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公开(公告)号：CN112029774A
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN202010826257.8
申请日：2020-08-17
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明涉及一种增强植物韧皮部RNP信号交流的伴侣蛋白与应用。本发明获得了一个新的韧皮部RNP信号交流辅助因子伴侣蛋白CCT复合体，通过根癌农杆菌梨叶片瞬时表达及发根农杆菌转基因方式证实缺少伴侣蛋白CCT复合体，明显减弱RNP复合体在韧皮部中的运输效率。通过伴侣蛋白CCT复合体的过量表达可快速提高RNP复合体在韧皮部中的交流，同时也可通过沉默伴侣蛋白CCT复合体减弱某些信号分子的长距离运输，使用协助因子促进RNP复合体通过嫁接口由砧木向接穗的远距离运输，人为操控砧木基因影响接穗性状，解决了RNP复合体在韧皮部中的运输性无法人为调控的问题，且能够普遍应用于各种类型植物。
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公开(公告)号：CN108611354B
公开(公告)日：2020-06-16
申请号：CN201810445842.6
申请日：2018-05-11
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/29 , C07K14/415 , C12Q1/6895 , C12Q1/686
摘要： 本发明涉及一种FT mRNA分子在同属植物砧穗间传递的分子鉴定方法，本发明提供的方法可实现快速、灵敏、准确性高、简便、经济实惠地去鉴定同源性很高的基因在砧木和接穗间能否进行长距离传递，具有广阔的市场前景。该方法过程简单，要求不高，耗时短，工作量较小，工作周期较小，效率高，花费便宜，一方面可为科研者节约金钱，另一方面，缩短实验时间，提高工作效率，且具有应用的广泛性与普遍性，可以大范围在同属植物上应用，解决了一般实验室无法通过聚丙烯酰胺凝胶以及垂直电泳槽对同属植物砧木和接穗间同源性很高的基因进行RT‑PCR‑dCAPS鉴定的问题，省去了转基因所耗费的时间，而RT‑PCR‑CAPS对基因序列要求也高，一般基因难以满足。
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公开(公告)号：CN108330182B
公开(公告)日：2020-04-10
申请号：CN201710040058.2
申请日：2017-01-18
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12Q1/6848 , C12N15/82 , C12N15/65
摘要： 本发明公开了一种mRNA分子在植物砧穗间传递的分子鉴定方法，涉及植物分子生物学领域。本发明构建基因携带荧光蛋白标签的载体进行转基因，将转基因砧木和野生型接穗在无菌玻璃瓶中进行微嫁接，由于接穗存在在潮湿的环境中易长出不定根的特性，通过激光共聚焦显微镜检测接穗不定根发出的荧光的有无，来判断基因是否发生了砧穗间远距离传递；或者通过巢氏PCR验证砧穗是否都出现特异性条带来判断基因是否发生了砧穗间远距离传递，最终实现了可直观观测基因在砧木和接穗间进行远距离传递的目的，本发明方法具有直观、快速、灵敏、准确性高，能够应用于各种植物基因而不受物种限制，在植物分子生物学领域具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN108611354A
公开(公告)日：2018-10-02
申请号：CN201810445842.6
申请日：2018-05-11
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/29 , C07K14/415 , C12Q1/6895 , C12Q1/686
摘要： 本发明涉及一种FT mRNA分子在同属植物砧穗间传递的分子鉴定方法，本发明提供的方法可实现快速、灵敏、准确性高、简便、经济实惠地去鉴定同源性很高的基因在砧木和接穗间能否进行长距离传递，具有广阔的市场前景。该方法过程简单，要求不高，耗时短，工作量较小，工作周期较小，效率高，花费便宜，一方面可为科研者节约金钱，另一方面，缩短实验时间，提高工作效率，且具有应用的广泛性与普遍性，可以大范围在同属植物上应用，解决了一般实验室无法通过聚丙烯酰胺凝胶以及垂直电泳槽对同属植物砧木和接穗间同源性很高的基因进行RT-PCR-dCAPS鉴定的问题，省去了转基因所耗费的时间，而RT-PCR-CAPS对基因序列要求也高，一般基因难以满足。
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公开(公告)号：CN107460200B
公开(公告)日：2020-07-28
申请号：CN201610390843.6
申请日：2016-06-02
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12N15/53 , C12Q1/6895 , C12N15/11
摘要： 本发明公开了HMGR基因mRNA在梨属砧穗间传递的分子鉴定方法，包括如下步骤：(1)鸭梨为接穗，杜梨为砧木进行试管苗微嫁接；(2)分别提取杜梨、鸭梨以及嫁接后砧木与接穗的总RNA，反转录成cDNA，PCR扩增HMGR基因的全长，以此为模板进行第二次PCR，得到各自的HMGR基因片段；两次PCR的上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1‑4所示；(3)限制性内切酶对第二次PCR产物进行酶切，比较嫁接前后的酶切谱图鉴定传递情况。本发明提供的方法快速、灵敏，准确性高，简便，能够应用于其他梨属植物。
