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公开(公告)号：CN106854680A
公开(公告)日：2017-06-16
申请号：CN201710160439.4
申请日：2017-03-17
申请人： 上海星耀医学科技发展有限公司 , 上海翼和应用生物技术有限公司 , 东华大学
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6858 , C12Q2537/143 , C12Q2545/101 , C12Q2561/125
摘要： 本发明提供了CYP2C19基因*2、*3、*17位点的多态性检测试剂盒，试剂盒包括PCR缓冲液，DNA聚合酶，LDR缓冲液，DNA连接酶，阳性对照，阴性对照。本发明可对提取好的DNA直接进行PCR‑LDR反应，对样本中的CYP2C19基因进行定性检测，并依靠内参基因序列作为内对照、利用UDG酶预防污染。本发明的试剂盒扩增方法简单、程序简短、操作简便、预防污染，检测结果特异性强、敏感度高、结果明晰、可信度高，可用于全血中CYP2C19基因定性检测。
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公开(公告)号：CN116162692A
公开(公告)日：2023-05-26
申请号：CN202310055436.X
申请日：2023-01-18
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/6876 , C12Q1/6851 , C12N15/11
摘要： 本发明涉及一种端粒酶催化亚基TERT表达量检测试剂盒及其检测方法，所述试剂盒包括端粒酶TERT基因和内参GAPDH基因的RT‑PCR引物及探针、端粒酶TERT基因和内参GAPDH基因特异性的逆转录引物、阳性对照质控品和阴性对照质控品。本发明选择两种不同颜色标记的TaqMan探针分别检测内参基因及端粒酶cDNA，端粒酶活性检测准确度可达98％以上，准确度远高于现有的端粒酶活性检测技术；定量PCR法全程闭环操作，无产物交叉污染，操作简单，具有良好的市场应用前景。
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公开(公告)号：CN105695581B
公开(公告)日：2020-03-10
申请号：CN201610136155.7
申请日：2016-03-10
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/6869
摘要： 本发明涉及一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，包括：按照多个基因的相对表达量将相应的PCR引物分为两组，并在组内调整引物浓度比例；构建标准品竞争性模板和待测样品竞争性模板，进行三轮多重竞争性PCR反应；混合第三轮反应产物作为二代测试平台文库上机测序，提取数据并分析，即可得到不同样本间多个基因相对表达量差异。本发明基于高速发展的二代测序平台，准确快速定量目标模板和内参照模板，并可以同时对多个样本进行5个目的基因表达差异分析，流程简单易行，价格低廉；当需要分析多样本间多基因表达差异时，不失为一种具有高准确度，通量适中，成本廉价的方法。
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公开(公告)号：CN107937493A
公开(公告)日：2018-04-20
申请号：CN201711277458.1
申请日：2017-12-06
申请人： 上海翼和应用生物技术有限公司 , 东华大学
IPC分类号： C12Q1/6858 , C12N15/11
CPC分类号： C12Q1/6858 , C12Q2531/113 , C12Q2525/301 , C12Q2563/107 , C12Q2537/143
摘要： 本发明涉及一种发夹修饰的AS-PCR引物、试剂盒及其在SNP检测中的应用。在一个PCR内即可完成基因型识别的扩增，包括在前两个循环利用发夹结构的引物，减少多重二聚体的产生，同时发夹的存在提高了3’末端碱基识别的特异性；以及随着外侧通用荧光引物在后续循环的引入，不同序列的引物识别不同基因型目的片段的同时，不同位点也可同时进行扩增，即一套荧光引物即可进行多重检测，增加了通量。本发明不仅改善了AS-PCR末端碱基错配的分辨率，提高了反应的灵敏度，同时也是一种操作更方便，价格更合理的单核苷酸多态性检测方法。
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公开(公告)号：CN107937493B
公开(公告)日：2021-08-31
申请号：CN201711277458.1
申请日：2017-12-06
申请人： 上海翼和应用生物技术有限公司 , 东华大学
IPC分类号： C12Q1/6858 , C12N15/11
摘要： 本发明涉及一种发夹修饰的AS‑PCR引物、试剂盒及其在SNP检测中的应用。在一个PCR内即可完成基因型识别的扩增，包括在前两个循环利用发夹结构的引物，减少多重二聚体的产生，同时发夹的存在提高了3’末端碱基识别的特异性；以及随着外侧通用荧光引物在后续循环的引入，不同序列的引物识别不同基因型目的片段的同时，不同位点也可同时进行扩增，即一套荧光引物即可进行多重检测，增加了通量。本发明不仅改善了AS‑PCR末端碱基错配的分辨率，提高了反应的灵敏度，同时也是一种操作更方便，价格更合理的单核苷酸多态性检测方法。
