公开(公告)号：CN102296073A

公开(公告)日：2011-12-28

申请号：CN201110229828.0

申请日：2011-08-11

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 崔文涛 ,  汤茂学 ,  钱丽丽 ,  李奎

IPC分类号： C12N15/12 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/21 ,  C12N15/85 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种锌指核酸酶定点敲除Myostatin基因特异靶位点。本发明提供一种DNA分子，其为如下(1)或(2)或(3)的DNA分子：(1)序列表中序列1所示的DNA分子；(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能相关蛋白的DNA分子；本发明的实验证明，本发明定位了MSTN基因中一段特异的靶序列位点DNA片段，并针对此特异位点构建ZFN质粒，将此质粒核转染猪胎儿成纤维细胞可以定点敲除或突变MSTN基因中特异的靶序列，并彻底破坏MSTN基因的表达。

公开(公告)号：CN101851637A

公开(公告)日：2010-10-06

申请号：CN201010034318.3

申请日：2010-01-15

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 李奎 ,  鞠辉明 ,  樊俊华 ,  白立景 ,  牟玉莲 ,  杨述林 ,  唐中林 ,  崔文涛

IPC分类号： C12N15/85 ,  A61D19/04 ,  A01K67/027

CPC分类号： C12N9/16 ,  A01K67/0275 ,  A01K2217/052 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/02 ,  C07K14/435

摘要： 本发明公开了一种制备同时表达多个基因的转基因动物的方法。本发明还公开了一种制备转基因胚胎的方法，上述制备转基因胚胎的方法，是将植酸酶基因和人粘病毒抗性基因A均导入目的胚胎中，得到转基因胚胎。将转基因胚胎移植到雌性的目的动物的体内，即可得到表达多个基因的转基因动物。本发明的显著优势表现在一次转基因实现多基因的同时表达，为制备转联合基因动物等提供一种便捷的手段。

公开(公告)号：CN101792766A

公开(公告)日：2010-08-04

申请号：CN201010033947.4

申请日：2010-01-07

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 鞠辉明 ,  白立景 ,  李奎 ,  崔文涛 ,  牟玉莲 ,  杨述林 ,  唐中林

IPC分类号： C12N15/18 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/00 ,  C12P21/02

摘要： 本发明公开了一种生产猪生长激素的方法及其专用DNA片段。该DNA片段，是如下1)或2)：1)其核苷酸序列如序列表中序列3的自5’端6-1108位所示；2)其核苷酸序列如序列表中序列3所示。含有上述DNA片段的重组载体也属于本发明的保护范围之内。具体地，上述重组载体是将上述的DNA片段插入pcDNA3.1(+)的多克隆位点构成的重组表达载体。含有上述DNA片段的转基因细胞系也属于本发明的保护范围之内。上述转基因细胞培养后，pcDNA-GH12组GH表达量是转pcDNA质粒对照组的16410倍；pcDNA-GH12组的GH与内参beta-actin比值为0.278，显著高于正常对照组(转pcDNA空载体组)的0.016。说明含有第1，2内含子的情况下，GH的表达量更高。

公开(公告)号：CN101775370A

公开(公告)日：2010-07-14

申请号：CN201010034202.X

申请日：2010-01-13

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 鞠辉明 ,  白立景 ,  李奎 ,  牟玉莲 ,  唐中林 ,  杨述林 ,  崔文涛

IPC分类号： C12N5/10 ,  C12N15/55 ,  C12N15/85 ,  A01K67/027

摘要： 本发明的目的在于提供一种培育转基因动物的方法。本发明还提供一种培育转基因胚胎的方法，该培育转基因胚胎的方法，是将植酸酶基因导入目的胚胎中，得到转基因胚胎。将上述的转基因胚胎移植到假孕雌性动物的体内，得到转基因动物。本发明的转基因胚胎能表达appA基因，本发明培育的转基因动物能表达植酸酶的活性，具有可以水解植酸及其盐，释放出动物可利用的磷，使提高磷的利用率，降低粪磷含量。

公开(公告)号：CN105063023A

公开(公告)日：2015-11-18

申请号：CN201510441002.9

申请日：2015-07-24

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 崔文涛 ,  钱丽丽 ,  汤茂学 ,  李奎

IPC分类号： C12N15/11 ,  C12Q1/68 ,  A01K67/027

摘要： 本发明公开了一种锌指核酸酶介导的猪MSTN基因突变序列及其应用。本发明利用锌指核酸酶技术介导猪的肌肉生成抑制素MSTN基因发生碱基缺失，造成移码突变，导致翻译提前终止无法形成MSTN功能蛋白，并获得了MSTN基因第3782-3796位核苷酸缺失且第3800位核苷酸分子由T突变为G的突变序列。通过试验证明：MSTN基因第3782-3796位核苷酸缺失且第3800位核苷酸分子由T突变为G的猪表现明显的双肌表型，肌肉量和瘦肉率都显著增加，脂肪含量明显降低。

公开(公告)号：CN102296073B

公开(公告)日：2014-04-23

申请号：CN201110229828.0

申请日：2011-08-11

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 崔文涛 ,  汤茂学 ,  钱丽丽 ,  李奎

IPC分类号： C12N15/12 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/21 ,  C12N15/85 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种锌指核酸酶定点敲除Myostatin基因特异靶位点。本发明提供一种DNA分子，其为如下(1)或(2)或(3)的DNA分子：(1)序列表中序列1所示的DNA分子；(2)在严格条件下与(1)限定的DNA序列杂交且编码具有相同功能相关蛋白的DNA分子；本发明的实验证明，本发明定位了MSTN基因中一段特异的靶序列位点DNA片段，并针对此特异位点构建ZFN质粒，将此质粒核转染猪胎儿成纤维细胞可以定点敲除或突变MSTN基因中特异的靶序列，并彻底破坏MSTN基因的表达。

