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公开(公告)号：CN116769977B
公开(公告)日：2023-11-03
申请号：CN202311042146.8
申请日：2023-08-18
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明目的在于提供一种PEMV‑1、BYMV、BrYV一步法多重RT‑PCR检测引物组、试剂盒及方法，涉及病毒检测技术领域，本发明可同时检测PEMV‑1、BYMV、BrYV三种病毒。具体包括：提取待测样品总核酸作为模板，采用针对PEMV‑1、BYMV、BrYV三种病毒的特异性检测引物，一步法多重RT‑PCR技术扩增目的片段，可高效、快速、灵敏地检测出样品中的PEMV‑1、BYMV、BrYV。本发明具有操作简单高效、节省时间、节约成本、稳定性高等优点，为PEMV‑1、BYMV、BrYV的快速检测和防治提供技术支持。
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公开(公告)号：CN102230027B
公开(公告)日：2013-03-13
申请号：CN201110156722.2
申请日：2011-06-10
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明涉及一种同步检测SPFMV、SPVC、SPVG和SPV2的方法，属植物保护领域。通过分别设计合成SPFMV、SPVC、SPVG和SPV2特异性的正向引物和四种病毒的通用反向引物，CTAB法提取病组织总核酸，采用一步法四重RT-PCR，达到对这四种病毒的同步检测。所设计的引物特异性强，且四种病毒共用一条反向引物，显著减少了引物间的相互作用。将CTAB法应用到RNA病毒侵染植物组织的核酸提取中，既能保证RNA质量，又有效降低了检测成本。反转录与多重PCR一步完成，节约了检测时间。本发明具有快速、高效、特异性强、灵敏度高和成本低廉等优点，能一次实现四种甘薯病毒的同步检测，具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN115927757A
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN202211567418.1
申请日：2022-12-07
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明涉及一种基于PEMV‑1和PEMV‑2侵染性克隆高效筛选抗病毒种质资源的方法；包括：农杆菌浸根步骤。本发明具有以下优点：1、本发明方法操作简便，具有比人工摩擦接种更省时、更方便的优点；2、本发明方法可以通过调节侵染性克隆的浓度来控制病毒的接种量，同一批次的不同植株之间接种量误差小；3、本发明方法中一种侵染性克隆只具有一种病毒的侵染活性，解决了毒源不纯的问题，满足了要求特定病原接种的实验条件；4、本发明方法接种效果好，对植株的侵染率高；5、本发明方法使植株获毒时间早，病毒在植株体内积累的时间长；6、本发明方法成本相对较低，接种操作时间短。
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公开(公告)号：CN111455109B
公开(公告)日：2022-04-08
申请号：CN202010294114.7
申请日：2020-04-15
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明涉及一种同步检测ZYMV、PRSV和ZTMV的方法，属于植物保护领域，本发明通过设计ZYMV、PRSV和ZTMV 3种病毒的特异性检测引物，并采用CTAB法提取感病样品总核酸作为模板，利用一步法多重RT‑PCR技术实现同时检测ZYMV、PRSV和ZTMV 3种病毒。通过反应体系与反应条件的优化，该方法可以高效、准确实现对ZYMV、PRSV和ZTMV 3种病毒的特异性检测，较传统RT‑PCR检测过程中只能检测单一病毒具有更高的效率，降低了检测成本，又可以保证检测结果的准确性，在上述3种病毒病检测中具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN116926121A
公开(公告)日：2023-10-24
申请号：CN202311205212.9
申请日：2023-09-19
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明涉及一种带有GFP基因的重楼花叶坏死病毒侵染性克隆载体及其构建方法，属于植物病毒学和基因工程领域。本发明中带GFP基因的重楼花叶坏死病毒侵染性克隆载体，是利用酵母重组的方法，将PMNV全基因组RNA对应的cDNA全长序列克隆至pCB301‑HDV‑2µ载体的双35S启动子和终止子NOS之间，并把绿色荧光蛋白报告基因插入到PMNV的NIb蛋白和CP蛋白之间，即获得pCB301‑PMNV‑GFP重组载体。本发明利用酵母同源重组技术构建的PMNV侵染性克隆载体是重楼上植物病毒的第一个侵染性克隆，本发明中构建的pCB301‑PMNV‑GFP载体能稳定高效系统侵染模式植物本生烟，并在本生烟体内高效表达GFP。
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公开(公告)号：CN111057789A
