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公开(公告)号：CN117683083A
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202311505058.7
申请日：2023-11-13
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C07K7/06 , G01N33/569 , G01N33/577 , A61K38/08 , A61P31/20
摘要： 本发明涉及生物医学领域，为一种识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白B细胞的连续性线性及构象型抗原表位、抗原表位关键性氨基酸位点及其应用，识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性线性表位，该线性表位序列为INNPIGGVF；识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性线性表位关键性氨基酸位点，该关键性氨基酸位点为199I、200G、201G、202V和203V；识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性构象型表位，该构象型表位序列为INNPIGGVF；识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞连续性构象型表位关键性氨基酸位点，该关键性氨基酸位点为199I、200G、201G和203V；识别牛结节性皮肤病病毒ORF29蛋白的B细胞线性及构象型表位在临床诊断及制备抑制牛结节性皮肤病病毒试剂或药物中的应用。
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公开(公告)号：CN112921005A
公开(公告)日：2021-06-08
申请号：CN202110399802.4
申请日：2021-04-14
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12N5/20 , C07K16/08 , G01N33/577 , G01N33/569 , A61K39/42 , A61P31/20 , C12R1/91
摘要： 本发明提供了一株杂交瘤细胞株及其产生的犬细小病毒VP2蛋白单克隆抗体和应用，属于单克隆抗体制备技术领域，本发明提供的杂交瘤细胞株5A92B12能够稳定传代，可以持续、稳定地分泌抗犬细小病毒VP2蛋白的单克隆抗体；培养到10代后，所述杂交瘤细胞株5A92B12仍然能够生长良好、稳定传代，培养液上清效价仍然可以达到1×106以上；所述交瘤细胞株产生的单克隆抗体与犬细小病毒VP2蛋白能特异性识别，具有高特异性、高敏感性的优点，同时具有抑制犬细小病毒复制的特性，能够应用于犬细小病毒病的检测和治疗，具有良好的应用前景。
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公开(公告)号：CN118047859A
公开(公告)日：2024-05-17
申请号：CN202311505061.9
申请日：2023-11-13
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明涉及生物医学技术领域，具体为三株LSDV ORF29单克隆抗体的重链和轻链可变区基因序列、两种表达免疫球蛋白全基因序列及其应用，本发明利用杂交瘤测序，提取杂交瘤细胞(1C1‑4D11、3C4‑2E9和1E1‑2C11)总RNA，后以总RNA中mRNA为模板，进行反转录得到对应抗体基因的cDNA，再用特异性PCR获得对应抗体的重链可变区(Variable region ofheavy chain,VH)和轻链可变区(Variable region oflight chain,VL)，并进行克隆和测序分析。最终，获得靶向LSDV ORF29蛋白三株单克隆抗体(1C1‑4D11、3C4‑2E9和1E1‑2C11)重链和轻链基因核苷酸序列，实现本发明。对上述三株单克隆抗体的重链(VH)和轻链抗体(VL)的序列分析表明：1C1‑4D11、3C4‑2E9和1E1‑2C11的基因亚型都是IgG型，轻链都为κ型。
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公开(公告)号：CN118005721A
公开(公告)日：2024-05-10
申请号：CN202311505062.3
申请日：2023-11-13
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C07K7/06 , G01N33/569 , G01N33/577 , A61K38/08 , A61P31/20
摘要： 本发明涉及生物医学技术领域，具体为一种识别牛结节性皮肤病病毒和山羊痘病毒ORF123蛋白的B细胞连续性线性及构象型抗原表位及其应用，识别牛结节性皮肤病病毒(LSDV)和山羊痘病毒(GTPV)ORF123蛋白的B细胞线性及构象型表位在临床诊断、制备抑制牛结节性皮肤病病毒试剂或药物中的应用。本发明鉴定得到一种LSDV和GTPV ORF123蛋白的B细胞连续性的线性和构象型表位。该羊痘病毒属中(GTPV和LSDV)较保守的B细胞表位，丰富了ORF123蛋白的免疫学和结构生物学功能，为后续研究羊痘病毒属相关蛋白的抗原特性提供参考。单克隆抗体(1G1‑1G12)具有中和活性，该中和抗体可应用于临床检测试剂盒、抗病毒药物及抗原表位疫苗等的研发。
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公开(公告)号：CN117683120A
公开(公告)日：2024-03-12
申请号：CN202311505054.9
申请日：2023-11-13
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明涉及生物医学技术领域，具体为一株LSDV ORF123单克隆抗体的重链和轻链可变区基因序列、表达免疫球蛋白全基因序列及其应用，本发明利用杂交瘤测序，提取杂交瘤细胞(1G1‑1G12)总RNA，后以总RNA中mRNA为模板，进行反转录得到对应抗体基因的cDNA，再用特异性PCR获得对应抗体的重链可变区(Variable region ofheavy chain,VH)和轻链可变区(Variable region oflight chain,VL)，并进行克隆和测序分析。最终，获得靶向LSDV ORF123蛋白一株单克隆抗体(1G1‑1G12)重链和轻链可变区基因核苷酸序列，实现本发明。对上述一株单克隆抗体的重链(VH)和轻链抗体(VL)的序列分析表明：1G1‑1G12的VH和VL基因亚型，重链为IgG型，轻链为κ型。
