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公开(公告)号：CN116769940B
公开(公告)日：2024-09-20
申请号：CN202310671868.3
申请日：2023-06-07
申请人： 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 , 中国农业大学
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/19 , C12R1/42
摘要： 本发明公开了一种大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌同步检测试剂盒及检测方法，属于食源性病原菌检测技术领域。本发明将LAMP反应与HCR反应结合，设计出一种双重信号放大以同时检测E.coli O157:H7和Salmonella Typhimurium的方法和试剂盒。为了实现LAMP产物基础上的二次信号放大，设计了LAMP产物的特异性捕获探针和对应的HCR引物，以提高反应的灵敏度和特异性。将HCR反应固定在链霉亲和素磁珠表面反应，最终的检测信号通过采集磁珠表面的荧光强度实现，从而实现了信号的富集，提高灵敏度。本发明可以直接对污染食品进行检测而无需预增菌步骤，有效缩短反应时间。
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公开(公告)号：CN113373247B
公开(公告)日：2022-04-26
申请号：CN202110230131.9
申请日：2021-03-02
申请人： 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 , 中国农业大学
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/10 , C12Q1/06 , C12N15/11
摘要： 本发明提供了一种快速、同时检测食品中大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌的方法，以待检测食品样本为模板直接进行扩增，利用ddPCR同时检测食品中的大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌；待检测食品样本中菌液浓度换算公式为cfu/mL=copies/μL×20μL/加样量×1000μL。相比现有技术，本发明所述方法省略了DNA的提取步骤，直接以细菌为模板进行ddPCR检测，提高了食品中致病菌检测的效率；并且通过实验数据证实，直接加入完整的细菌而非提取的DNA也能够具有很强的抗干扰能力和极高的灵敏度。
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公开(公告)号：CN113373247A
公开(公告)日：2021-09-10
申请号：CN202110230131.9
申请日：2021-03-02
申请人： 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 , 中国农业大学
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6851 , C12Q1/10 , C12Q1/06 , C12N15/11
摘要： 本发明提供了一种快速、同时检测食品中大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌的方法，以待检测食品样本为模板直接进行扩增，利用ddPCR同时检测食品中的大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌；待检测食品样本中菌液浓度换算公式为cfu/mL=copies/μL×20μL/加样量×1000μL。相比现有技术，本发明所述方法省略了DNA的提取步骤，直接以细菌为模板进行ddPCR检测，提高了食品中致病菌检测的效率；并且通过实验数据证实，直接加入完整的细菌而非提取的DNA也能够具有很强的抗干扰能力和极高的灵敏度。
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公开(公告)号：CN116769940A
公开(公告)日：2023-09-19
申请号：CN202310671868.3
申请日：2023-06-07
申请人： 中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所 , 中国农业大学
IPC分类号： C12Q1/689 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/19 , C12R1/42
摘要： 本发明公开了一种大肠杆菌O157:H7和鼠伤寒沙门氏菌同步检测试剂盒及检测方法，属于食源性病原菌检测技术领域。本发明将LAMP反应与HCR反应结合，设计出一种双重信号放大以同时检测E.coli O157:H7和Salmonella Typhimurium的方法和试剂盒。为了实现LAMP产物基础上的二次信号放大，设计了LAMP产物的特异性捕获探针和对应的HCR引物，以提高反应的灵敏度和特异性。将HCR反应固定在链霉亲和素磁珠表面反应，最终的检测信号通过采集磁珠表面的荧光强度实现，从而实现了信号的富集，提高灵敏度。本发明可以直接对污染食品进行检测而无需预增菌步骤，有效缩短反应时间。
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