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公开(公告)号：CN105622733A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610118109.4
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
CPC分类号： C07K14/21
摘要： 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac9的纯化方法。Vac9蛋白是铜绿假单胞菌细胞外膜蛋白，经重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析、Prescission Protease(PP酶)酶切、Phenyl HP层析、G 25层析、Q HP去内毒素等技术，获得高纯度的铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白Vac9。该发明纯化工艺简捷、容易放大、重复性好，所获目标蛋白纯度高，能够满足基因工程疫苗生产的需要，动物试验证明可有效刺激机体产生较高的体液免疫应答和良好的免疫保护作用。
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公开(公告)号：CN105647894A
公开(公告)日：2016-06-08
申请号：CN201610117826.5
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
CPC分类号： C12N9/52 , A61K39/104
摘要： 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac11的纯化方法。该蛋白为铜绿假单胞菌抗原分子的活性功能片段重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析、PP酶酶切、Q HP层析、G 25层析、Q HP层析等层析技术，获得高纯度的铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白Vac11。该发明纯化方法工艺简捷、容易放大、重复性好，所获目标蛋白纯度高，动物试验证明可有效刺激机体产生较高的体液免疫应答和良好的免疫保护作用。
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公开(公告)号：CN105669844B
公开(公告)日：2019-11-08
申请号：CN201610118225.6
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
摘要： 本发明提供了一种铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的纯化方法，所述方法包括：1)收集表达铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的菌体；2)将步骤1)收集的菌体破菌，并离心，收集上清；3)将步骤2)得到的上清通过GST亲和层析进行初纯化；4)将步骤3)处理后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化；5)将步骤4)纯化后的重组蛋白Vac33进行G25层析柱纯化；6)将步骤5)纯化后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化。本发明的纯化方法工艺简单，所获得目标蛋白纯度高，容易放大、重复性好，回收率较好。
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公开(公告)号：CN105622734B
公开(公告)日：2019-06-07
申请号：CN201610118286.2
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
摘要： 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac14的纯化方法。Vac14蛋白为铜绿假单胞菌抗原分子的活性功能片段重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析、PP酶酶切、SP HP层析、G 25层析、Q HP层析等技术，获得高纯度的铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白Vac14。该发明纯化工艺简捷、容易放大、重复性好，所获目标蛋白纯度高，动物试验证明可有效刺激机体产生较高的体液免疫应答和良好的免疫保护作用。
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公开(公告)号：CN105622734A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201610118286.2
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
CPC分类号： C07K14/21
摘要： 本发明公开了一种铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白疫苗Vac14的纯化方法。Vac14蛋白为铜绿假单胞菌抗原分子的活性功能片段重组融合，通过大肠杆菌基因工程菌表达获得。采用对基因工程菌进行高压破菌、GST亲和层析、PP酶酶切、SP HP层析、G 25层析、Q HP层析等技术，获得高纯度的铜绿假单胞菌(PA)重组亚单位基因工程蛋白Vac14。该发明纯化工艺简捷、容易放大、重复性好，所获目标蛋白纯度高，动物试验证明可有效刺激机体产生较高的体液免疫应答和良好的免疫保护作用。
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公开(公告)号：CN105669844A
公开(公告)日：2016-06-15
申请号：CN201610118225.6
申请日：2016-03-02
申请人： 中国人民解放军第三军医大学
摘要： 本发明提供了一种铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的纯化方法，所述方法包括：1)收集表达铜绿假单胞菌重组蛋白Vac33的菌体；2)将步骤1)收集的菌体破菌，并离心，收集上清；3)将步骤2)得到的上清通过GST亲和层析进行初纯化；4)将步骤3)处理后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化；5)将步骤4)纯化后的重组蛋白Vac33进行G25层析柱纯化；6)将步骤5)纯化后的重组蛋白Vac33进行Q HP层析纯化。本发明的纯化方法工艺简单，所获得目标蛋白纯度高，容易放大、重复性好，回收率较好。
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