争性模板和待测样品竞争性模板，进行三轮多重竞争性PCR反应；混合第三轮反应产物作为二代测试平台文库上机测序，提取数据并分析，即可得到不同样本间多个基因相对表达量差异。本发明基于高速发展的二代测序平台，准确快速定量目标模板和内参照模板，并可以同时对多个样本进行5个目的基因表达差异分析，流程简单易行，价格低廉；当需要分析多样本间多基因表达差异时，不失为一种具有高准确度，通量适中，成本廉价的方法。
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公开(公告)号：CN116144743B
公开(公告)日：2024-10-22
申请号：CN202211621752.0
申请日：2022-12-16
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/6858 , C12Q1/6876 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种基于多重长PCR结合高通量测序同时实现多个同源序列SNP分型的引物、试剂盒及方法。本发明通过跨过同源序列中SNP的侧翼序列(约200bp)，根据特定的引物设计原则设计特异性的多重长PCR扩增引物(2000‑3000bp)，扩增采用特异性和扩增效率较高的聚合酶并参考降落PCR反应条件做多重长PCR反应，多重长PCR产物可用于基于NGS测序平台的SNP分型鉴定。本发明的方法基于多重长PCR反应和巢式多重PCR反应，可同时实现对多个同源序列SNP精准分型，克服了KASP和三引物等位基因PCR技术通量小的缺点；相比于全基因测序，本发明只扩增目的序列，具有较低的成本和较高的性价比。
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公开(公告)号：CN106854680A
公开(公告)日：2017-06-16
申请号：CN201710160439.4
申请日：2017-03-17
申请人： 上海星耀医学科技发展有限公司 , 上海翼和应用生物技术有限公司 , 东华大学
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6858 , C12Q2537/143 , C12Q2545/101 , C12Q2561/125
摘要： 本发明提供了CYP2C19基因*2、*3、*17位点的多态性检测试剂盒，试剂盒包括PCR缓冲液，DNA聚合酶，LDR缓冲液，DNA连接酶，阳性对照，阴性对照。本发明可对提取好的DNA直接进行PCR‑LDR反应，对样本中的CYP2C19基因进行定性检测，并依靠内参基因序列作为内对照、利用UDG酶预防污染。本发明的试剂盒扩增方法简单、程序简短、操作简便、预防污染，检测结果特异性强、敏感度高、结果明晰、可信度高，可用于全血中CYP2C19基因定性检测。
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公开(公告)号：CN105695581A
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201610136155.7
申请日：2016-03-10
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明涉及一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，包括：按照多个基因的相对表达量将相应的PCR引物分为两组，并在组内调整引物浓度比例；构建标准品竞争性模板和待测样品竞争性模板，进行三轮多重竞争性PCR反应；混合第三轮反应产物作为二代测试平台文库上机测序，提取数据并分析，即可得到不同样本间多个基因相对表达量差异。本发明基于高速发展的二代测序平台，准确快速定量目标模板和内参照模板，并可以同时对多个样本进行5个目的基因表达差异分析，流程简单易行，价格低廉；当需要分析多样本间多基因表达差异时，不失为一种具有高准确度，通量适中，成本廉价的方法。
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公开(公告)号：CN118064558A
公开(公告)日：2024-05-24
申请号：CN202410124430.8
申请日：2024-01-29
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/6851