公开(公告)号：CN102943112B

公开(公告)日：2013-11-13

申请号：CN201210478862.6

申请日：2012-11-22

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 唐中林 ,  李奎 ,  梁如意 ,  周荣 ,  杨述林 ,  敖红 ,  牟玉莲 ,  崔文涛

IPC分类号： C12Q1/68 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了一种辅助评价仔猪初生重和断奶重的方法及其专用引物。本发明提供了用于鉴定待测猪的CNN3基因组中多个位点（第二内含子第182位核苷酸、第三内含子第44位核苷酸、第四内含子第314位核苷酸）的多态性或基因型的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途如下：（1）辅助鉴定待测猪的初生重；（2）辅助评价待测猪的初生重；（3）辅助比较不同待测猪的初生重；（4）辅助鉴定待测猪的断奶重；（5）辅助评价待测猪的断奶重；（6）辅助比较不同待测猪的断奶重。本发明公开了猪CNN3基因组DNA序列中的三个位点的突变，以及单个SNP位点检测仔猪初生重、21日龄断奶重的生长性能的技术，为猪的标记辅助育种提供了新的标记。

公开(公告)号：CN102943112A

公开(公告)日：2013-02-27

申请号：CN201210478862.6

申请日：2012-11-22

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 唐中林 ,  李奎 ,  梁如意 ,  周荣 ,  杨述林 ,  敖红 ,  牟玉莲 ,  崔文涛

IPC分类号： C12Q1/68 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了一种辅助评价仔猪初生重和断奶重的方法及其专用引物。本发明提供了用于鉴定待测猪的CNN3基因组中多个位点（第二内含子第182位核苷酸、第三内含子第44位核苷酸、第四内含子第314位核苷酸）的多态性或基因型的物质在制备产品中的应用；所述产品的用途如下：（1）辅助鉴定待测猪的初生重；（2）辅助评价待测猪的初生重；（3）辅助比较不同待测猪的初生重；（4）辅助鉴定待测猪的断奶重；（5）辅助评价待测猪的断奶重；（6）辅助比较不同待测猪的断奶重。本发明公开了猪CNN3基因组DNA序列中的三个位点的突变，以及单个SNP位点检测仔猪初生重、21日龄断奶重的生长性能的技术，为猪的标记辅助育种提供了新的标记。

公开(公告)号：CN101892295A

公开(公告)日：2010-11-24

申请号：CN201010102428.9

申请日：2010-01-27

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 李奎 ,  鞠辉明 ,  白立景 ,  崔文涛 ,  牟玉莲 ,  唐中林 ,  杨述林 ,  程文科 ,  王志伟

IPC分类号： C12Q1/68 ,  G01N21/64

摘要： 本发明公开了一种鉴定转基因动物中目标基因拷贝数的方法。本发明提供的方法包括如下步骤：以转基因动物的基因组DNA为模板，分别用目标基因引物和内参基因引物进行荧光定量PCR，分别得到转基因动物的目标基因和内参基因的荧光定量PCR结果；以含有不同拷贝数的目标基因的标准品为模板，分别用目标基因引物和内参基因引物进行荧光定量PCR，分别得到标准品中的目标基因和内参基因的荧光定量PCR结果；根据标准品中的目标基因和内参基因的荧光定量PCR结果，构建关于目标基因和内参基因的循环次数的差值与目标基因拷贝数的自然对数的标准曲线，然后确定转基因动物中的目标基因的拷贝数。该方法简单易行、用传统的Southern blot方法的结果一致，说明准确可靠。

公开(公告)号：CN101892256A

公开(公告)日：2010-11-24

申请号：CN201010102427.4

申请日：2010-01-27

申请人： 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所

发明人： 李奎 ,  鞠辉明 ,  郑新明 ,  白立景 ,  崔文涛 ,  唐中林 ,  牟玉莲 ,  杨述林

IPC分类号： C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  A01K67/027

CPC分类号： C12N15/8509 ,  A01K67/0275 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/01 ,  A01K2267/02 ,  C07K14/61

摘要： 本发明公开了一种培育猪生长激素表达量增强的转基因动物的方法。本发明还公开了培育转基因胚胎的方法，是将如下1)或2)的重组表达载体导入目的胚胎中，得到猪生长激素表达量高于所述目的胚胎的转基因胚胎：1)TRE-GH和TET-ON；2)TRE-GH-TET-ON，其中TRE-GH是将序列表中序列2所示的DNA片段插入TRE载体的多克隆位点构成的重组表达载体，所述TRE载体是将序列表中序列1所示的DNA片段插入pUC19质粒的多克隆位点构成的重组载体；TRE-GH-TET-ON是将Nhel和HindIII双酶切TET-ON得到2.5Kb大小的片段与Nhel和HindIII双酶切TRE-GH得到的3.3KB大小的片段连接，得到的重组表达载体。将该胚胎移植至动物中即可获得转基因动物。实验证明加DOX后转基因猪血液内GH急剧增加。