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公开(公告)号：CN105695581A
公开(公告)日：2016-06-22
申请号：CN201610136155.7
申请日：2016-03-10
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明涉及一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，包括：按照多个基因的相对表达量将相应的PCR引物分为两组，并在组内调整引物浓度比例；构建标准品竞争性模板和待测样品竞争性模板，进行三轮多重竞争性PCR反应；混合第三轮反应产物作为二代测试平台文库上机测序，提取数据并分析，即可得到不同样本间多个基因相对表达量差异。本发明基于高速发展的二代测序平台，准确快速定量目标模板和内参照模板，并可以同时对多个样本进行5个目的基因表达差异分析，流程简单易行，价格低廉；当需要分析多样本间多基因表达差异时，不失为一种具有高准确度，通量适中，成本廉价的方法。
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公开(公告)号：CN105695581B
公开(公告)日：2020-03-10
申请号：CN201610136155.7
申请日：2016-03-10
申请人： 东华大学 , 上海翼和应用生物技术有限公司
IPC分类号： C12Q1/6869
摘要： 本发明涉及一种基于二代测试平台的中通量基因表达分析方法，包括：按照多个基因的相对表达量将相应的PCR引物分为两组，并在组内调整引物浓度比例；构建标准品竞争性模板和待测样品竞争性模板，进行三轮多重竞争性PCR反应；混合第三轮反应产物作为二代测试平台文库上机测序，提取数据并分析，即可得到不同样本间多个基因相对表达量差异。本发明基于高速发展的二代测序平台，准确快速定量目标模板和内参照模板，并可以同时对多个样本进行5个目的基因表达差异分析，流程简单易行，价格低廉；当需要分析多样本间多基因表达差异时，不失为一种具有高准确度，通量适中，成本廉价的方法。
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公开(公告)号：CN107937493A
公开(公告)日：2018-04-20
申请号：CN201711277458.1
申请日：2017-12-06
申请人： 上海翼和应用生物技术有限公司 , 东华大学
IPC分类号： C12Q1/6858 , C12N15/11
CPC分类号： C12Q1/6858 , C12Q2531/113 , C12Q2525/301 , C12Q2563/107 , C12Q2537/143
摘要： 本发明涉及一种发夹修饰的AS-PCR引物、试剂盒及其在SNP检测中的应用。在一个PCR内即可完成基因型识别的扩增，包括在前两个循环利用发夹结构的引物，减少多重二聚体的产生，同时发夹的存在提高了3’末端碱基识别的特异性；以及随着外侧通用荧光引物在后续循环的引入，不同序列的引物识别不同基因型目的片段的同时，不同位点也可同时进行扩增，即一套荧光引物即可进行多重检测，增加了通量。本发明不仅改善了AS-PCR末端碱基错配的分辨率，提高了反应的灵敏度，同时也是一种操作更方便，价格更合理的单核苷酸多态性检测方法。
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公开(公告)号：CN107937493B
公开(公告)日：2021-08-31
申请号：CN201711277458.1
申请日：2017-12-06
申请人： 上海翼和应用生物技术有限公司 , 东华大学
IPC分类号： C12Q1/6858 , C12N15/11
摘要： 本发明涉及一种发夹修饰的AS‑PCR引物、试剂盒及其在SNP检测中的应用。在一个PCR内即可完成基因型识别的扩增，包括在前两个循环利用发夹结构的引物，减少多重二聚体的产生，同时发夹的存在提高了3’末端碱基识别的特异性；以及随着外侧通用荧光引物在后续循环的引入，不同序列的引物识别不同基因型目的片段的同时，不同位点也可同时进行扩增，即一套荧光引物即可进行多重检测，增加了通量。本发明不仅改善了AS‑PCR末端碱基错配的分辨率，提高了反应的灵敏度，同时也是一种操作更方便，价格更合理的单核苷酸多态性检测方法。
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公开(公告)号：CN105177126B
公开(公告)日：2018-12-04
申请号：CN201510520015.5
申请日：2015-08-21
申请人： 东华大学
IPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/686
摘要： 本发明涉及一种利用荧光PCR技术对小鼠的分型鉴定方法，利用荧光PCR引物，经PCR扩增后将产物与已知片段大小的ROX混合，利用377测序，使用Genemapper软件计算出PCR产物的大小，从而达到鉴定小鼠基因型的目的，即可。本发明简单直接准确的鉴定出Crispr/Cas9敲除的mircoRNA小鼠。
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公开(公告)号：CN104372083A
公开(公告)日：2015-02-25
申请号：CN201410606864.8
申请日：2014-10-31
申请人： 东华大学
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明涉及一种逆转录miR-505的茎环引物的设计方法，包括：以miRNA-505-3P基因为特异性的转录本，分别将该逆转录茎环引物的茎部碱基对的数量和环部的碱基个数规律的设计对应的几个梯度，经过对miRNA-505-3P的逆转录和real time-PCR检测，最终筛选出一个对于miRNA-505-3P基因特异性逆转录时效率最佳的逆转录茎环引物。本发明避免了对成熟体检测的干扰，通过茎环引物在茎部和环部的梯度性的调整，可以分别明确的看出环部碱基的结构和茎部碱基的结构分别对逆转录茎环引物的逆转录效率的影响，因此更容易设计出合理高效的逆转录引物。
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公开(公告)号：CN104372083B
公开(公告)日：2016-11-16
申请号：CN201410606864.8
申请日：2014-10-31
申请人： 东华大学
IPC分类号： C12Q1/68
摘要： 本发明涉及一种逆转录miR‑505的茎环引物的设计方法，包括：以miRNA‑505‑3P基因为特异性的转录本，分别将该逆转录茎环引物的茎部碱基对的数量和环部的碱基个数规律的设计对应的几个梯度，经过对miRNA‑505‑3P的逆转录和real time‑PCR检测，最终筛选出一个对于miRNA‑505‑3P基因特异性逆转录时效率最佳的逆转录茎环引物。本发明避免了对成熟体检测的干扰，通过茎环引物在茎部和环部的梯度性的调整，可以分别明确的看出环部碱基的结构和茎部碱基的结构分别对逆转录茎环引物的逆转录效率的影响，因此更容易设计出合理高效的逆转录引物。
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公开(公告)号：CN105177126A
公开(公告)日：2015-12-23
申请号：CN201510520015.5
申请日：2015-08-21
申请人： 东华大学
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/6888 , C12Q1/686 , C12Q2600/158 , C12Q2600/178 , C12Q2545/101 , C12Q2563/107 , C12Q2565/125
摘要： 本发明涉及一种利用荧光PCR技术对小鼠的分型鉴定方法，利用荧光PCR引物，经PCR扩增后将产物与已知片段大小的ROX混合，利用377测序，使用Genemapper软件计算出PCR产物的大小，从而达到鉴定小鼠基因型的目的，即可。本发明简单直接准确的鉴定出Crispr/Cas9敲除的mircoRNA小鼠。
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