公开(公告)号：CN118389444A

公开(公告)日：2024-07-26

申请号：CN202410589181.X

申请日：2024-05-13

申请人： 中山大学

发明人： 何祖勇 ,  焦亚飞 ,  丛佩清 ,  陈瑶生 ,  李心然 ,  郭津铭

IPC分类号： C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/89 ,  C12N15/12

摘要： 本发明公开了一种缓解BMP15缺陷导致的卵母细胞体外成熟障碍的方法，所述方法包括在具有BMP15缺陷的卵母细胞的培养过程中添加槲皮素。本发明还提供了槲皮素在用于缓解BMP15缺陷导致的卵母细胞体外成熟障碍中的用途。本发明还提供了一种crRNA和tracrRNA复合物及其用于获得具有BMP15缺陷的卵母细胞中的用途。本发明利用ctRNP编辑系统在猪卵母细胞的BMP15基因中形成双链断裂，通过基因编辑获得了BMP15敲低卵母细胞群，在BMP15基因编辑后添加槲皮素可促进卵母细胞成熟和卵丘颗粒细胞扩展，增加卵母细胞成熟促进因子的活性以及纺锤体正确组装和细胞器功能，为BMP15缺陷导致的女性不孕提供了可行的治疗方案。

公开(公告)号：CN117887771A

公开(公告)日：2024-04-16

申请号：CN202410061068.4

申请日：2024-01-15

申请人： 中山大学

发明人： 何祖勇 ,  焦亚飞 ,  丛佩清 ,  朱奕舟 ,  陈瑶生

IPC分类号： C12N15/90 ,  C12N15/113 ,  C12N5/10

摘要： 本发明公开了一种提高卵巢颗粒细胞对促卵泡素敏感性的方法，其中，该方法包括在卵巢颗粒细胞的BMPR1B基因引入第746位碱基发生了A＞G的突变。本发明还提供了一种gRNA和ssODN，其核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：3所示。本发明还提供了所述gRNA和ssODN用于提高卵巢颗粒细胞对促卵泡素敏感性的用途。本发明利用CRISPR/Cas9基因编辑系统和ssODN同源重组编辑技术编辑人卵巢颗粒细胞COV434的BMPR1B基因，通过基因编辑获得了FecBB点突变细胞系，该细胞系能够增加对促卵泡素的敏感性。

公开(公告)号：CN109371140B

公开(公告)日：2021-09-07

申请号：CN201811126441.0

申请日：2018-09-26

申请人： 中山大学

发明人： 郭春和 ,  董文娟 ,  朱振邦 ,  张晓晓 ,  俞飘 ,  贺胜 ,  王小瑛 ,  刘小红 ,  陈瑶生

IPC分类号： C12Q1/6888 ,  C12N15/11 ,  A61K38/17 ,  A61K45/00 ,  A61P31/04

摘要： 本发明公开了EXT1在筛选抗蓝耳病猪中的应用及一种基于EXT1的表达量筛选抗蓝耳病猪的方法。本发明研究显示，猪体内EXT1表达量与PRRSV感染息息相关，PRRSV感染Marc‑145细胞后EXT1 mNRA和蛋白水平升高，EXT1干扰促进PRRSV复制，EXT1过表达抑制病毒复制；当体内EXT1表达量较高时，猪对PRRSV具有抗性，反之易感。因此，EXT1可以作为一种新型的判定PRRSV易感性或抗性的标准，为鉴别猪对PRRSV易感性以及PRRSV抗性猪的筛选和培育奠定了坚实的基础，对PRRSV抗性猪的筛选和培育具有很好的临床应用价值，对猪蓝耳病的防控具有重要的意义，也有利于培育优良品系猪。

