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公开(公告)号：CN106148568B
公开(公告)日：2020-03-27
申请号：CN201610536974.0
申请日：2016-07-08
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 内蒙古河套农牧业技术研究院
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6804 , G01N33/569 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种免疫磁珠试剂盒及其在检测小反刍兽疫病毒抗原中的用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV N蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN106191304B
公开(公告)日：2020-03-27
申请号：CN201610537118.7
申请日：2016-07-08
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 内蒙古河套农牧业技术研究院
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6804 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种检测小反刍兽疫病毒抗原的免疫磁珠试剂盒及其用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV H蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN106191304A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610537118.7
申请日：2016-07-08
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 内蒙古河套农牧业技术研究院
摘要： 本发明公开了一种检测小反刍兽疫病毒抗原的免疫磁珠试剂盒及其用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV H蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT-PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT-PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN106148568A
公开(公告)日：2016-11-23
申请号：CN201610536974.0
申请日：2016-07-08
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 内蒙古河套农牧业技术研究院
摘要： 本发明公开了一种免疫磁珠试剂盒及其在检测小反刍兽疫病毒抗原中的用途，属于生物技术领域。本发明所述的试剂盒包括兔抗PPRV N蛋白IgG偶联的免疫磁珠、以PPRVM基因片段为靶点检测小反刍兽疫病毒抗原的引物对，RT‑PCR反应混合液及RNA聚合酶。所述引物对的序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.2所示。本发明的提出克服了小反刍兽疫病毒抗原检测过程中PPRV病原易降解，且病原RNA提取过程中使用的待检毒液体积有限导致所提取的RNA无法达到RT‑PCR检测的最低要求，而出现假阴性结果的问题，为小反刍兽疫病毒抗原的检测提供了一种有效的技术手段。
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公开(公告)号：CN105603057A
公开(公告)日：2016-05-25
申请号：CN201510724479.8
申请日：2015-10-30
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所 , 内蒙古河套农牧业技术研究院
IPC分类号： C12Q1/68
CPC分类号： C12Q1/701 , C12Q1/686 , C12Q2561/113 , C12Q2561/101 , C12Q2545/114 , C12Q2531/113
摘要： 一种用于检测绵羊肺腺瘤病毒的Taqman Real-time RT-PCR试剂盒，所述试剂盒包含One Step RT-PCR buffer、酶混合物、阳性对照、无RNA酶水、序列SEQ ID NO:1和 SEQ ID NO:2的引物及SEQ ID NO:3的探针引物的混合物，所述检测方法包括使用所述试剂盒进行RT-PCR扩增的步骤及评定标准。所述方法能快速、敏感、准确以及低成本地对绵羊肺腺瘤病毒进行检测及定量分析。本发明设计了特异性针对绵羊肺腺瘤病毒的引物及探针，优化并组装成试剂盒。与普通RT-PCR方法相比，本发明省时、省力，成本较低。
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公开(公告)号：CN111751553B
公开(公告)日：2022-01-25
申请号：CN202010563205.6
申请日：2020-06-19
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： G01N33/68 , G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/543
