一种简易的植物人工microRNA构建方法

    公开(公告)号:CN109486820A

    公开(公告)日:2019-03-19

    申请号:CN201811581818.1

    申请日:2018-12-24

    发明人: 曹应龙 凌飞

    摘要: 本发明公开了一种简易的植物人工microRNA构建方法,包括如下步骤:S1:材料准备,S2:进行引物的设计,S3:表达载体的构建,S4:利用电激法将表达载体pCAM2300-35S-Ocs转入根癌农杆菌,S5:根据RNA提取试剂盒说明书分别提取野生型拟南芥叶片与PCR阳性株系拟南芥叶片总RNA,S6:利用现有技术,根据plc-miR213的序列设计扩增amiRNA前体片段的1~6引物,S7:最后将载体pGEM-ami213和表达载体pCAM2300-35S-Ocs用第一类限制性内切酶Kpn和rTaq型DNA聚合酶进行双酶切,该简易的植物人工microRNA构建方法构建过程中采用无菌的环境极大的保证了制取的准确性,其次检测步骤的存在能够保证构建的microRNA是符合构建标准的。

    水稻转基因细胞制备方法

    公开(公告)号:CN109022446A

    公开(公告)日:2018-12-18

    申请号:CN201810734302.X

    申请日:2018-07-05

    CPC分类号: C07K14/415 C12N15/66

    摘要: 本申请公开了一种水稻转基因细胞制备方法,筛选培养基包括:NB;2,4‑D 1.8‑2.0mg/mL;6‑BA 0.1‑0.2mg/mL;Hyg 20‑25mg/L,Timentin 200‑400mg/L,琼脂粉10‑15g/L。分化培养基包括:NB;Pro 0.3‑0.5g/L;CH 0.2‑0.3g/L;6‑BA 1.8‑2.0mg/mL;KT 0.8‑1.0mg/mL;NAA 0.3‑0.5mg/mL,IAA 0.4‑0.5mg/mL;Hyg 20‑25mg/L;Timentin 200‑400mg/L;蔗糖25‑30g/L;琼脂粉10‑15g/L。本发明方法可以在植物转基因初期可以观察到转基因是否成功的一种快捷的报告基因检测方法,为后续的高效率的阳性植株筛选提供了依据。

    一种提高集胞藻PCC6803铵盐耐受能力的方法与应用

    公开(公告)号:CN109022285A

    公开(公告)日:2018-12-18

    申请号:CN201810827491.5

    申请日:2018-07-25

    摘要: 本发明公开一种提高集胞藻PCC6803铵盐耐受能力的方法与应用,属于工业微生物领域。应用该方法得到了对铵盐耐受性显著提高的集胞藻PCC6803过表达藻株OE0528,该藻株可用于构建较高浓度铵盐废水净化的基因工程菌株。本发明的方法是通过过表达集胞藻PCC6803中的sll0528基因,得到的集胞藻PCC6803过表达藻株OE0528对铵盐的耐受能力显著提高。在180~210mM铵盐胁迫下,该过表达藻株的生长状态明显优于野生型。本发明得到的铵盐耐受性过表达藻株对进一步构建利用高浓度铵盐的基因工程菌具有重要的理论和实际意义,具有广泛的应用前景。