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公开(公告)号：CN117700537B
公开(公告)日：2024-08-20
申请号：CN202311693481.4
申请日：2023-12-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/543 , G01N33/58
Abstract: 本发明属于免疫学和体外诊断技术领域，具体涉及一种与非洲马瘟病毒VP7蛋白具有良好亲和反应能力的单克隆抗体及用途。本发明通过将重组表达的非洲马瘟病毒VP7蛋白3次免疫小鼠后，取小鼠脾脏和骨髓杂交瘤细胞SP2/0进行融合，最终筛选出杂交瘤细胞株5D3，获得了一种反应性良好的单克隆抗体。通过反转录PCR技术成功获得了编码该株单克隆抗体重链及轻链可变区的核苷酸序列。所述单克隆抗体与重组表达的非洲马瘟病毒VP7蛋白具有良好的亲和反应能力，作为竞争抗体建立了非洲马瘟病毒VP7蛋白竞争ELISA检测方法，为有效防控非洲马瘟提供技术支持。
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公开(公告)号：CN117801099A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202311693552.0
申请日：2023-12-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N15/85 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一株抗蓝舌病毒VP7蛋白的重组单克隆抗体。本发明获得一株抗蓝舌病毒VP7蛋白的单克隆抗体，并获得该株单克隆抗体的轻重链可变区序列，与鼠源抗体表达载体以同源重组的方式构建出含有该抗体可变区的鼠源重组表达质粒，转染后成功表达出抗蓝舌病毒VP7蛋白的鼠源重组单克隆抗体。通过免疫印迹、间接ELISA、细胞免疫荧光等实验鉴定出该株重组单克隆抗体能够与蓝舌病病毒VP7蛋白发生特异性反应，并能够与蓝舌病毒感染细胞中的天然VP7蛋白反应。该重组单克隆抗体的表达避免了杂交瘤细胞抗体表达过程中抗体表达量不稳定的缺点，为利用该单克隆抗体建立蓝舌病病原与抗体检测方法奠定基础。
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公开(公告)号：CN118930644B
公开(公告)日：2025-03-25
申请号：CN202411181972.5
申请日：2024-08-27
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , G01N33/569 , G01N33/543 , G01N33/68 , C12N15/85
Abstract: 本发明利用杂交瘤细胞技术筛选得到识别蓝舌病毒VP7蛋白的杂交瘤细胞株2B2，将所述杂交瘤细胞株2B2用Trizol裂解后提取细胞总RNA，反转录后利用巢式PCR方法扩增得到抗体分子重链及轻链可变区序列；并将所述重链及轻链可变区序列构建到含有鼠源IgG恒定区的表达载体上，成功表达获得了识别蓝舌病毒VP7蛋白的基因工程抗体；所述基因工程抗体能够与蓝舌病毒的重组VP7蛋白发生反应，且能识别蓝舌病毒感染BHK‑21细胞和KC细胞中的天然VP7蛋白；可利用该基因工程抗体建立蓝舌病毒竞争ELISA、夹心ELISA及胶体金试纸条等检测方法，为有效防控蓝舌病提供了技术基础。
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公开(公告)号：CN119371522A
公开(公告)日：2025-01-28
申请号：CN202411734157.7
申请日：2024-11-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N15/85 , G01N33/543 , G01N33/569 , G01N33/577 , C12P21/08
Abstract: 本发明属于免疫学和体外诊断技术领域，具体涉及一株特异识别非洲马瘟病毒VP7蛋白的鼠源重组单克隆抗体。本发明利用杂交瘤细胞技术筛选得到的针对非洲马瘟病毒VP7蛋白的杂交瘤细胞株2C12，提取总RNA反转录成cDNA，以其为模板利用巢式PCR方法扩增得到小鼠IgG抗体分子轻链及重链可变区序列，将轻链及重链可变区序列构建到含有鼠源恒定区的质粒载体上，共转染293F悬浮细胞进行表达纯化，获得了特异识别非洲马瘟病毒VP7蛋白的鼠源重组单克隆抗体。所述重组抗体能够特异性识别非洲马瘟病毒的重组VP7蛋白，但不识别蓝舌病毒以及流行性出血热病毒的重组VP7蛋白，这为进一步建立特异性非洲马瘟诊断技术提供支持。
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公开(公告)号：CN117801099B
公开(公告)日：2024-08-30
申请号：CN202311693552.0
申请日：2023-12-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , C12N15/85 , G01N33/569 , G01N33/577
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一株抗蓝舌病毒VP7蛋白的重组单克隆抗体。本发明获得一株抗蓝舌病毒VP7蛋白的单克隆抗体，并获得该株单克隆抗体的轻重链可变区序列，与鼠源抗体表达载体以同源重组的方式构建出含有该抗体可变区的鼠源重组表达质粒，转染后成功表达出抗蓝舌病毒VP7蛋白的鼠源重组单克隆抗体。通过免疫印迹、间接ELISA、细胞免疫荧光等实验鉴定出该株重组单克隆抗体能够与蓝舌病病毒VP7蛋白发生特异性反应，并能够与蓝舌病毒感染细胞中的天然VP7蛋白反应。该重组单克隆抗体的表达避免了杂交瘤细胞抗体表达过程中抗体表达量不稳定的缺点，为利用该单克隆抗体建立蓝舌病病原与抗体检测方法奠定基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117700537A
