一种高效表达生长激素的工程菌的制备方法及其应用

    公开(公告)号:CN109402134A

    公开(公告)日:2019-03-01

    申请号:CN201811442625.8

    申请日:2018-11-29

    发明人: 王库强 王峰

    摘要: 本发明公开了一种高效表达生长激素的工程菌的制备方法,包括以下步骤:1)通过PCR法对人生长激素hGH基因进行扩增,得到扩增后的hGH基因;2)将步骤1)中的扩增后的hGH基因连接到pMal-p2x载体上,得到重组质粒pMal-hGH;4)将步骤3)中的重组质粒导入到大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导蛋白表达,并确定表达正确后,获得高效表达生长激素的工程菌。本发明分别采用pMal-p2x作为载体,获得了重组质粒pMal-p2x-GH,pMal-p2x-GH的重组质粒的氨基端带有一个MBP蛋白标签,因而将重组质粒导入到大肠杆菌的受体中,可以将hGH和MBP标签进行融合表达,从而将hGH带到外周质空间,更有利于hGH蛋白的纯化,而且由于外周质的氧化环境,hGH蛋白能够正确形成二硫键,使蛋白具有较好的活性。

    一种生产猪生长激素的方法及其专用DNA片段

    公开(公告)号:CN101792766B

    公开(公告)日:2012-06-06

    申请号:CN201010033947.4

    申请日:2010-01-07

    摘要: 本发明公开了一种生产猪生长激素的方法及其专用DNA片段。该DNA片段,是如下1)或2):1)其核苷酸序列如序列表中序列3的自5’端6-1108位所示;2)其核苷酸序列如序列表中序列3所示。含有上述DNA片段的重组载体也属于本发明的保护范围之内。具体地,上述重组载体是将上述的DNA片段插入pcDNA3.1(+)的多克隆位点构成的重组表达载体。含有上述DNA片段的转基因细胞系也属于本发明的保护范围之内。上述转基因细胞培养后,pcDNA-GH12组GH表达量是转pcDNA质粒对照组的16410倍;pcDNA-GH12组的GH与内参beta-actin比值为0.278,显著高于正常对照组(转pcDNA空载体组)的0.016。说明含有第1,2内含子的情况下,GH的表达量更高。

    制备具有高唾液酸含量的重组糖蛋白的方法

    公开(公告)号:CN102482674A

    公开(公告)日:2012-05-30

    申请号:CN201180003414.4

    申请日:2011-02-01

    摘要: 本申请涉及制备具有高唾液酸含量的重组糖蛋白的方法。具体而言,对于UDP-GlcNAc 2-表异构酶/ManNAc激酶(GNE/MNK)酶(该酶中,通过仅用亮氨酸取代263位的精氨酸、或通过进一步用谷氨酰胺取代266位的精氨酸诱导了点突变)而言,该酶的表异构酶活性维持不变,不受CMP-唾液酸浓度的影响,并且,过表达该酶的细胞的胞内单磷酸胞苷(CMP)-唾液酸含量得以提高。特别是,由于在产生糖蛋白(如促红细胞生成素和促血小板生成素)的宿主细胞中(在该宿主细胞中,人α-2,3-唾液酸转移酶基因、CMP-唾液酸转运体基因和诱导有点突变的GNE/MNK基因同时得到过表达),细胞中的胞内CMP-唾液酸含量和糖蛋白中的唾液酸提高,因此,在产生唾液酸化重组糖蛋白的宿主细胞中,上述3种基因的过表达可用于制备唾液酸含量提高的糖蛋白。