公开(公告)号：CN110453011A

公开(公告)日：2019-11-15

申请号：CN201910655860.1

申请日：2019-07-19

申请人： 中山大学

发明人： 郭春和 ,  赵娜 ,  贺胜 ,  王小瑛 ,  王刚 ,  刘小红 ,  陈瑶生

IPC分类号： C12Q1/70 ,  C12Q1/6844 ,  C12R1/93

摘要： 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas12a快速精准检测非洲猪瘟病毒的方法及应用。基于本发明研究，ASF病毒核酸与Cas12a、crRNA形成三元复合体时，该复合物中Cas12a的RuvC结构域行使DNase活性，切割带荧光信号标记的单链DNA，通过检测荧光即可得知待检样品中是否含有ASF病毒核酸。并设计了优质crRNA，构建了快速精准检测非洲猪瘟病毒的方法，对ASF病毒检测效果优异，特异性强、精准度高，灵敏度比荧光定量PCR高10倍以上，反应时间更短，无需昂贵仪器；另外对于病毒含量极低的弱阳性及疑似阳性样品也可通过适当延长反应时间即可确定样品是否含有ASFV。本发明方法能高效、精准检测非洲猪瘟病毒，具有操作简单，无需专业实验室等优点，为该病毒猪场一线快速检测提供有效的方法，对非洲猪瘟早期监测诊断与防控具有重要意义。

公开(公告)号：CN109207577A

公开(公告)日：2019-01-15

申请号：CN201810858762.3

申请日：2018-07-31

申请人： 中山大学

发明人： 郭春和 ,  张晓晓 ,  朱振邦 ,  俞飘 ,  董文娟 ,  贺胜 ,  王小瑛 ,  刘小红 ,  陈瑶生

IPC分类号： C12Q1/6883 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了MARCO在筛选抗蓝耳病猪中的应用。本发明研究显示，猪体内MARCO表达量与PRRSV感染息息相关，PRRSV感染PAMs后抑制MARCO表达，MARCO干扰促进PRRSV复制，MARCO过表达抑制病毒复制；当体内MARCO表达量异常较高时，猪对PRRSV具有抗性，反之易感。因此，MARCO可以作为一种新型的判定PRRSV易感性或抗性的标准，为鉴别猪对PRRSV易感性以及PRRSV抗性猪的筛选和培育奠定了坚实的基础，对PRRSV抗性猪的筛选和培育具有很好的临床应用价值，对猪蓝耳病的防控具有重要的意义，也有利于培育优良品系猪。

公开(公告)号：CN108424929A

公开(公告)日：2018-08-21

申请号：CN201810063376.5

申请日：2018-01-23

申请人： 中山大学

发明人： 何祖勇 ,  陈瑶生 ,  刘小红 ,  刘红波 ,  石翾 ,  秦珂 ,  刘小凤

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/66 ,  A01K67/027

摘要： 本发明提供了一种猪MC1R基因的Cas9/sgRNA共表达载体，其包括pX458载体以及连接在pX458载体上的靶向猪MC1R基因的sgRNA，靶向猪MC1R基因的sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。本发明可以在猪的基因组内实现精确的基因修饰，同时不引入任何外源DNA序列，保留其肉质优良、口感好等优良性状，有效地避免了传统转基因技术可能产生的生物安全风险。

公开(公告)号：CN105477011B

公开(公告)日：2018-02-27

申请号：CN201610016839.3

申请日：2016-01-08

申请人： 中山大学

发明人： 郭春和 ,  刘小红 ,  陈瑶生 ,  朱振邦

IPC分类号： A61K31/731 ,  A61P31/14

摘要： 本发明公开了卡拉胶（Carrageenan，CG）在制备抗PRRSV病毒的药物中的应用，以及卡拉胶CG在制备防治猪蓝耳病的药物中的应用。本发明首次公开了卡拉胶CG对PRRSV病毒的抗病毒作用，尤其是对HP‑PRRSV有很好的抗病毒效果，有望成为一种新型的防治猪蓝耳病的药物，对猪蓝耳病的治疗提供了一种新的药物和药物基础。而且，CG对细胞及机体几乎无毒性，故在猪蓝耳病的防治方面具有很好的应用前景。另外，本发明通过多种方法验证研究了CG对HP‑PRRSV的抗病毒作用，而且阐述了其在病毒吸附和进入细胞两个过程中的抗病毒机制，为CG在抗PRRSV病毒以及治疗猪蓝耳病方面的应用奠定了坚实的基础。

