公开(公告)号：CN118109388A

公开(公告)日：2024-05-31

申请号：CN202410144951.X

申请日：2024-02-01

申请人： 中国海洋大学

发明人： 迟恒 ,  石雪燕 ,  战文斌 ,  绳秀珍 ,  邢婧 ,  唐小千

IPC分类号： C12N5/071 ,  A61K39/39 ,  A61P37/04

摘要： 本发明公开了一种富含抗原递呈分子MHCII阳性外泌体的制备方法，属于生物技术领域。本发明的方法包括如下步骤：鳗弧菌摇至对数生长期后将其灭活；取灭活的鳗弧菌溶液对鱼类进行腹腔注射，诱导6‑24h；将鱼类麻醉后，用注射器沿尾静脉抽取外周血；去除外周血后，用注射器向鱼类腹腔中注射无血清L15培养基；按摩鱼腹后，使用注射器沿腹腔上沿抽出腹腔液；最后采用连续梯度离心方法分离腹腔液得到MHCII阳性外泌体。本发明制备的富含抗原递呈分子MHCII阳性的外泌体在促进T细胞活化及疫苗免疫效力方面具有显著的作用。本发明通过适用于鱼类的刺激物和独特的鱼类腹腔灌洗方法创造性地建立了一种高效、高纯度和高得率的鱼类富含抗原递呈分子MHCII阳性外泌体的制备方法，具有重要的科学意义和应用价值。

公开(公告)号：CN114456235A

公开(公告)日：2022-05-10

申请号：CN202210190971.1

申请日：2022-02-24

申请人： 中国海洋大学

发明人： 邢婧 ,  田洪飞 ,  战文斌 ,  唐小千 ,  绳秀珍 ,  迟恒

IPC分类号： C07K7/08 ,  C07K16/28 ,  C07K16/06 ,  G01N33/569

摘要： 本发明涉及一种牙鲆T淋巴细胞表面标志分子CD8α抗体及其制备方法和应用，属于鱼类分子免疫学技术领域。上述牙鲆T淋巴细胞表面标志分子CD8α的多克隆抗体，是由氨基酸序列为：APRVIASTRSPSLT的牙鲆CD8α抗原表位肽‑KLH复合物免疫新西兰大白兔，纯化其血清而成。间接免疫荧光和免疫印迹实验显示本发明的兔多抗能够与转染牙鲆CD8α真核质粒的HEK293细胞和牙鲆头肾淋巴细胞反应。流式细胞术检测牙鲆外周血淋巴细胞中CD8α+T淋巴细胞数量比例为5.6±0.8%，脾脏淋巴细胞中CD8α+T淋巴细胞数量比例为14.8±1.6%，头肾淋巴细胞中CD8α+T淋巴细胞数量比例为19.5±0.9%。这些结果表明，上述多克隆抗体可以用作鉴定牙鲆T细胞亚群试剂，或用作研究牙鲆CD8+T淋巴细胞免疫应答的试剂。

公开(公告)号：CN110372797B

公开(公告)日：2022-03-29

申请号：CN201910685706.9

申请日：2019-07-28

申请人： 中国海洋大学

发明人： 绳秀珍 ,  刘敏 ,  战文斌 ,  唐小千 ,  邢婧

IPC分类号： C07K19/00 ,  C12N15/11 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  A61K39/09 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

摘要： 本发明提供一种牙鲆海豚链球菌GAPDH串联多表位多肽及其应用，所提供的串联多表位多肽，是用多肽接头连接的四个抗原表位肽；其中四个抗原表位肽的氨基酸序列分别为SEQ ID NO:1‑4。所提供的串联多表位多肽，其一种具体的氨基酸序列为SEQ ID NO:8。本发明另一个方面还提供一种海豚链球菌GAPDH多表位疫苗，是将上述的串联多表位多肽作为抗原与疫苗佐剂制备的。本发明所制备的多表位疫苗能够为牙鲆抗S.iniae感染提供较强的免疫保护，且效果明显高于GAPDH重组蛋白亚单位疫苗以及S.iniae灭活疫苗。

