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公开(公告)号：CN103397018A
公开(公告)日：2013-11-20
申请号：CN201310364133.2
申请日：2013-08-20
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
摘要： 本发明提供了一种DNA病毒基因组的定点改造方法，解决了现有技术诱导DNA病毒基因组定点突变困难，插入外源片段操作复杂，重组率较低的问题。将携带有核酸酶系统的质粒转染细胞后，再感染病毒，待细胞出现病变后，收集病变细胞，经冻融或超声处理后再离心，将上清液分离即得到子代病毒。本发明能够实现在筛选病毒减毒疫苗株、构建病毒性基因载体和溶瘤病毒、研究病毒功能序列等的应用，在病毒基因组进行改造过程中，提高诱变效率，精确控制DNA病毒进行基因组定点突变和特定基因敲除，简化外源基因插入DNA病毒载体的操作步骤，提高外源基因整合进入病毒基因组的效率，从而便于进行高通量的重组病毒筛选工作。
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公开(公告)号：CN106146679B
公开(公告)日：2019-02-01
申请号：CN201510196021.X
申请日：2015-04-23
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C08B37/00
摘要： 本发明公开了一种纯化细菌荚膜多糖的方法，所述纯化方法利用非离子表面活性剂，通过相分离法纯化细菌荚膜多糖。细菌荚膜多糖疫苗的制备过程中需要尽可能多地去除杂质蛋白和内毒素，以减少疫苗的副反应。目前使用的苯酚抽提法、柱层析法以及乙醇沉淀法，均存在诸多的缺陷。与苯酚相比，非离子表面活性剂具有无腐蚀性无致癌性等特点，并且不会对环境造成危害。与柱层析相比，本发明的方法处理量大、省时、经济、容易扩大生产规模，是一种安全、环保、高效的细菌荚膜多糖的纯化方法。
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公开(公告)号：CN106146679A
公开(公告)日：2016-11-23
申请号：CN201510196021.X
申请日：2015-04-23
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C08B37/00
CPC分类号： A61K39/095 , C08B37/00 , C08B37/0003
摘要： 本发明公开了一种纯化细菌荚膜多糖的方法，所述纯化方法利用非离子表面活性剂，通过相分离法纯化细菌荚膜多糖。细菌荚膜多糖疫苗的制备过程中需要尽可能多地去除杂质蛋白和内毒素，以减少疫苗的副反应。目前使用的苯酚抽提法、柱层析法以及乙醇沉淀法，均存在诸多的缺陷。与苯酚相比，非离子表面活性剂具有无腐蚀性无致癌性等特点，并且不会对环境造成危害。与柱层析相比，本发明的方法处理量大、省时、经济、容易扩大生产规模，是一种安全、环保、高效的细菌荚膜多糖的纯化方法。
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公开(公告)号：CN103397018B
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201310364133.2
申请日：2013-08-20
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
摘要： 本发明提供了一种DNA病毒基因组的定点改造方法，解决了现有技术诱导DNA病毒基因组定点突变困难，插入外源片段操作复杂，重组率较低的问题。将携带有核酸酶系统的质粒转染细胞后，再感染病毒，待细胞出现病变后，收集病变细胞，经冻融或超声处理后再离心，将上清液分离即得到子代病毒。本发明能够实现在筛选病毒减毒疫苗株、构建病毒性基因载体和溶瘤病毒、研究病毒功能序列等的应用，在病毒基因组进行改造过程中，提高诱变效率，精确控制DNA病毒进行基因组定点突变和特定基因敲除，简化外源基因插入DNA病毒载体的操作步骤，提高外源基因整合进入病毒基因组的效率，从而便于进行高通量的重组病毒筛选工作。
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公开(公告)号：CN112481222B
公开(公告)日：2024-01-02
申请号：CN202011375131.X
申请日：2020-11-30
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/50 , A61K39/245 , A61K39/215 , A61K39/295 , A61P31/22 , A61P31/14 , C12R1/93
摘要： 本发明提供了一种条件复制型单纯疱疹病毒、疫苗及其应用，所述重组HSV在其基因组内包含：复制必需基因和去稳定结构域编码基因嵌合形成的融合基因，以及通过基因组改造技术敲入的外源基因；复制必需基因包括UL54在内的一类复制必需基因；去稳定结构域编码基因改造于FK506结合蛋白12而来的FKBP12和其同类衍生物；外源基因包括严重急性呼吸综合征冠状病毒2的刺突蛋白基因。在稳定物存在的条件下，所述重组HSV可在宿主细胞内保持稳定并持续积累；在无稳定物存在时，重组HSV中复制必需蛋白在
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公开(公告)号：CN112481222A
公开(公告)日：2021-03-12
申请号：CN202011375131.X
申请日：2020-11-30