公开(公告)日：2024-03-15
申请号：CN202311693481.4
申请日：2023-12-11
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , G01N33/569 , G01N33/577 , G01N33/543 , G01N33/58
Abstract: 本发明属于免疫学和体外诊断技术领域，具体涉及一种与非洲马瘟病毒VP7蛋白具有良好亲和反应能力的单克隆抗体及用途。本发明通过将重组表达的非洲马瘟病毒VP7蛋白3次免疫小鼠后，取小鼠脾脏和骨髓杂交瘤细胞SP2/0进行融合，最终筛选出杂交瘤细胞株5D3，获得了一种反应性良好的单克隆抗体。通过反转录PCR技术成功获得了编码该株单克隆抗体重链及轻链可变区的核苷酸序列。所述单克隆抗体与重组表达的非洲马瘟病毒VP7蛋白具有良好的亲和反应能力，作为竞争抗体建立了非洲马瘟病毒VP7蛋白竞争ELISA检测方法，为有效防控非洲马瘟提供技术支持。
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公开(公告)号：CN116555194A
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202310514218.8
申请日：2023-05-08
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所
Abstract: 本发明属于基因工程领域，具体涉及一种表达绿色荧光蛋白的重组蓝舌病毒、构建方法及应用。本发明通过在野生型蓝舌病毒非结构蛋白NS1的C末端插入增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein，eGFP)基因，构建获得了NS1重组突变蓝舌病毒BTV‑1S6‑552eGFP；所述重组突变蓝舌病毒与野生型蓝舌病毒的生物学特性没有明显区别，并且能够正确表达增强型绿色荧光蛋白；首次构建了NS1蛋白上融合eGFP荧光蛋白的重组蓝舌病毒，可用于BTV感染细胞后NS1蛋白的示踪研究，同时可用于BTV的病毒中和实验及病毒含量的可视化定量检测等。
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公开(公告)号：CN119039427B
公开(公告)日：2025-03-25
申请号：CN202411099375.8
申请日：2024-08-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一株绵羊抗蓝舌病毒的重组单个B细胞抗体。本发明利用流式单细胞分选技术在蓝舌病毒灭活疫苗免疫的绵羊外周血淋巴细胞中获得一株抗蓝舌病毒的单个B细胞抗体，通过RT‑PCR扩增获得该株抗体的轻重链可变区序列，与含有绵羊IgG抗体恒定区的表达载体构建出该抗体的两个重组轻重链表达质粒，转染293F细胞后成功表达出绵羊抗蓝舌病毒的重组单个B细胞抗体；所述单个B细胞抗体在ELISA、细胞免疫荧光实验中均能够与蓝舌病毒发生特异性反应。该发明避免了传统杂交瘤抗体制备技术中会遇到的抗体异源性、细胞凋亡和遗传不稳定的难题，为建立更加准确、灵敏的蓝舌病检测方法奠定了基础。
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公开(公告)号：CN119039428A
公开(公告)日：2024-11-29
申请号：CN202411156911.3
申请日：2024-08-22
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: C07K16/10 , C12N15/13 , G01N33/569 , G01N33/543
Abstract: 本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种抗非洲马瘟病毒VP7蛋白的鼠源重组抗体及其制备方法。本发明利用杂交瘤细胞技术筛选得到的针对非洲马瘟病毒VP7蛋白的杂交瘤细胞株2B8，将所述杂交瘤细胞株2B8用Trizol裂解后提取总RNA，利用巢式PCR方法扩增得到重链及轻链可变区序列；并将所述重链及轻链可变区序列构建到含有鼠源恒定区的载体上，成功表达获得了抗非洲马瘟病毒VP7蛋白的重组抗体；所述重组抗体能够识别大肠杆菌表达的重组VP7蛋白，且与在BHK21细胞内表达的重组VP7蛋白发生特异性反应；可利用该重组抗体建立非洲马瘟病毒竞争ELISA抗体检测方法，为有效防控非洲马瘟传入我国提供了技术基础。
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公开(公告)号：CN119039427A
公开(公告)日：2024-11-29
申请号：CN202411099375.8
申请日：2024-08-12
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
Abstract: 本发明属于生物技术领域，具体涉及一株绵羊抗蓝舌病毒的重组单个B细胞抗体。本发明利用流式单细胞分选技术在蓝舌病毒灭活疫苗免疫的绵羊外周血淋巴细胞中获得一株抗蓝舌病毒的单个B细胞抗体，通过RT‑PCR扩增获得该株抗体的轻重链可变区序列，与含有绵羊IgG抗体恒定区的表达载体构建出该抗体的两个重组轻重链表达质粒，转染293F细胞后成功表达出绵羊抗蓝舌病毒的重组单个B细胞抗体；所述单个B细胞抗体在ELISA、细胞免疫荧光实验中均能够与蓝舌病毒发生特异性反应。该发明避免了传统杂交瘤抗体制备技术中会遇到的抗体异源性、细胞凋亡和遗传不稳定的难题，为建立更加准确、灵敏的蓝舌病检测方法奠定了基础。
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