公开(公告)号：CN108341875B

公开(公告)日：2021-06-29

申请号：CN201810284612.6

申请日：2018-04-02

申请人： 中国海洋大学

发明人： 邢婧 ,  田洪飞 ,  战文斌 ,  唐小千 ,  绳秀珍

IPC分类号： C07K16/28 ,  C12N5/20 ,  G01N33/68 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种抗牙鲆T细胞表面标志分子CD4‑1的单克隆抗体，所述的单克隆抗体是由名称为：杂交瘤细胞JF‑CD4‑1‑2A10，保藏号为：CCTCC NO：C201879，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武汉大学，保藏日期为：2018年03月29日的杂交瘤细胞分泌的。所述单抗经间接酶联免疫反应实验结果显示单抗能与牙鲆CD4‑1多肽发生特异性结合，免疫间接荧光和流式细胞术表明单抗能特异性识别牙鲆淋巴细胞表面CD4‑1分子，免疫印迹结果显示：本发明的单克隆抗体能特异性识别牙鲆CD4‑1重组蛋白以及分子量约为52 kDa的牙鲆天然CD4‑1蛋白。本发明制备了抗牙鲆T细胞表面标志分子CD4‑1的单克隆抗体，为检测牙鲆CD4‑1+T淋巴细胞提供了重要工具。

公开(公告)号：CN110079507A

公开(公告)日：2019-08-02

申请号：CN201910370152.3

申请日：2019-05-06

申请人： 中国海洋大学

发明人： 绳秀珍 ,  刘苏苏 ,  战文斌 ,  唐小千 ,  邢婧

IPC分类号： C12N5/20 ,  C07K16/42 ,  G01N33/68 ,  G01N33/577

摘要： 本发明公开了一种特异性抗牙鲆黏膜免疫球蛋白IgT的单克隆抗体，所述的单克隆抗体是由名称为：杂交瘤细胞JF-IgT-1D8，保藏号为：CCTCCNO:C201971，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武汉大学，保藏日期为2019年04月29日的杂交瘤细胞分泌的。免疫印迹结果显示本发明的单抗能特异性识别牙鲆血清和黏液中分子量约为66kDa的牙鲆天然IgT蛋白，并且不与IgM蛋白发生交叉反应。本发明制备了特异性抗牙鲆IgT的单克隆抗体，为检测IgT分子以及牙鲆IgT+B淋巴细胞提供了重要工具。

公开(公告)号：CN106950368B

公开(公告)日：2019-02-15

申请号：CN201710143193.X

申请日：2017-03-11

申请人： 中国海洋大学

发明人： 绳秀珍 ,  李嘉文 ,  战文斌 ,  唐小千 ,  邢婧

IPC分类号： G01N33/569

摘要： 本发明提供一种病原性溶藻弧菌快速检测试纸，其中硝酸纤维素膜上从靠近金标垫一侧开始设有依次排列的四条检测线T1、T2、T3、T4和一条质控线，所述的四条检测线分别是溶藻弧菌的外膜蛋白、鞭毛蛋白、胞外产物和全菌破碎蛋白；靠近吸水垫的质控线为羊抗兔IgG。本发明提取病原菌多种抗原蛋白特异地排列组合起来，在试纸上与待检测样品同时进行反应，并在检测线T4上特别设置了全菌破碎蛋白，解决了其他菌的共同抗原导致的免疫交叉反应干扰结果判定的问题，可以准确地区分阳性结果和交叉反应。