公开(公告)号：CN106244682A

公开(公告)日：2016-12-21

申请号：CN201610615795.6

申请日：2016-07-29

申请人： 中山大学

发明人： 郭春和 ,  刘小红 ,  陈瑶生 ,  朱振邦

IPC分类号： C12Q1/68 ,  C12N15/11

摘要： 本发明公开了TREM-2基因在鉴别猪对蓝耳病毒易感性中的应用，并提供了一组TREM-2基因表达量检测引物，包括上游引物TREM2-F和下游引物TREM2-R，序列分别如SEQ ID NO.1~2所示。本发明研究显示，猪体内TREM-2基因表达量与PRRSV感染息息相关，TREM-2可以通过调节CD163的表达进而调节PRRSV的复制；当TREM-2表达量低时，猪对PRRSV具有抗性，反之易感。TREM-2基因可以作为一种新型的判定PRRSV易感性的标准，为鉴别猪对PRRSV易感性以及PRRSV抗性猪的筛选和培育奠定了坚实的基础，对猪蓝耳病的防控具有重要的意义。

公开(公告)号：CN103623391A

公开(公告)日：2014-03-12

申请号：CN201310469273.6

申请日：2013-10-10

申请人： 中山大学

发明人： 刘小红 ,  郭春和 ,  莫德林 ,  陈瑶生 ,  高进涛

IPC分类号： A61K38/10 ,  A61K9/19 ,  A61K9/20 ,  A61K9/48 ,  A61K9/16 ,  A61P31/14

CPC分类号： Y02A50/473

摘要： 本发明属于医药技术领域，具体公开了抗菌肽Protegrin-1在制备抗猪蓝耳病药物中的应用。本发明首先根据已报道的Protegrin-1的氨基酸序列，化学合成抗菌肽Protegrin-1，然后通过抗大肠杆菌DH5α实验验证其抗菌活性，并利用Marc-145细胞，通过qRT-PCR、Western-Blot、细胞上清TCID50检测及IFA等方法研究其对HP-PRRSV的抗病毒作用，进一步在病毒吸附和进入细胞两个过程阐述其抗病毒机制。结果发现Protegrin-1对HP-PRRSV有很好的抗病毒效果，有望成为一种新型的防治猪蓝耳病的药物。

公开(公告)号：CN103333918A

公开(公告)日：2013-10-02

申请号：CN201310243587.4

申请日：2013-06-19

申请人： 中山大学

发明人： 宋振威 ,  丛佩清 ,  冀倩倩 ,  赵海静 ,  何祖勇 ,  陈瑶生

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

摘要： 本发明具体公开了一种提高猪克隆胚胎体外发育效率的方法。本发明对骨髓来源的间充质干细胞进行了分子鉴定，建立了通过6通道流式技术利用少量细胞即可鉴定细胞纯度的方法；然后对猪骨髓间充质干细胞进行基因修饰，获得了表达多种重编程因子的猪骨髓间充质干细胞；利用荧光流式分选方法，分离出了阳性猪骨髓间充质干细胞，将其继续培养3~7days，再作为核供体细胞进行核移植，考察了4RFs-3days，6RFs-3days，4RFs-7days，6RFs-7dayspMSC作为核供体细胞对猪克隆胚胎发育效率提高的影响；结果显示，4RFs-7dayspMSC能更好地促进克隆胚胎的分裂以及囊胚的形成，有助于克隆胚胎形成较均一细胞数量的同质状态，为大规模高效地克隆成年优良品种猪奠定了基础。