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公开(公告)号：CN112852759A
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN202110191129.5
申请日：2021-02-19
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/35 , C12N15/63 , A61K39/295 , A61K39/23 , A61K39/205 , A61P31/14 , A61P31/20 , C12R1/93
摘要： 本发明提供了一种嵌合犬细小病毒VP2基因的重组狂犬病病毒，属于免疫学技术领域，本发明所述重组狂犬病病毒以狂犬病疫苗候选株SAD‑B19为骨架，将国内目前流行的CPV‑2a毒株的VP2基因插入SAD‑B19基因组中；通过拯救获得嵌合VP2蛋白的重组狂犬病病毒株，免疫后能够诱导产生高水平的抗狂犬病病毒抗体与抗犬细小病毒VP2抗体，疫苗成本低、安全、有效。
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公开(公告)号：CN112852745A
公开(公告)日：2021-05-28
申请号：CN202110155151.4
申请日：2021-02-04
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/113 , C12N15/85 , C12Q1/70 , C12Q1/6851 , G01N33/569 , G01N21/31 , C12R1/91
摘要： 本发明公开了HDAC3基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC3进行基因敲除，将用于敲除HDAC3的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆。提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了2个HDAC3基因发生纯合移码突变的细胞克隆。HDAC3敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC3敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC3，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN117384965A
公开(公告)日：2024-01-12
申请号：CN202311148823.4
申请日：2023-09-07
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12N15/867 , C12N15/85 , C12N15/65 , C12N15/64 , C12N15/54 , C12N7/01 , A61K39/275 , A61P31/20 , C12R1/93
摘要： 本发明提供牛结节性皮肤病病毒TK基因缺失毒株LSDV‑△TK的构建方法，包括以下步骤：构建缺失TK基因的pUC19T‑LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP‑△TK转移载体；构建绿色荧光标记毒株LSDV‑LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP‑△TK；利用Cre‑LoxP重组酶系统，构建TK基因缺失毒株LSDV‑△TK。本发明采用同源重组技术将LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP基因表达框定向插入LSDV毒株的病毒基因组TK基因处，构建绿色荧光标记毒株LSDV‑LoxP‑pmH5‑EGFP‑LoxP‑△TK，采用Cre‑Loxp重组酶系统，将EGFP标签切除，构建LSDV‑△TK。
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公开(公告)号：CN112877275B
公开(公告)日：2023-03-31
申请号：CN202110154125.X
申请日：2021-02-04
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明公开了HDAC2基因敲除的BHK‑21细胞系的构建方法，利用CRISPR/Cas9技术对口蹄疫疫苗生产用细胞系BHK‑21中的HDAC2进行基因敲除；发明人将用于敲除HDAC2的CRISPR质粒转染BHK‑21细胞后，利用抗生素筛选结合梯度稀释，用克隆环法分离到了多个细胞克隆；提取基因组DNA后进行PCR扩增、测序，成功鉴定到了1个HDAC2基因发生纯合移码突变的细胞克隆；其中HDAC2‑KO‑B3在Cas9预定切割位置处有1个碱基的缺失。HDAC2敲除的BHK‑21细胞系中口蹄病毒复制速率明显加快，最终病毒滴度有显著提高，且HDAC2敲除后对细胞生长速率无显著影响，说明其有用于口蹄疫疫苗生产的前景。为进一步在悬浮培养型BHK‑21细胞中敲除HDAC2，直接用于口蹄疫疫苗生产奠定了基础。
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公开(公告)号：CN114807195B
公开(公告)日：2024-05-24
申请号：CN202210405602.X
申请日：2022-04-18
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
摘要： 本发明提供了一种提高狂犬病病毒耐热稳定性和免疫效果的融合基因、重组狂犬病病毒及其应用，属于病毒技术领域。以狂犬病病毒SAD B19株为骨架，在基因组N与P基因之间插入矿化基因W6和G基因形成的融合基因，构建得到重组全长质粒pBNSP‑RV‑GW6和pBNSP‑RV‑W6G，并利用狂犬病的反向遗传操作系统拯救出含矿化基因和双G基因的重组狂犬病病毒。所述重组狂犬病病毒在细胞上稳定增殖，具有耐热稳定特性，免疫小鼠可以诱导产生较高的狂犬病病毒特异性抗体，能抵抗致死剂量狂犬病毒的攻击，同时具有耐热稳定和高效免疫效果，可以直接作为疫苗应用，具有较高的应用前景。
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