公开(公告)号：CN118562842A

公开(公告)日：2024-08-30

申请号：CN202410783698.2

申请日：2024-06-18

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 王佳 ,  胡陈渝 ,  陆亮宇 ,  袁其朋 ,  申晓林 ,  孙新晓

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N15/61 ,  C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12P17/18 ,  C12P17/10 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了构建高效生物合成次黄嘌呤大肠杆菌平台菌株并合成其衍生物的方法与应用。首先敲除磷酸核糖转移酶增加前体PRPP，其次敲除葡萄糖磷酸异构酶、丙酮酸激酶弱化糖酵解途径，改造ptsG系统减少副产物积累，最后过表达α‑D‑核糖‑1‑磷酸5‑激酶和核糖1,5‑二磷酸激酶将损失的磷酸核糖转化为PRPP，构建次黄嘌呤高产平台菌株。该平台菌株为生物合成尿囊素、咖啡碱和苦茶碱奠定基础。合成尿囊素首先筛选尿酸氧化酶和黄嘌呤脱氢酶，在次黄嘌呤平台菌株合成尿囊素，且发酵罐产量达到了克级以上。合成咖啡碱通过筛选N‑甲基转移酶，构建全新的合成途径。本发明以咖啡碱途径为基础设计苦茶碱的合成途径，表征路径中的关键酶。

公开(公告)号：CN115449526A

公开(公告)日：2022-12-09

申请号：CN202211147985.1

申请日：2022-09-20

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 王佳 ,  陆亮宇 ,  袁其朋 ,  申晓林 ,  孙新晓

IPC: C12P7/22 ,  C12P7/42 ,  C12N15/70 ,  C12N15/53 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/61 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了高效生物合成苯丙酮酸衍生物的方法，涉及的苯丙酮酸衍生物包括苯甲醇、苯乙醇、尿黑酸和酪醇。合成三种产物的途径包含多种酶：分支酸变位酶(pheA)，4‑羟基扁桃酸合酶(hmaS)，S‑扁桃酸脱氢酶(mdlB)，苯甲酰甲酸脱羧酶(mdlC)，氨基酸脱羧酶(aro10)，乙醇脱氢酶(adh6)，4‑羟基苯丙酮酸双加氧酶(HPPD)，和解除反馈抑制的预苯酸脱氢酶(tyrAfbr)。首先以苯丙酮酸作为终产物对野生大肠杆菌进行改造，通过阻断竞争途径(苯丙氨酸、酪氨酸合成途径)和调整中心碳代谢构建了高产苯丙酮酸的宿主，然后将三种产物的合成途径导入宿主，实现了三种苯丙酮酸衍生物以葡萄糖为碳源的高效从头生物合成。本发明极具工业生产前景。

公开(公告)号：CN115491368A

公开(公告)日：2022-12-20

申请号：CN202211140011.0

申请日：2022-09-20

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 王佳 ,  陆亮宇 ,  袁其朋 ,  申晓林 ,  孙新晓

IPC: C12N9/88 ,  C12N9/04 ,  C12N9/10 ,  C12P7/26 ,  C12P19/44

Abstract: 本发明公开了一种生物合成4‑羟基苯乙酮和云杉苷的方法，合成途径中包含5个酶，分别为酪氨酸解氨酶(TAL)，阿魏酸脱羧酶(FDC1)，阿魏酸脱羧酶突变体(将阿魏酸脱羧酶46位的缬氨酸突变为谷氨酸)(FDC1_V46E简称为FDC1*)，(S)1‑苯乙醇脱氢酶(ped)和糖基转移酶(UGT72E2)。将这些酶所编码的基因分别在宿主中表达，结果得到可以分别利用对香豆酸，对羟基苯乙烯，对羟基‑1‑苯乙醇和对羟基苯乙酮生产对羟基苯乙烯，对羟基‑1‑苯乙醇，对羟基苯乙酮和云杉苷的生产宿主。将上述5个酶所编码的基因导入宿主菌中实现了对羟基苯乙酮和云杉苷的从头合成。本发明极具工业化生产前景。

公开(公告)号：CN119320734A

公开(公告)日：2025-01-17

申请号：CN202410763495.7

申请日：2024-06-13

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 王佳 ,  程艺苑 ,  陆亮宇 ,  袁其朋 ,  申晓林 ,  孙新晓

IPC: C12N1/21 ,  C12P7/42 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了构建稳定遗传的对羟基苯乙酸高效生物合成的基因工程菌株的方法及其应用。首先，在宿主内改造PTS系统，敲除编码丙酮酸激酶、酪氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、支链氨基酸氨基转移酶的基因，构建能够高产对羟基苯丙酮酸的宿主菌株。其次，在该宿主内整合编码苯丙酮酸脱羧酶和苯乙醛脱氢酶的基因，构建能够生产对羟基苯乙酸的菌株。最后将编码核心途径的基因莽草酸途径基因整合到上述工程菌的基因组上，构建了稳定遗传的对羟基苯乙酸高效生物合成的基因工程菌株，摆脱了应用质粒对工程菌生产造成不稳定的影响，对对羟基苯乙酸的工业化生产极具有应用前景。

公开(公告)号：CN115478082A

公开(公告)日：2022-12-16

申请号：CN202211140012.5

申请日：2022-09-20

Applicant: 北京化工大学

Inventor： 王佳 ,  陆亮宇 ,  袁其朋 ,  申晓林 ,  孙新晓

IPC: C12P7/62 ,  C12R1/125 ,  C12R1/19 ,  C12R1/01 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种生物合成乙酸苄酯的方法，合成途径中包含5个酶，分别为分支酸变位酶(pheA)，4‑羟基扁桃酸合酶(hmaS)，S‑扁桃酸脱氢酶(mdlB)，苯甲酰甲酸脱羧酶(mdlC)，乙醇氧乙酰转移酶(ATF2)。将ATF2所编码的基因在宿主中表达，结果得到可以利用苯甲醇生产乙酸苄酯的生产宿主。将上述基因导入苯甲醇的高产宿主中实现了乙酸苄酯的从头合成。同时本发明还公开了一种提高乙酸苄酯产量的方法，是通过利用辅助扩散系统取代天然的葡萄糖转运系统(PTS)，延迟了细胞的生长，提供了更多的乙酰CoA，使得乙酸苄酯的产量跟高。本发明方法对乙酸苄酯的工业化具有应用前景。