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公开(公告)号：CN117384965A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311148823.4
申请日：2023-09-07
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/867 , C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/64 , C12N15/54 , C12N7/01 , A61K39/275 , A61P31/20 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供牛结节性皮肤病病毒TK基因缺失毒株LSDV‑△TK的构建方法，包括以下步骤：构建缺失TK基因的pUC19T‑LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP‑△TK转移载体；构建绿色荧光标记毒株LSDV‑LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP‑△TK；利用Cre‑LoxP重组酶系统，构建TK基因缺失毒株LSDV‑△TK。本发明采用同源重组技术将LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP基因表达框定向插入LSDV毒株的病毒基因组TK基因处，构建绿色荧光标记毒株LSDV‑LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP‑△TK，采用Cre‑Loxp重组酶系统，将EGFP标签切除，构建LSDV‑△TK。
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公开(公告)号：CN114807195B
公开(公告)日：2024-05-24
申请号：CN202210405602.X
申请日：2022-04-18
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供了一种提高狂犬病病毒耐热稳定性和免疫效果的融合基因、重组狂犬病病毒及其应用，属于病毒技术领域。以狂犬病病毒SAD B19株为骨架，在基因组N与P基因之间插入矿化基因W6和G基因形成的融合基因，构建得到重组全长质粒pBNSP‑RV‑GW6和pBNSP‑RV‑W6G，并利用狂犬病的反向遗传操作系统拯救出含矿化基因和双G基因的重组狂犬病病毒。所述重组狂犬病病毒在细胞上稳定增殖，具有耐热稳定特性，免疫小鼠可以诱导产生较高的狂犬病病毒特异性抗体，能抵抗致死剂量狂犬病毒的攻击，同时具有耐热稳定和高效免疫效果，可以直接作为疫苗应用，具有较高的应用前景。
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公开(公告)号：CN117431269A
公开(公告)日：2024-01-23
申请号：CN202311219097.0
申请日：2023-09-21
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供牛结节性皮肤病病毒基因缺失毒株的构建方法，包括以下步骤：根据牛结节性皮肤病病毒LSDV基因序列设计左右同源臂的上下游引物；构建转移载体pUC57‑LSDVΔORF005‑008‑EGFP质粒；利用同源重组方法，构建牛结节性皮肤病病毒LSDV ORF005‑008基因缺失毒株。本发明通过IFN‑β双荧光素酶报告基因系统初步筛选出LSDV ORF006和LSDV ORF008蛋白具有抑制宿主天然免疫的功能，通过同源重组方法构建了rLSDVΔORF005‑008四基因缺失的重组病毒，该重组病毒能稳定传代，具有进一步试制新型疫苗的潜力。
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公开(公告)号：CN114807195A
公开(公告)日：2022-07-29
申请号：CN202210405602.X
申请日：2022-04-18
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明提供了一种提高狂犬病病毒耐热稳定性和免疫效果的融合基因、重组狂犬病病毒及其应用，属于病毒技术领域。以狂犬病病毒SAD B19株为骨架，在基因组N与P基因之间插入矿化基因W6和G基因形成的融合基因，构建得到重组全长质粒pBNSP‑RV‑GW6和pBNSP‑RV‑W6G，并利用狂犬病的反向遗传操作系统拯救出含矿化基因和双G基因的重组狂犬病病毒。所述重组狂犬病病毒在细胞上稳定增殖，具有耐热稳定特性，免疫小鼠可以诱导产生较高的狂犬病病毒特异性抗体，能抵抗致死剂量狂犬病毒的攻击，同时具有耐热稳定和高效免疫效果，可以直接作为疫苗应用，具有较高的应用前景。
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公开(公告)号：CN117384966A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311148990.9
申请日：2023-09-07
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N15/867 , C12N15/64 , C12N15/65 , C12N5/10
Abstract: 本发明提供稳定表达环化重组酶的MDBK细胞系的构建方法及应用，包括以下步骤：以质粒pcDNA3.1‑Cre的cDNA为模板，对Cre基因进行扩增；将扩增产物胶回收后，连接到EcoR I和BamH I双酶切的慢病毒穿梭质粒pLV‑Puro，得到慢病毒包装质粒；将慢病毒包装质粒进行慢病毒包装，将离心后的上清液感染MDBK细胞，经过细胞亚克隆筛选，得到一株稳定表达环化重组酶的MDBK细胞系MDBK‑Cre。本发明筛选得到的MDBK‑Cre细胞株呈现良好的催化重组生物学活性，能够特异性识别病毒基因组中的LoxP位点。本发明可以应用于病毒基因组中荧光标签的高效切除，保证病毒基因组中无标签蛋白的残留。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114525238A
公开(公告)日：2022-05-24
申请号：CN202210132301.4
申请日：2022-02-14