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N7/01 , C12N15/50 , A61K39/245 , A61K39/215 , A61K39/295 , A61P31/22 , A61P31/14 , C12R1/93
摘要： 本发明提供了一种条件复制型单纯疱疹病毒、疫苗及其应用，所述重组HSV在其基因组内包含：复制必需基因和去稳定结构域编码基因嵌合形成的融合基因，以及通过基因组改造技术敲入的外源基因；复制必需基因包括UL54在内的一类复制必需基因；去稳定结构域编码基因改造于FK506结合蛋白12而来的FKBP12和其同类衍生物；外源基因包括严重急性呼吸综合征冠状病毒2的刺突蛋白基因。在稳定物存在的条件下，所述重组HSV可在宿主细胞内保持稳定并持续积累；在无稳定物存在时，重组HSV中复制必需蛋白在宿主体外细胞或体内组织会被高效降解，从而导致重组病毒复制受到抑制，从而实现对病毒复制以及蛋白表达的条件限制性调控。
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公开(公告)号：CN106434720A
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201610626742.4
申请日：2016-08-03
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
CPC分类号： C12N15/70 , C07K14/22 , C12N15/66 , C12N2810/55
摘要： 本发明涉及提高重组脑膜炎奈瑟菌fHBP蛋白表达的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过分别更换流感嗜血杆菌P4外膜蛋白信号肽、大肠杆菌脂蛋白-28信号肽和大肠杆菌主要外膜脂蛋白信号肽表达重组脑膜炎奈瑟菌fHBP，表达量与带原始信号肽的脑膜炎奈瑟菌fHBP相比分别提高了2.68±0.32、1.94±0.17和2.91±0.25倍，解决了fHBP蛋白表达量低的问题，为重组脑膜炎奈瑟菌fHBP蛋白的工艺研发及疫苗应用奠定了基础。
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公开(公告)号：CN116635070A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202180078930.7
申请日：2021-11-24
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所 , 卢山
IPC分类号： A61K39/225
摘要： 提供了在受试者中抗SARS‑CoV‑2病毒感染的DNA疫苗，其包含编码SARS‑CoV‑2病毒的多肽的经密码子优化的多核苷酸序列。还提供了抗SARS‑CoV‑2病毒感染的疫苗组合，其包含所述DNA疫苗和抗原肽疫苗。在NHP研究中，该疫苗组合能够赋予抗SARS‑CoV‑2病毒感染的全面保护。
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公开(公告)号：CN107881152B
公开(公告)日：2021-06-29
申请号：CN201711406305.2
申请日：2017-12-22
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/867 , C12N15/65 , C12Q1/70 , C12R1/91
摘要： 本发明涉及一种用于检测甲型肝炎病毒滴度的细胞系及其构建方法与应用。本发明利用3ABC蛋白酶能与MAVS相互的性质，将MAVS C端与荧光蛋白构建融合蛋白，并将其包装成慢病毒颗粒，感染细胞后，表达的融合蛋白会锚定在细胞质中的线粒体上成点状分布，在嘌呤霉素筛选下，可得到稳定表达融合蛋白的稳定细胞系，当此细胞系被HAV感染后荧光蛋白会弥散在整个细胞或定位到细胞核中，在甲基纤维素存在下，可观察到荧光噬斑，通过计算噬斑数可检测HAV的感染性滴度。与传统方法相比，本发明方法检测HAV滴度仅需要1‑4天，显著缩短了的病毒检测周期，而且操作简单、灵敏度较高，可以直接观察到HAV的感染过程，易于推广应用。
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公开(公告)号：CN107881152A
公开(公告)日：2018-04-06
申请号：CN201711406305.2
申请日：2017-12-22
申请人： 中国医学科学院医学生物学研究所
IPC分类号： C12N5/10 , C12N15/867 , C12N15/65 , C12Q1/70 , C12R1/91
CPC分类号： C07K14/4703 , C12N15/65 , C12N15/86 , C12N2740/15043 , C12Q1/06
摘要： 本发明涉及一种用于检测甲型肝炎病毒滴度的细胞系及其构建方法与应用。本发明利用3ABC蛋白酶能与MAVS相互的性质，将MAVS C端与荧光蛋白构建融合蛋白，并将其包装成慢病毒颗粒，感染细胞后，表达的融合蛋白会锚定在细胞质中的线粒体上成点状分布，在嘌呤霉素筛选下，可得到稳定表达融合蛋白的稳定细胞系，当此细胞系被HAV感染后荧光蛋白会弥散在整个细胞或定位到细胞核中，在甲基纤维素存在下，可观察到荧光噬斑，通过计算噬斑数可检测HAV的感染性滴度。与传统方法相比，本发明方法检测HAV滴度仅需要1-4天，显著缩短了的病毒检测周期，而且操作简单、灵敏度较高，可以直接观察到HAV的感染过程，易于推广应用。
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