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公开(公告)号：CN109852612A
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201910141427.6
申请日：2019-02-26
申请人： 上海翼和应用生物技术有限公司 , 东华大学
IPC分类号： C12N15/11 , C12Q1/6853 , C12Q1/6858
摘要： 本发明涉及一种结合通用荧光引物的发夹修饰引物、试剂盒以及在单核苷酸多态性检测中的应用。所述发夹修饰引物包括成发夹序列、通用荧光引物结合序列和特异序列。本发明提供的发夹修饰引物价格低廉且特异性高，运用通用的荧光引物大大降低成本，所需要的其他实验耗材也廉价易得；一次PCR后进行毛细管电泳，可以直观的看到基因型结果，缩短检测周期，提高检测效率；本发明运用通用型荧光探针，针对不同位点只需要设计发夹引物即可，大大降低研发成本。
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公开(公告)号：CN105219766B
公开(公告)日：2017-12-22
申请号：CN201510761091.5
申请日：2015-11-10
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
摘要： 本发明涉及一种三轮扩增的多重PCR方法、引物及其试剂盒，以及在建立二代测序平台文库的用途。在前两轮PCR反应时，将低浓度的特异引物尽可能地消耗，以减少不同扩增子的差异、提高多重PCR产物的均一性。第三轮PCR反应时添加携带不同条形码序列的接头引物以标示不同模板，而不同的接头引物携带相同的通用扩增引物，保证不同模板扩增效率一致，以减少不同模板扩增产物的差异。不仅改善了普通多重PCR扩增均一性差的问题，而且可以快速方便的完成测序文库的构建。
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公开(公告)号：CN116144743B
公开(公告)日：2024-10-22
申请号：CN202211621752.0
申请日：2022-12-16
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/6858 , C12Q1/6876 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了一种基于多重长PCR结合高通量测序同时实现多个同源序列SNP分型的引物、试剂盒及方法。本发明通过跨过同源序列中SNP的侧翼序列(约200bp)，根据特定的引物设计原则设计特异性的多重长PCR扩增引物(2000‑3000bp)，扩增采用特异性和扩增效率较高的聚合酶并参考降落PCR反应条件做多重长PCR反应，多重长PCR产物可用于基于NGS测序平台的SNP分型鉴定。本发明的方法基于多重长PCR反应和巢式多重PCR反应，可同时实现对多个同源序列SNP精准分型，克服了KASP和三引物等位基因PCR技术通量小的缺点；相比于全基因测序，本发明只扩增目的序列，具有较低的成本和较高的性价比。
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公开(公告)号：CN108103164A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201810059593.7
申请日：2018-01-22
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/6858
摘要： 本发明利用多重荧光竞争性PCR对多个目标基因或位点进行拷贝数变异检测，以多重PCR取代人工合成或质粒构建进行内参文库构建。针对目标基因或位点和拷贝数确定的内参序列设计引物，区分序列以示区分，同时在特异引物的上下游5’端分别添加上下游通用序列。第一轮扩增构建文库后，将内参文库和检测文库混合，进行通用引物的第二轮扩增。利用检测文库和内参文库的目标基因或位点的荧光比值确定目标基因或位点的拷贝数。减少了竞争性PCR需要准确定量和稀释内参文库的过程，使多重荧光竞争性PCR替代了复杂的多重连接探针扩增。
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公开(公告)号：CN105695581A
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201610136155.7
申请日：2016-03-10
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明涉及一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，包括：按照多个基因的相对表达量将相应的PCR引物分为两组，并在组内调整引物浓度比例；构建标准品竞争性模板和待测样品竞争性模板，进行三轮多重竞争性PCR反应；混合第三轮反应产物作为二代测试平台文库上机测序，提取数据并分析，即可得到不同样本间多个基因相对表达量差异。本发明基于高速发展的二代测序平台，准确快速定量目标模板和内参照模板，并可以同时对多个样本进行5个目的基因表达差异分析，流程简单易行，价格低廉；当需要分析多样本间多基因表达差异时，不失为一种具有高准确度，通量适中，成本廉价的方法。
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