公开(公告)日：2020-04-24
申请号：CN201911262660.6
申请日：2019-12-11
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明涉及一种同步检测PNVY和TYLCCNV的方法，属于植物保护领域，本发明涉及到的两种病毒的核酸类型不同，设计合成检测PnVY和TYLCCNV的引物，并筛选适用于两种病毒复合侵染的特异性引物；用CTAB法提取染病植物组织的总核酸，既能保证所提核酸中有DNA和RNA，也能降低检测成本；优化一步法双重检测体系，达到对PnVY和TYLCCNV的同步快速检测。该方法整个检测过程所用时间短，减少了试剂污染和反应中的影响因素，能够有效单一或复合识别PnVY、TYLCCNV，保证了检测结果的准确性。
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公开(公告)号：CN107058611B
公开(公告)日：2020-02-04
申请号：CN201611174200.4
申请日：2016-12-19
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明属于分子生物学和病毒学技术领域，具体涉及一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物及其方法；所述的烟草花叶病毒属病毒通用检测引物对序列为：正向引物TobamodF：5’‑TKGAYGGNGTBCCNGGNTGYGG‑3’，反向引物TobamodR：5’‑ACNGAVTBNABCTGTAATTGCTAT‑3’；本发明中的检测引物是基于烟草花叶病毒属中的32种病毒基因组保守区序列进行设计，用该属中的7种病毒对该对引物进行扩增效果验证，扩增效果均较好；从而建立了一种能够检测至少7种烟草花叶病毒属病毒的通用检测引物及方法，且具有检测效率高、灵敏度高、成本低的特点。
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公开(公告)号：CN107058611A
公开(公告)日：2017-08-18
申请号：CN201611174200.4
申请日：2016-12-19
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明属于分子生物学和病毒学技术领域，具体涉及一种烟草花叶病毒属病毒通用检测引物及其方法；所述的烟草花叶病毒属病毒通用检测引物对序列为：正向引物TobamodF：5’‑TKGAYGGNGTBCCNGGNTGYGG‑3’，反向引物TobamodR：5’‑ACNGAVTBNABCTGTAATTGCTAT‑3’；本发明中的检测引物是基于烟草花叶病毒属中的32种病毒基因组保守区序列进行设计，用该属中的7种病毒对该对引物进行扩增效果验证，扩增效果均较好；从而建立了一种能够检测至少7种烟草花叶病毒属病毒的通用检测引物及方法，且具有检测效率高、灵敏度高、成本低的特点。
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公开(公告)号：CN116926121B
公开(公告)日：2024-01-26
申请号：CN202311205212.9
申请日：2023-09-19
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明涉及一种带有GFP基因的重楼花叶坏死病毒侵染性克隆载体及其构建方法，属于植物病毒学和基因工程领域。本发明中带GFP基因的重楼花叶坏死病毒侵染性克隆载体，是利用酵母重组的方法，将PMNV全基因组RNA对应的cDNA全长序列克隆至pCB301‑HDV‑2µ载体的双35S启动子和终止子NOS之间，并把绿色荧光蛋白报告基因插入到PMNV的NIb蛋白和CP蛋白之间，即获得pCB301‑PMNV‑GFP重组载体。本发明利用酵母同源重组技术构建的PMNV侵染性克隆载体是重楼(56)对比文件杨林毅;陈潞;陈泽历;飞进强;王喆;徐绍忠;赵明富;文国松.滇重楼辣椒轻斑驳病毒分离物的鉴定及全基因组序列分析.湖北农业科学.2020,(13),第.张润;王连春;陈海如;李凡.烟草丛顶病毒编码的沉默抑制子初步鉴定.云南农业大学学报(自然科学版).2011,(06),第154-157+162页.
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公开(公告)号：CN115976277B
公开(公告)日：2024-01-19
申请号：CN202211241715.7
申请日：2022-10-11
申请人： 云南农业大学
摘要： 本发明申请是关于一种PEMV‑1和PEMV‑2的RT‑PCR同步检测试剂盒及检测方法，基于一步法多重RT‑PCR检测方法，属于植物保护领域。本发明通过设计PEMV‑1、PEMV‑2两种病毒的特异性检测引物，并采用CTAB法提取染病样品总核酸作为模板，利用一步法多重RT‑PCR技术实现对PEMV‑1、PEMV‑2两种病毒的同步检测。通过对反应体系和反应条件的优化，该方法可以高效、快速、准确地实现对PEMV‑1、PEMV‑2两种病毒的特异性检测，较传统RT‑PCR检测方法一次只能检测单一病毒更具高效性，且显著降低了检测成本，极大地节约了检测时间。
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