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C12N5/071 , C12N15/867 , C12N15/54 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一株牛皮肤成纤维永生化细胞系的建立方法及应用，属于细胞领域。所述建立方法包括：步骤1：将胎牛皮肤组织预处理后剪碎，用胰酶消化液消化，经过滤、离心后，收集细胞沉淀，将所述的细胞沉淀用10％FBS的DMEM培养基吹散，培养，待细胞贴壁稳定后，更换新鲜培养基，得到原代牛皮肤成纤维细胞；步骤2：克隆hTERT基因，并构建hTERT基因慢病毒载体，然后将所述hTERT基因慢病毒转导所述原代牛皮肤成纤维细胞，经培养、筛选、鉴定，得到牛皮肤成纤维永生化细胞系。本发明为牛结节性皮肤病病毒等大型反刍动物疫病提供了重要的基础研究和应用研究试验材料，为相关病毒的分离培养和检测提供了重要的技术平台。
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公开(公告)号：CN119345195A
公开(公告)日：2025-01-24
申请号：CN202411668686.1
申请日：2024-11-21
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: A61K31/4245 , A61P31/20
Abstract: 本发明属于生物医药技术领域，公开了一种TMP269或其药学上可接受的盐在制备抗牛结节性皮肤病病毒感染和治疗药物中的应用，本发明利用不同剂量TMP269孵育处理LSDV感染的不同阶段的MDBK细胞，通过蛋白免疫印迹(Westernblot)、实时荧光定量PCR实验(Quantitative Real‑time PCR)、组织细胞半数感染剂量(TCID50)和间接免疫荧光实验(Indirect immunofluorescence)检测了TMP269对LSDV感染MDBK细胞的影响，发现TMP269处理后能够显著抑制LSDV的复制和增殖。证明该组蛋白去乙酰化酶Ⅱa类抑制剂有望应用于研制预防或治疗LSDV的药物，为LSDV的有效防控提供新方法。本发明利用TMP269孵育处理LSDV感染的MDBK细胞后能够显著抑制LSDV的复制和增殖，有望应用于研制预防或治疗LSDV的药物，为LSD的有效防控提供新方法和全新视角。
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公开(公告)号：CN117683083A
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202311505058.7
申请日：2023-11-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K7/06 , G01N33/569 , G01N33/577 , A61K38/08 , A61P31/20
Abstract: 本发明涉及生物医学领域，为一种识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白B细胞的连续性线性及构象型抗原表位、抗原表位关键性氨基酸位点及其应用，识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性线性表位，该线性表位序列为INNPIGGVF；识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性线性表位关键性氨基酸位点，该关键性氨基酸位点为199I、200G、201G、202V和203V；识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性构象型表位，该构象型表位序列为INNPIGGVF；识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性构象型表位关键性氨基酸位点，该关键性氨基酸位点为199I、200G、201G和203V；识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞线性及构象型表位在临床诊断及制备抑制牛结节性皮肤病病毒试剂或药物中的应用。
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公开(公告)号：CN119564698A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202411688593.5
申请日：2024-11-25
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: A61K31/5377 , A61P17/00 , A61P31/20
Abstract: 本发明公开了KU55933或其药学上可接受的盐在制备抗牛结节性皮肤病病毒感染和治疗药物中的应用，本发明利用KU55933孵育处理LSDV感染的MDBK、Vero和hTERT‑CSF细胞，通过蛋白免疫印迹(Western blot)和组织细胞半数感染剂量(TCID50)检测了KU55933对LSDV感染易感细胞的影响，发现ATM激酶特异性抑制剂KU55933处理后能够显著抑制LSDV的易感细胞内和细胞外LSDV增殖；本体动物感染实验也证明该特异性ATM激酶抑制剂KU55933能够有效的缓解LSDV感染牛的临床症状和皮肤组织病毒载量。从细胞和动物水平上均证明该靶向ATM激酶的特异性抑制剂有望应用于研制预防或治疗LSDV的药物，为牛结节性皮肤病疫情防控提供新方法。
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公开(公告)号：CN118047859A
公开(公告)日：2024-05-17
申请号：CN202311505061.9
申请日：2023-11-13
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明涉及生物医学技术领域，具体为三株LSDV ORF29单克隆抗体的重链和轻链可变区基因序列、两种表达免疫球蛋白全基因序列及其应用，本发明利用杂交瘤测序，提取杂交瘤细胞(1C1‑4D11、3C4‑2E9和1E1‑2C11)总RNA，后以总RNA中mRNA为模板，进行反转录得到对应抗体基因的cDNA，再用特异性PCR获得对应抗体的重链可变区(Variable region ofheavy chain,VH)和轻链可变区(Variable region oflight chain,VL)，并进行克隆和测序分析。最终，获得靶向LSDV ORF29蛋白三株单克隆抗体(1C1‑4D11、3C4‑2E9和1E1‑2C11)重链和轻链基因核苷酸序列，实现本发明。对上述三株单克隆抗体的重链(VH)和轻链抗体(VL)的序列分析表明：1C1‑4D11、3C4‑2E9和1E1‑2C11的基因亚型都是IgG型，轻链都为κ型。
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