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公开(公告)号：CN112941013A
公开(公告)日：2021-06-11
申请号：CN202110193781.0
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
Abstract: 本发明公开了一种Net1基因细胞模型的构建方法与应用，属于生物技术领域。一种Net1基因细胞模型的构建方法，包括以下步骤：步骤1：培养OC‑1细胞，用siRNA敲减所述OC‑1细胞中的Net1基因，检测敲减效率；步骤2：Lgr5‑EGFP小鼠耳蜗，消化成单细胞后，分选出表达Lgr5细胞，在细胞培养皿中培养；通过siRNA敲除所述表达Lgr5细胞中的Net1基因；步骤3：进行细胞成球试验，观察并量化球形的数量和直径来评估所述表达Lgr5细胞的增殖、分化能力。
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公开(公告)号：CN112881711A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110193885.1
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: G01N33/68 , C12Q1/6851 , A61K49/00
Abstract: 本发明公开了一种基于调控信号通路的小鼠模型的构建方法及其应用，属于生物技术领域。一种小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：构建β‑catenin敲除、Notch1敲除、以及两者双敲除的小鼠模型。在鼠龄为0或1天的时候，注射tamoxifen与EdU，鼠龄为7天时，解剖所述小鼠的基底膜进行免疫荧光实验，用myosin7a抗体标记毛细胞，用Sox2抗体标记支持细胞，并且对EdU+Sox2与EdU+Myo7a均阳性的细胞进行计数统计；分别分离野生型对照组、β‑catenin过表达(β‑cat OE)、Notch1‑KO以及β‑cat OE/Notch1‑KO鼠龄7天天小鼠基底膜，分别提取其RNA进行测序。
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公开(公告)号：CN112870383A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110194456.6
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体的是Hippo调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。Hippo调控内耳干细胞增殖分化方法，包括以下步骤；一、在野生型小鼠中检测Hippo信号通路成员在耳蜗中的表达情况；二、在离体实验中研究Hippo信号对流式分选出的内耳干细胞增殖分化的调控机制；三、在离体实验中研究Hippo和Wnt信号对内耳干细胞的协同调控机制等。本发明使用Lgr5‑EGFP‑CreERT2工具鼠可使得内耳干细胞(Lgr5阳性细胞)的分离准确且大量，可达到较好的研究前提：分选出的小鼠Lgr5阳性内耳干细胞。此外，在离体实验中研究Hippo信号通路对分选出的内耳干细胞进行成球和分化实验后，可以深入探究Hippo信号通路在调控内耳干细胞增殖/分化及毛细胞再生中的具体作用机制。
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公开(公告)号：CN113230410A
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN202110648054.9
申请日：2021-06-10
Applicant: 东南大学
IPC: A61K45/06 , A61K31/4412 , A61K31/7036 , A61K31/702 , A61K31/7048 , A61P27/16 , A01K67/02
Abstract: 本发明公开了去铁酮在抑制氨基糖苷类药物的耳毒性中的应用，属于药物性耳聋领域。本发明公开了去铁酮(DFP)在保护氨基糖苷类药物引起的听力损失中的应用。所述的DFP是唯一口服有活性的铁螯合剂，临床用于治疗地中海贫血中的输血性铁过载。本发明首先研究了氨基糖苷类药物损伤，类毛细胞HEI‑OC1以及体外培养耳蜗组织中线粒体自噬发生水平，并在体外培养耳蜗组织上探究DFP调节线粒体自噬对毛细胞的保护作用，最后研究DFP对氨基糖苷类药物引起小鼠听力损失的保护作用，为治疗药物性耳聋提供新思路，为临床帮助患者恢复和重建听觉功能提供新靶点。
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公开(公告)号：CN112831500A
公开(公告)日：2021-05-25
申请号：CN202110194101.7
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: C12N15/113 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种Dkk3基因小鼠模型的构建方法与应用，属于生物技术领域。一种Dkk3基因小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：步骤1：培养OC‑1细胞；用siRNA敲减所述OC‑1细胞中的Dkk3基因，检测敲减效率；步骤2：取新生Lgr5‑EGFP小鼠耳蜗，消化成单细胞；从所述Lgr5‑EGFP细胞悬液中分选出Lgr5+细胞；步骤3：OC‑1细胞中敲低效率最佳的siRNA敲低Lgr5+细胞中的Dkk3基因；步骤4：进行细胞成球试验，观察并量化球形的数量和直径来评估Lgr5+细胞的增殖能力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112831500B