摘要： 本申请涉及分子检测领域，公开了一种利用实时荧光定量PCR技术精确检测端粒绝对长度的方法，包括以下步骤：1，合成端粒引物和内参引物；2，提取基因组DNA；3，qPCR扩增；4，以标准品的端粒或者内参CT值作为横坐标，标准品3个浓度梯度的log2为纵坐标构建端粒和内参的拟合方程，待测样本与校正品带入拟合方程分别计算端粒T/S值，校正品的绝对长度/检测长度得到校正系数，待测样本的T/S值都要用校正系数进行校正，样本的绝对长度利用校正后T/S*标准品绝对长度得到。本申请的方法，检测结果的稳定性大大提高，且检测结果更加准确，实现了利用实时荧光定量PCR技术个性化检测端粒绝对长度。
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公开(公告)号：CN116144743A
公开(公告)日：2023-05-23
申请号：CN202211621752.0
申请日：2022-12-16
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/6858 , C12Q1/6876 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种基于多重长PCR结合高通量测序同时实现多个同源序列SNP分型的引物、试剂盒及方法。本发明通过跨过同源序列中SNP的侧翼序列(约200bp)，根据特定的引物设计原则设计特异性的多重长PCR扩增引物(2000‑3000bp)，扩增采用特异性和扩增效率较高的聚合酶并参考降落PCR反应条件做多重长PCR反应，多重长PCR产物可用于基于NGS测序平台的SNP分型鉴定。本发明的方法基于多重长PCR反应和巢式多重PCR反应，可同时实现对多个同源序列SNP精准分型，克服了KASP和三引物等位基因PCR技术通量小的缺点；相比于全基因测序，本发明只扩增目的序列，具有较低的成本和较高的性价比。
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公开(公告)号：CN114703212A
公开(公告)日：2022-07-05
申请号：CN202210194874.X
申请日：2022-03-01
申请人： 东华大学
摘要： 本发明公开了一种运用特定区段随机突变法改造漆酶的方法及漆酶菌株lac123。本发明通过分析，选定LAC1第二结构域和第三结构域靠近漆酶活性位点附近的重要功能区段作为靶标序列，在对该序列DNA进行化学合成时，采用简并引物法在特定的若干个碱基位点引入随机突变，并将合成好的随机片段通过同源重组的方法，对野生酶的相同片段进行替换，构建包含特异区段特定位点DNA序列的随机突变库，通过二代测序对库容量进行检测，并对随机突变库中的大肠杆菌克隆进行漆酶活性的批量筛选，初筛到了5株酶活有所提升的漆酶，经过摇瓶复筛得到一株酶活提升2.3倍的突变漆酶菌株LAC123，其表达蛋白序列如SEQ ID NO:3所示。
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公开(公告)号：CN106979938A
公开(公告)日：2017-07-25
申请号：CN201710139424.X
申请日：2017-03-09
申请人： 东华大学
IPC分类号： G01N21/64
CPC分类号： G01N21/6486
摘要： 本发明提供了一种利用流式细胞仪进行目的基因表达定量检测的方法，在表达待研究的目的基因的细胞中，敲入红色荧光蛋白基因；在目的基因的阅读框中，敲入绿色荧光蛋白基因；使红、绿色荧光蛋白基因与目的基因同时表达，但彼此独立形成各自的蛋白；所形成的能同时表达红、绿两种荧光蛋白的细胞用于对影响目的基因表达的外部因素进行筛选；用流式细胞仪定量检测细胞的绿色荧光信号的强弱，再用其红色荧光信号值进行均一化，从而对外部因素对目的基因表达的影响进行定量比较，定量检测出影响目的基因表达的外部因素。本方法能同时比较细胞在多种处理条件下，特定基因的表达量差异，在较高通量和较短时间内对基因表达的影响因素进行高灵敏度的筛选。
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公开(公告)号：CN104170792A
公开(公告)日：2014-12-03
申请号：CN201410397040.4
申请日：2014-08-13
申请人： 东华大学
摘要： 本发明涉及一种基于ZZ2小家鼠来源的1号染色体替换B6-Chr1ZZ2/Xiao小鼠模型的构建方法，包括：将ZZ2小鼠与小鼠C57BL/6J杂交，获得F1代，取F1代小鼠与C57BL/6J回交，获得F2代，通过基因分型筛选出整个1号染色体为杂合状态的小鼠；F2代小鼠与C57BL/6J回交，以相同的方式回交，筛选10代后，形成1号染色体为杂合状态，其余染色体均为纯合C57BL/6J基因型的小鼠群体；鉴定回交小鼠的基因DNA；1号染色体为ZZ2与B6杂合状态的回交小鼠经过10代回交后，育成携带ZZ2小鼠1号染色体的同源基因导入近交系，通过兄妹自交和基因鉴定筛选，即得。
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