公开(公告)号：CN104448000B

公开(公告)日：2018-04-13

申请号：CN201410787121.5

申请日：2014-12-18

申请人： 中国海洋大学

发明人： 战文斌 ,  张伟 ,  唐小千 ,  邢婧 ,  绳秀珍

IPC分类号： C07K16/42 ,  C12N5/20 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种抗大菱鲆血清免疫球蛋白M的单克隆抗体及其制备方法与应用，所述的单克隆抗体是由名称为：杂交瘤细胞株Sm‑IgM，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址：湖北省武汉市武汉大学，保藏号为：CCTCC NO:C2014158，保藏日期为：2014年9月2日的杂交瘤细胞分泌的。本发明所制备的抗大菱鲆免疫球蛋白M的单克隆抗体，可用于大菱鲆血清中免疫球蛋白M水平及淋巴细胞的检测，为大菱鲆免疫系统的研究以及免疫应答动态的监测提供有力工具。

公开(公告)号：CN103554255A

公开(公告)日：2014-02-05

申请号：CN201310435928.8

申请日：2013-09-24

申请人： 中国海洋大学

发明人： 邢婧 ,  战文斌 ,  谈艳苗 ,  唐小千 ,  绳秀珍

IPC分类号： C07K16/18 ,  G01N33/68 ,  G01N33/577

摘要： 本发明涉及一种抗栉孔扇贝C-型凝集素重组蛋白单克隆抗体，其是由名称为：杂交瘤细胞CfL290-1A2，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC NO：C201391，保藏日期为：2013年06月17日的杂交瘤细胞分泌的。其制备方法如下：首先，通过重组表达栉孔扇贝C-型凝集素成熟肽段蛋白，经纯化后作为抗原免疫Balb/c小鼠，采用细胞融合法制备杂交瘤细胞；再通过免疫学检测筛选方法，筛选出分泌所述抗栉孔扇贝C-型凝集素重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞CfL290-1A2，收集杂交瘤细胞培养上清，经纯化后得到抗栉孔扇贝C-型凝集素蛋白单克隆抗体。本发明单抗能与栉孔扇贝C-型凝集素发生特异性结合，可用于凝集素体外检测。

公开(公告)号：CN102132159B

公开(公告)日：2013-05-29

申请号：CN201080002349.9

申请日：2010-08-03

申请人： 中国海洋大学

发明人： 绳秀珍 ,  徐晓丽 ,  战文斌

IPC分类号： G01N33/569 ,  G01N33/543

CPC分类号： G01N33/56983

摘要： 本发明公开了一种鱼类淋巴囊肿病毒免疫检测芯片，其包括芯片载体、铺覆于芯片载体上的琼脂糖凝胶层、琼脂糖凝胶层上固定有多个抗体微阵列，各个微阵列之间用芯片专用围栏或SuperPAPPen划线隔开。本发明采用夹心法检测抗原，在芯片片基上固定病原的抗体，取病毒靶器官制备待检样品液，将待测样品液与固定有病原抗体的芯片孵育，再加荧光标记的特异性单抗探针，通过CCD扫描仪读取结果。该方法能同时检测多种样品或同一样品不同组织中淋巴囊肿病毒。

公开(公告)号：CN102206278A

公开(公告)日：2011-10-05

申请号：CN201110116313.X

申请日：2011-05-06

申请人： 中国海洋大学

发明人： 战文斌 ,  汪沐 ,  绳秀珍 ,  邢婧

IPC分类号： C07K16/28 ,  C12N5/20 ,  G01N33/577 ,  C12R1/91

摘要： 本发明公开了一种抗淋巴囊肿病毒27.8kDa受体蛋白的单克隆抗体，所述的单克隆抗体是由名称为：杂交瘤细胞ALR，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏号为：CCTCC C201128，保藏日期为：2011年4月25日的杂交瘤细胞分泌的。本发明的单克隆抗体在活细胞感染阻断实验中能与牙鲆鳃细胞膜上的LCDV27.8kDa受体蛋白特异性结合，阻止LCDV吸附于27.8kDa受体蛋白并与其结合进而感染FG细胞，因此本发明的单抗G具有阻断LCDV侵染FG细胞的功能。本发明的单抗G可以为弄清LCDV与宿主细胞相互作用关系及其感染机理提供重要工具，为寻找阻断LCDV感染的途径提供技术手段。