摘要： 本发明以筛选的小反刍兽疫病毒(Peste Des Petits Ruminants Virus,PPRV)H蛋白B细胞表位为基础，选择其中反应原性较好的4个抗原表位肽串联后合成作为包被抗原，建立针对PPRV H蛋白抗体的iELISA方法，多表位抗原肽的最佳包被量为1.5×10‑6ug/孔，待检血清阴阳性临界稀释浓度为1:100，酶标二抗最佳稀释浓度为1:80000；包被液为碳酸盐缓冲液，血清和二抗稀释液均为PBST溶液，封闭液为2％BSA溶液；阴阳性临界值为0.25。通过对临床血清检测表明，批内及批间检测结果变异系数均小于10％；该方法具有良好的特异性；与ID‑Vet公司生产的cELISA试剂盒对306份血清比较检测，两者符合率为92.75％。PPRV H蛋白抗体iELISA检测方法可用于临床小反刍兽疫抗体检测，其操作比cELISA更为省时省力，简便快捷。
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公开(公告)号：CN112255401A
公开(公告)日：2021-01-22
申请号：CN202011130996.X
申请日：2020-10-21
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： G01N33/569 , G01N33/58 , G01N21/76
摘要： 本发明建立针对PPRV H蛋白抗体的化学发光免疫分析检测方法，设计合成PPRV H蛋白B细胞表位作为抗原，通过优化各步反应条件，确定临界值且进行特异性、敏感性及重复性试验。研究证实建立的检测方法临界值为S/P>9.77％，敏感性为95.43％，特异性为92.23％，批内及批间变异系数均小于10％，具有良好的敏感性、特异性和可重复性。通过对247份田间血清的平行检测，建立的方法与国外商品化PPRV cELISA试剂盒相对符合率为94.33％，且该方法敏感性高于国外商品化PPRV cELISA试剂盒。表明建立的H蛋白抗体化学发光免疫分析方法可用于相关检测试剂盒的开发。
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公开(公告)号：CN107033226B
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN201710502539.0
申请日：2017-06-27
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C07K14/12 , A61K39/165 , A61P31/14 , G01N33/569 , G01N33/68
摘要： 本发明涉及一种小反刍兽疫病毒F蛋白抗原表位肽，抗原表位肽的氨基酸序列分别为：F176：176DYINNELVPSVHRMSCEL193，或/和F347：347MSPLLQECFRGSTKS361，F391：或/和391CKCYTTETVINQDPDKLL408，或/和F417：417TVINQDPDKGPVGSREYPD435，F430：或/和430SREYPDSVYLH440，或/和F502：502VSLGLVTLICCCKGRCRNK520；本发明对目标蛋白进行B细胞表位进行预测，对预测的不同表位分别进行人工合成，检测与F蛋白的抗体的反应原性，从而鉴定出PPRV F蛋白的B细胞表位。
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公开(公告)号：CN105567873B
公开(公告)日：2020-01-21
申请号：CN201610054568.0
申请日：2016-01-27
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种快速检测羊痘病毒的实时荧光RPA试剂盒及其用途，还公开了一种快速检测羊痘病毒的试纸条RPA试剂盒及其用途。该两种试剂盒分别包括SEQ ID NO.1及SEQ ID NO.2所示的引物及各自的探针，虽然针对同一靶标序列，但引物和探针的修饰碱基和检测平台不同。实验证明本发明的两个试剂盒的敏感性均为102拷贝/反应，并均只能特异性检测绵羊痘病毒和山羊痘病毒。分别用本发明的两个试剂盒检测羊痘病毒疑似样品，结果表明这两个试剂盒的检测结果与qPCR均具有很高的符合度。因此，本发明的两个试剂盒均能快捷、高效、灵敏的检测绵羊痘或山羊痘病毒，为绵羊痘或山羊痘病毒的鉴别诊断提供了有效技术手段。
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公开(公告)号：CN110317777A
公开(公告)日：2019-10-11
申请号：CN201910735940.8
申请日：2019-08-09
申请人： 中国农业科学院兰州兽医研究所
IPC分类号： C12N5/071
摘要： 本发明公开了一种口腔黏膜上皮细胞的分离和培养方法，具体涉及细胞培养技术领域，具体分离和培养步骤如下：无菌条件下取唇裂整复术中切除的多余口腔黏膜组织，用PBS反复冲洗，用眼科剪除去黏膜下组织，剪成小块，置于DispaseⅡ酶中，4℃过夜消化18h，用眼科镊分离上皮层，PBS液冲洗上皮层，将上皮剪切成小片加入混合消化液中，37℃消化7分钟，加胎牛血清终止消化，用吸管反复吹打至单细胞悬液，离心弃上清，加入无血清培养基，接种于培养瓶中倒置培养，当原代培养的细胞汇合率达70％-80％时，用0.25％胰蛋白酶/0.02％EDTA消化并以1:2传代。本发明整个培养过程简单，得到的原代培养细胞成活率高，并且不易出现双核、多核、畸形核细胞。
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