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公开(公告)号：CN108330182A
公开(公告)日：2018-07-27
申请号：CN201710040058.2
申请日：2017-01-18
申请人： 中国农业大学
IPC分类号： C12Q1/6848 , C12N15/82 , C12N15/65
摘要： 本发明公开了一种mRNA分子在植物砧穗间传递的分子鉴定方法，涉及植物分子生物学领域。本发明构建基因携带荧光蛋白标签的载体进行转基因，将转基因砧木和野生型接穗在无菌玻璃瓶中进行微嫁接，由于接穗存在在潮湿的环境中易长出不定根的特性，通过激光共聚焦显微镜检测接穗不定根发出的荧光的有无，来判断基因是否发生了砧穗间远距离传递；或者通过巢氏PCR验证砧穗是否都出现特异性条带来判断基因是否发生了砧穗间远距离传递，最终实现了可直观观测基因在砧木和接穗间进行远距离传递的目的，本发明方法具有直观、快速、灵敏、准确性高，能够应用于各种植物基因而不受物种限制，在植物分子生物学领域具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN112592933B
公开(公告)日：2021-11-23
申请号：CN202011436357.6
申请日：2020-12-11
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明属于生物嫁接技术领域，涉及一种砧木改良方法及应用，包括：步骤1：合成传递基因；步骤2：将合成传递基因与功能基因构建到载体上；步骤3：以农杆菌侵染方式转基因的烟草为砧木，野生番茄为接穗，进行异源嫁接；步骤4：取嫁接口及不同位置茎段及花，提取植物总RNA，反转录成cDNA，RT‑PCR检测SlZFP2‑tRNAMet和SlZFP2‑3×CTCT等在异源嫁接体系中的运输情况；步骤5：调查转基因砧木上野生型番茄的分枝及开花情况。方法可应用在果树转基因砧木育种中，通过砧木转基因定点高效改良接穗性状，人为操控砧木基因，影响接穗性状，提高调控效率，缩短育种年限，减少人力物力成本，普遍应用于各类植物。
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公开(公告)号：CN112592933A
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN202011436357.6
申请日：2020-12-11
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明属于生物嫁接技术领域，涉及一种砧木改良方法及应用，包括：步骤1：合成传递基因；步骤2：将合成传递基因与功能基因构建到载体上；步骤3：以农杆菌侵染方式转基因的烟草为砧木，野生番茄为接穗，进行异源嫁接；步骤4：取嫁接口及不同位置茎段及花，提取植物总RNA，反转录成cDNA，RT‑PCR检测SlZFP2‑tRNAMet和SlZFP2‑3×CTCT等在异源嫁接体系中的运输情况；步骤5：调查转基因砧木上野生型番茄的分枝及开花情况。方法可应用在果树转基因砧木育种中，通过砧木转基因定点高效改良接穗性状，人为操控砧木基因，影响接穗性状，提高调控效率，缩短育种年限，减少人力物力成本，普遍应用于各类植物。
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公开(公告)号：CN111172322A
公开(公告)日：2020-05-19
申请号：CN202010016904.9
申请日：2020-01-08
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明涉及四种梨病毒病病原实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank公布的苹果茎沟病毒、苹果茎痘病毒、苹果褪绿叶斑病毒的CP基因和苹果锈果类病毒的全基因组的保守序列设计引物，建立了SYBR Green荧光定量PCR检测这四种病毒和进行阴阳性判断的方法。本发明的方法具有特异性强，检测准确，重复性好且成本低廉等特点。相比常规的逆转录聚合酶链式扩增反应检测技术，检测灵敏度提高100倍以上。
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公开(公告)号：CN107460200A
公开(公告)日：2017-12-12
申请号：CN201610390843.6
申请日：2016-06-02
申请人： 中国农业大学
摘要： 本发明公开了HMGR基因mRNA在梨属砧穗间传递的分子鉴定方法，包括如下步骤：(1)鸭梨为接穗，杜梨为砧木进行试管苗微嫁接；(2)分别提取杜梨、鸭梨以及嫁接后砧木与接穗的总RNA，反转录成cDNA，PCR扩增HMGR基因的全长，以此为模板进行第二次PCR，得到各自的HMGR基因片段；两次PCR的上下游引物序列分别如SEQ ID NO.1-4所示；(3)限制性内切酶对第二次PCR产物进行酶切，比较嫁接前后的酶切谱图鉴定传递情况。本发明提供的方法快速、灵敏，准确性高，简便，能够应用于其他梨属植物。
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