公开(公告)号：CN117646012A

公开(公告)日：2024-03-05

申请号：CN202311503823.1

申请日：2023-11-10

Applicant: 内蒙古农业大学

Inventor： 张之为 ,  田再民 ,  张键 ,  赵君 ,  康丽茹 ,  高婧 ,  张文兵 ,  杨佳乐

IPC: C12N15/55 ,  C12N9/14 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/82 ,  C12Q1/6895

Abstract: 本发明公开了一种马铃薯抗性小G蛋白基因StRab 5b的克隆方法及应用，涉及克隆技术领域，包括以下步骤：步骤一：收集叶片组织，提取总RNA；步骤二：检测RNA的完整性；步骤三：利用反转录试剂盒，将其反转录为cDNA；步骤四：以cDNA为模板，用引物进行PCR扩增；步骤五：PCR扩增产物进行1.0％琼脂糖凝胶电泳，用凝胶回收试剂盒纯化后，克隆到pEASY‑Blunt Cloning vector载体中，转化大肠杆菌DH5α后进行测序；步骤六：利用软件DnaMan软件进行序列分析，获得StRab 5b基因ORF全部序列，cDNA全长为603bp，编码200个氨基酸，本发明从马铃薯中克隆得到小G蛋白基因StRab 5b，通过人工接种晚疫病菌，确定StRab 5b基因在马铃薯晚疫病抗病性中的重要作用。