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公开(公告)号：CN102166375B
公开(公告)日：2013-04-10
申请号：CN201110039099.2
申请日：2011-02-16
申请人： 中国海洋大学 , 青岛中皓生物工程有限公司
摘要： 本发明涉及一种组织工程人角膜上皮的重建方法，是利用含20％小牛血清的DMEM/F12培养液将人角膜上皮细胞体外培养至对数生长期，采用胰蛋白酶和胰蛋白酶-EDTA消化法获得完全去除上皮层的消化羊膜载体支架，平铺在插入式培养皿中牢固干贴后，将悬浮于含有IV型胶原蛋白和10％小牛血清的DMEM/F12培养液的对数生长期人角膜上皮细胞，接种至平铺有去上皮层消化羊膜载体支架的插入式培养皿中采用气-液界面培养法进行组织工程人角膜上皮的体外重建。本发明工艺科学合理，所重建的组织工程人角膜上皮可用于批量生产，满足广大角膜上皮病盲患者临床角膜移植治疗对组织工程人角膜上皮的大量需求，且组织工程人角膜上皮体外重建和临床治疗的成本低。
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公开(公告)号：CN100370023C
公开(公告)日：2008-02-20
申请号：CN200510045184.4
申请日：2005-11-17
申请人： 中国海洋大学
摘要： 一种利用大菱鲆鳍细胞系繁殖大菱鲆出血性败血症病毒的方法，它是以大菱鲆鳍细胞系细胞为繁殖体系，先将大菱鲆出血性败血症病毒接种至对数期大菱鲆鳍细胞系细胞上，22℃吸附2h后，加入含10%小牛血清的MEM培养液置22℃培养，并于病毒接种后第4天收获培养物，经-30℃冻融1次后，离心收集上清液中的大菱鲆出血性败血症病毒液。本发明所得的繁殖病毒，数量大，感染能力高，可直接用于病毒疫苗的制备与生产，提高养殖大菱鲆的存活率。
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公开(公告)号：CN102168064B
公开(公告)日：2013-03-20
申请号：CN201110039014.0
申请日：2011-02-16
申请人： 中国海洋大学
摘要： 本发明涉及一种人角膜上皮细胞系的构建方法，构建方法是先将角膜消毒，再将角膜消化后，取下带有前弹力层的角膜上皮，剪成小的组织块后，将组织块向下平贴于培养孔的底部，然后加入培养液在二氧化碳培养箱中、37℃下进行贴板培养，培养期间更换培养液，细胞长成单层后进行传代培养，现已传至60代以上完成了人角膜上皮细胞系的构建；其中，培养液为含有20％胎牛血清、0.02‰～0.04‰的人表皮细胞生长因子、0.01‰～0.02‰的人碱性成纤维细胞生长因子、0.4‰～1.0‰羧甲基壳寡糖和0.25‰～1‰硫酸软骨素的DMEM/F12培养液，此外培养液还添加了0.08‰～0.1‰的IV型胶原。本发明的构建方法利用人角膜上皮组织成功建立了未经转染的人角膜上皮细胞系，建立的细胞系可以连续传代，能提供出大量的人角膜上皮细胞。
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公开(公告)号：CN102168064A
公开(公告)日：2011-08-31
申请号：CN201110039014.0
申请日：2011-02-16
申请人： 中国海洋大学
摘要： 本发明涉及一种人角膜上皮细胞系的构建方法，构建方法是先将角膜消毒，再将角膜消化后，取下带有前弹力层的角膜上皮，剪成小的组织块后，将组织块向下平贴于培养孔的底部，然后加入培养液在二氧化碳培养箱中、37℃下进行贴板培养，培养期间更换培养液，细胞长成单层后进行传代培养，现已传至60代以上完成了人角膜上皮细胞系的构建；其中，培养液为含有20％胎牛血清、0.02‰～0.04‰的人表皮细胞生长因子、0.01‰～0.02‰的人碱性成纤维细胞生长因子、0.4‰～1.0‰羧甲基壳寡糖和0.25‰～1‰硫酸软骨素的DMEM/F12培养液，此外培养液还添加了0.08‰～0.1‰的IV型胶原。本发明的构建方法利用人角膜上皮组织成功建立了未经转染的人角膜上皮细胞系，建立的细胞系可以连续传代，能提供出大量的人角膜上皮细胞。
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公开(公告)号：CN102166375A
公开(公告)日：2011-08-31
申请号：CN201110039099.2
申请日：2011-02-16
申请人： 中国海洋大学 , 青岛中皓生物工程有限公司
摘要： 本发明涉及一种组织工程人角膜上皮的重建方法，是利用含20％小牛血清的DMEM/F12培养液将人角膜上皮细胞体外培养至对数生长期，采用胰蛋白酶和胰蛋白酶-EDTA消化法获得完全去除上皮层的消化羊膜载体支架，平铺在插入式培养皿中牢固干贴后，将悬浮于含有IV型胶原蛋白和10％小牛血清的DMEM/F12培养液的对数生长期人角膜上皮细胞，接种至平铺有去上皮层消化羊膜载体支架的插入式培养皿中采用气-液界面培养法进行组织工程人角膜上皮的体外重建。本发明工艺科学合理，所重建的组织工程人角膜上皮可用于批量生产，满足广大角膜上皮病盲患者临床角膜移植治疗对组织工程人角膜上皮的大量需求，且组织工程人角膜上皮体外重建和临床治疗的成本低。
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公开(公告)号：CN1793342A
公开(公告)日：2006-06-28
申请号：CN200510045184.4
申请日：2005-11-17
申请人： 中国海洋大学
摘要： 一种利用大菱鲆鳍细胞系繁殖大菱鲆出血性败血症病毒的方法，它是以大菱鲆鳍细胞系细胞为繁殖体系，先将大菱鲆出血性败血症病毒接种至对数期大菱鲆鳍细胞系细胞上，22℃吸附2h后，加入含10％小牛血清的MEM培养液置22℃培养，并于病毒接种后第4天收获培养物，经－30℃冻融1次后，离心收集上清液中的大菱鲆出血性败血症病毒液。本发明所得的繁殖病毒，数量大，感染能力高，可直接用于病毒疫苗的制备与生产，提高养殖大菱鲆的存活率。
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