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公开(公告)号：CN118581151B
公开(公告)日：2024-12-06
申请号：CN202410675517.4
申请日：2024-05-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: C12N15/85 , C12N15/64 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种猪BECN1基因敲除细胞的构建方法及其应用。首先设计合成针对BECN1基因的带有酶切位点的向导RNA及其互补序列，利用碱基互补配对原则将sgRNA及其互补序列连接为双链sgRNA片段，通过分子克隆重组技术构建重组CRISPR/Cas9质粒，将重组质粒转染到猪肺上皮细胞中，设计sgRNA验证引物验证sgRNA活性，再通过嘌呤霉素药物筛选阳性单克隆细胞株，提取单克隆细胞株的DNA和蛋白质，进行BECN1基因测序及蛋白表达检测，最后获得BECN1基因敲除的PPE细胞。本方法简便高效，构建的敲除细胞系可广泛应用于BECN1基因功能和相关通路研究。
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公开(公告)号：CN118652890A
公开(公告)日：2024-09-17
申请号：CN202410768857.1
申请日：2024-06-14
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: C12N15/113 , C12N9/22 , C12N15/85 , C12N5/071 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，涉及一种敲除猪ARP2基因的sgRNA和ARP2基因敲除细胞系的构建方法。合成针对ARP2基因的带有酶切位点的向导RNA及其互补序列，利用碱基互补配对原则将sgRNA及其互补序列连接为双链片段，通过分子克隆重组技术构建重组CRISPR/Cas9质粒，转染到猪肺上皮细胞(Porcine pulmonary epithelial cell)中，验证sgRNA活性，再通过嘌呤霉素药物筛选阳性单细胞克隆株，提取单细胞克隆株的DNA和蛋白质，进行ARP2基因测序及蛋白表达检测，最后获得ARP2基因敲除的PPE细胞系。具有简便、高效、快速、低成本等特点。
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公开(公告)号：CN118620897A
公开(公告)日：2024-09-10
申请号：CN202410886376.0
申请日：2024-07-03
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种敲除猪Cofilin基因的sgRNA及其应用。所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明可用于Cofilin基因的定向敲除，具有简便、高效、快速、低成本等特点，对于Cofilin基因功能和相关通路的研究具有重要意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN119662651A
公开(公告)日：2025-03-21
申请号：CN202411894990.8
申请日：2024-12-21
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: C12N15/113 , A61K35/17 , A61K39/135 , A61K39/385 , A61P31/14 , C12N15/867 , C12N5/10 , C12N15/12
Abstract: 本发明提供了GALECTIN‑1基因敲除的DC2.4细胞及其在抗原递呈研究中的应用，属于基因工程技术领域。本发明用SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示的双链DNA构建重组CRISPR/Cas9质粒，并将重组质粒包装成慢病毒，用慢病毒感染细胞，获得敲除GALECTIN‑1基因的细胞。Western Blot检测结果表明，该方法在蛋白水平上实现了鼠GALECTIN‑1基因敲除，并能稳定遗传。本发明的sgRNA、敲除载体可用于鼠GALECTIN‑1基因的定向敲除，具有简便、高效、快速、低成本等特点，对于鼠GALECTIN‑1基因功能及其在适应性免疫中对抗原递呈的研究具有重要意义。
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公开(公告)号：CN118581151A
公开(公告)日：2024-09-03
申请号：CN202410675517.4
申请日：2024-05-29
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: C12N15/85 , C12N15/64 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种猪BECN1基因敲除细胞的构建方法及其应用。首先设计合成针对BECN1基因的带有酶切位点的向导RNA及其互补序列，利用碱基互补配对原则将sgRNA及其互补序列连接为双链sgRNA片段，通过分子克隆重组技术构建重组CRISPR/Cas9质粒，将重组质粒转染到猪肺上皮细胞中，设计sgRNA验证引物验证sgRNA活性，再通过嘌呤霉素药物筛选阳性单克隆细胞株，提取单克隆细胞株的DNA和蛋白质，进行BECN1基因测序及蛋白表达检测，最后获得BECN1基因敲除的PPE细胞。本方法简便高效，构建的敲除细胞系可广泛应用于BECN1基因功能和相关通路研究。
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公开(公告)号：CN118685408A
公开(公告)日：2024-09-24
申请号：CN202410945840.9
申请日：2024-07-15
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: C12N15/113 , C12N5/10 , C12N15/85 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种敲除人源WASP基因的sgRNA和方法。所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明可用于WASP基因的定向敲除，具有简便、高效、快速、低成本等特点，对于WASP基因功能和相关通路的研究具有重要意义。
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公开(公告)号：CN118979059A
公开(公告)日：2024-11-19
申请号：CN202411031109.1
申请日：2024-07-30
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: C12N15/85 , C12N15/64 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种猪VASP基因敲除细胞系的构建方法。合成针对VASP基因的带有酶切位点的向导RNA及其互补序列，利用碱基互补配对原则将sgRNA及其互补序列连接为双链sgRNA片段，通过分子克隆重组技术构建重组CRISPR/Cas9质粒，转染到猪肺上皮细胞(Porcine pulmonary epithelial cell)中，设计sgRNA引物，再通过嘌呤霉素药物筛选阳性单细胞克隆株，提取单细胞克隆株的DNA和蛋白质，进行VASP基因测序及蛋白表达检测，最后获得VASP基因敲除的PPE细胞。具有简便、高效、快速、低成本等特点。
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公开(公告)号：CN118755721A
公开(公告)日：2024-10-11
申请号：CN202410809804.X
申请日：2024-06-21
Applicant: 中国农业科学院兰州兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心兰州分中心)
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/12 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，特别是涉及一种敲除人源Profilin基因的sgRNA、重组表达载体和构建方法。所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。本发明可用于Profilin基因的定向敲除，具有简便、高效、快速、低成本等特点，对于Profilin基因功能和相关通路的研究具有重要意义。
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