公开(公告)日：2023-08-18
申请号：CN202110194101.7
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: C12N15/113 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种Dkk3基因小鼠模型的构建方法与应用，属于生物技术领域。一种Dkk3基因小鼠模型的构建方法，包括以下步骤：步骤1：培养OC‑1细胞；用siRNA敲减所述OC‑1细胞中的Dkk3基因，检测敲减效率；步骤2：取新生Lgr5‑EGFP小鼠耳蜗，消化成单细胞；从所述Lgr5‑EGFP细胞悬液中分选出Lgr5+细胞；步骤3：OC‑1细胞中敲低效率最佳的siRNA敲低Lgr5+细胞中的Dkk3基因；步骤4：进行细胞成球试验，观察并量化球形的数量和直径来评估Lgr5+细胞的增殖能力。
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公开(公告)号：CN116574756A
公开(公告)日：2023-08-11
申请号：CN202310140860.4
申请日：2023-02-21
Applicant: 东南大学
IPC: C12N15/85 , C12N15/12 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种阅读障碍和耳聋疾病小鼠的构建方法及应用，属于生命科学耳鼻喉科学研究领域。该方法通过在Dyx1c1外显子2区域删除一段序列，从而使Dyx1c1失活，经繁殖培养后获得Dyx1c1敲除小鼠。与现有技术相比，本发明的方法只删除了Dyx1c1基因外显子2区域的部分序列，从而可以是幸存下来的Dyx1c1敲除小鼠存活更久。并且可以同时用于模拟研究阅读障碍和原发性纤毛运动障碍疾病特征，更适用于与耳聋相关的基础研究。
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公开(公告)号：CN115881224A
公开(公告)日：2023-03-31
申请号：CN202211617575.9
申请日：2022-12-15
Applicant: 东南大学
Abstract: 本发明公开了一种基于单细胞转录组的耳蜗毛细胞分析方法、系统和设备，属于听觉领域，包括：提取待检测的耳蜗基底膜细胞，对耳蜗基底膜细的顶中底三圈进行单细胞RNA测序并获取单细胞转录组数据；过滤单细胞转录组数据中唯一特征计数超过2500或少于200的细胞数据和有>5％的线粒体计数的细胞数据；对过滤后的单细胞转录组数据进行不同的PC数特征分析，确定下游分析的PC数；基于PC数对过滤后的单细胞转录组数据进行无监督聚类及降维；与现有技术相比，本申请对单个细胞的转录组进行扩增和测序从而获得单个细胞的基因表达谱，通过细胞之间基因表达的差异或相似程度将细胞群体分成不同亚群，能精确反映细胞间的异质性。
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公开(公告)号：CN112877413A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110194497.5
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
IPC: C12Q1/6876 , G01N33/68 , C12N15/12 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及内耳干细胞领域，具体的是Rassf2调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。调控方法，包括以下步骤：一、在野生型小鼠中检测Shh或Hippo和Rassf2在耳蜗中的表达情况；二、在离体实验中研究Shh或Hippo和Rassf2对流式分选出的内耳干细胞增殖分化的作用；三、在活体毛细胞新霉素损伤模型上，研究Shh或Hippo和Rassf2的作用。本发明使用Lgr5‑EGFP‑CreERT2工具鼠可使得内耳干细胞(Lgr5阳性细胞)的分离准确且大量，可达到较好的研究前提：分选出的小鼠Lgr5阳性内耳干细胞。此外，在离体实验中研究Shh、Hippo和Rassf2对分选出的内耳干细胞进行成球和分化实验后，可以深入探究Shh、Hippo和Rassf2在调控内耳干细胞增殖分化及毛细胞再生中的具体作用机制。
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公开(公告)号：CN112877367A
公开(公告)日：2021-06-01
申请号：CN202110194117.8
申请日：2021-02-20
Applicant: 东南大学
Abstract: 本发明涉及生物技术领域，具体的是Gpm6b调控内耳干细胞增殖分化方法及在毛细胞再生中的应用。分化方法的步骤：OC‑1细胞培养；siRNA敲低Gpm6b基因，采用N1301、N885、N1082三种不同的siRNA敲减OC‑1细胞中的Gpm6b基因；Lgr5+祖细胞的分离培养及Gpm6b基因敲低，Lgr5+祖细胞消化成单细胞后，采用流式细胞分选技术进行分选，经培养后再Gpm6b基因敲低；Gpm6b基因敲低对Lgr5+祖细胞增殖/分化的影响，采用细胞成球实验、EdU染色实验和免疫荧光实验研究Gpm6b基因敲减对Lgr5+细胞增殖/分化的影响，再评估Lgr5+细胞增殖、分化为毛细胞的能力；数据分析，采用GraphPadPrism 6进行数据统计分析。本发明敲低Gpm6b基因后对于Lgr5+细胞成球有抑制作用，即Gpm6b敲低抑制Lgr5+细胞增殖。而Gpm6b基因敲减对Lgr5+细胞分化再生毛细胞无调控作用。
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