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公开(公告)号：CN103695469A
公开(公告)日：2014-04-02
申请号：CN201310558490.2
申请日：2013-11-12
申请人： 中山大学
IPC分类号： C12N15/867 , C12N5/10
摘要： 本发明具体公开了一种高效制备CD44基因缺陷小鼠诱导多能干细胞（IPSC）的方法。本发明首先利用TSA对小鼠成纤维细胞（MEF）进行预处理，然后再对MEF进行诱导重编程，IPSC的效率可以随着TSA的浓度升高而被提高。在挑取克隆前，将诱导后的MEF、未完全重编程、IPSC等细胞混合物，传代接种到包被有基质胶或基质膜的培养板上，IPSC的细胞比例可以提高100倍，克隆挑取的成功率提高了13.84%，增加了277.8倍。为提高IPSC的效率提供了新思路和新方法。
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公开(公告)号：CN103333918B
公开(公告)日：2015-12-02
申请号：CN201310243587.4
申请日：2013-06-19
申请人： 中山大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
摘要： 本发明具体公开了一种提高猪克隆胚胎体外发育效率的方法。本发明对骨髓来源的间充质干细胞进行了分子鉴定，建立了通过6通道流式技术利用少量细胞即可鉴定细胞纯度的方法；然后对猪骨髓间充质干细胞进行基因修饰，获得了表达多种重编程因子的猪骨髓间充质干细胞；利用荧光流式分选方法，分离出了阳性猪骨髓间充质干细胞，将其继续培养3~7days，再作为核供体细胞进行核移植，考察了4RFs-3days，6RFs-3days，4RFs-7days，6RFs-7days pMSC作为核供体细胞对猪克隆胚胎发育效率提高的影响；结果显示，4RFs-7days pMSC能更好地促进克隆胚胎的分裂以及囊胚的形成，有助于克隆胚胎形成较均一细胞数量的同质状态，为大规模高效地克隆成年优良品种猪奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103773805A
公开(公告)日：2014-05-07
申请号：CN201410029726.8
申请日：2014-01-17
申请人： 中山大学
IPC分类号： C12N15/877 , C12N5/10
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种猪克隆胚胎的制备方法。该制备方法包括：获得供体细胞；取重编程因子重组载体，转入所得供体细胞，得核供体细胞；将所得核供体细胞移植到去除细胞核的卵细胞中，融合和激活，即得。本发明提供的制备方法在获得核供体细胞之后直接移植到去除细胞核的卵细胞中，缩减了利用重编程因子制备猪克隆胚胎的步骤，操作简单易行，缩短了工作周期，且有效提高了猪克隆胚胎发育效率。
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公开(公告)号：CN103333918A
公开(公告)日：2013-10-02
申请号：CN201310243587.4
申请日：2013-06-19
申请人： 中山大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
摘要： 本发明具体公开了一种提高猪克隆胚胎体外发育效率的方法。本发明对骨髓来源的间充质干细胞进行了分子鉴定，建立了通过6通道流式技术利用少量细胞即可鉴定细胞纯度的方法；然后对猪骨髓间充质干细胞进行基因修饰，获得了表达多种重编程因子的猪骨髓间充质干细胞；利用荧光流式分选方法，分离出了阳性猪骨髓间充质干细胞，将其继续培养3~7days，再作为核供体细胞进行核移植，考察了4RFs-3days，6RFs-3days，4RFs-7days，6RFs-7dayspMSC作为核供体细胞对猪克隆胚胎发育效率提高的影响；结果显示，4RFs-7dayspMSC能更好地促进克隆胚胎的分裂以及囊胚的形成，有助于克隆胚胎形成较均一细胞数量的同质状态，为大规模高效地克隆成年优良品种猪奠定了基础。
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公开(公告)号：CN103695469B
公开(公告)日：2017-01-11
申请号：CN201310558490.2
申请日：2013-11-12
申请人： 中山大学
IPC分类号： C12N15/867 , C12N5/10
摘要： 本发明具体公开了一种高效制备CD44基因缺陷小鼠诱导多能干细胞（IPSC）的方法。本发明首先利用TSA对小鼠成纤维细胞（MEF）进行预处理，然后再对MEF进行诱导重编程，IPSC的效率可以随着TSA的浓度升高而被提高。在挑取克隆前，将诱导后的MEF、未完全重编程、IPSC等细胞混合物，传代接种到包被有基质胶或基质膜的培养板上，IPSC的细胞比例可以提高100倍，克隆挑取的成功率提高了13.84%，增加了277.8倍。为提高IPSC的效率提供了新思路和新方法。
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公开(公告)号：CN103773805B
公开(公告)日：2015-12-30
申请号：CN201410029726.8
申请日：2014-01-17
申请人： 中山大学
IPC分类号： C12N15/877 , C12N5/10
摘要： 本发明属于生物工程技术领域，公开了一种猪克隆胚胎的制备方法。该制备方法包括：获得供体细胞；取重编程因子重组载体，转入所得供体细胞，得核供体细胞；将所得核供体细胞移植到去除细胞核的卵细胞中，融合和激活，即得。本发明提供的制备方法在获得核供体细胞之后直接移植到去除细胞核的卵细胞中，缩减了利用重编程因子制备猪克隆胚胎的步骤，操作简单易行，缩短了工作周期，且有效提高了猪克隆胚胎发育效率。
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