一种筛选sgRNA骨架活性突变体的系统及方法

    公开(公告)号:CN118853714A

    公开(公告)日:2024-10-29

    申请号:CN202410150482.2

    申请日:2024-02-02

    摘要: 本发明提供了一种快速筛选sgRNA骨架(sgRNA scaffold)活性突变体序列的系统和方法,属于生物工程技术领域。所述体系包含Cas蛋白表达载体和sgRNA骨架突变体筛选载体;所述Cas蛋白表达载体上包含以下表达元件:Cas蛋白编码基因、质粒复制子、以及第一抗性筛选标签表达盒;所述sgRNA骨架突变体筛选载体包含以下表达元件:复制子、第二抗性筛选标签表达盒、第三抗性筛选标签表达盒、用于表达sgRNA骨架序列的启动子和终止子。所述系统和方法可以应用于CRISPR基因编辑系统sgRNA骨架元件的筛选,利用本方法,能够得到序列多样的sgRNA骨架,进而应用于多靶点基因编辑、菌株库的构建等领域,拓展CRISPR基因编辑系统的应用领域和编辑效率。

    一种高通量筛选sgRNA骨架活性突变体的系统及方法

    公开(公告)号:CN118497238A

    公开(公告)日:2024-08-16

    申请号:CN202410463389.7

    申请日:2024-04-17

    摘要: 本发明提供了一种高通量筛选sgRNA骨架(sgRNAscaffold)活性突变体序列的系统和方法,属于生物工程技术领域。所述体系包含Cas蛋白表达载体和sgRNA骨架突变体筛选载体;所述Cas蛋白表达载体上包含以下表达元件:Cas蛋白编码基因、质粒复制子、以及第一抗性筛选标签表达盒;所述sgRNA骨架突变体筛选载体包含以下表达元件:复制子、第二抗性筛选标签表达盒、第三筛选标记表达盒、用于表达sgRNA骨架序列的启动子和终止子。所述系统和方法可以应用于CRISPR基因编辑系统sgRNA骨架元件的筛选,利用本方法,能够得到序列多样的sgRNA骨架,进而应用于多靶点基因编辑、多基因转录调控、菌株库构建等领域,拓展CRISPR基因编辑系统的应用领域和编辑效率。

    一种适用于筛选高产非蛋白质氨基酸的菌株的方法

    公开(公告)号:CN116376947A

    公开(公告)日:2023-07-04

    申请号:CN202111599379.9

    申请日:2021-12-24

    摘要: 本发明涉及一种筛选高产非蛋白质氨基酸的菌株的方法,属于生物工程技术领域。本发明提供一种适用于筛选高产非蛋白质氨基酸的菌株的方法。本发明所提供的筛选方法是按照包括以下步骤进行:以非蛋白质氨基酸的翻译元件作为筛选标记,将其核酸序列中某一氨基酸的部分或全部密码子替换为不编码氨基酸的核苷酸序列组合,在微生物的突变库中转化入筛选标记,通过检测筛选标记造成的菌株表型差异,可以从突变菌株中挑选出高产非天然氨基酸的菌株。本发明所提供的方法可以高通量从不同微生物菌种筛选高产天然氨基酸的菌株。

    一种提升氨基酸胁迫条件下菌株性能的代谢工程方法

    公开(公告)号:CN116103325A

    公开(公告)日:2023-05-12

    申请号:CN202111353872.2

    申请日:2021-11-10

    摘要: 工业生产和学术研究中,目标化合物的大量合成会引发微生物内源氨基酸的浓度降低,进而导致了发酵后期的蛋白表达水平下降、目标化合物的生产停滞和菌株性能的下降。因此,氨基酸资源的匮乏和不均衡分配是发酵生产的限制瓶颈之一。本发明提供了一种简易可行的代谢工程方法,即采用经密码子敏感性改造的基因序列进行目标蛋白的表达和目标化合物的生产,能够在氨基酸匮乏条件下集中资源优先翻译目标化合物的合成途径,在不影响细胞生长的条件下实现资源配置的优化,最终实现抵抗氨基酸胁迫的蛋白质表达,提高目标化合物的发酵产量,提升氨基酸胁迫条件下的菌株性能。

    一株pH和尿素耐受性提高的枯草芽胞杆菌

    公开(公告)号:CN117736949A

    公开(公告)日:2024-03-22

    申请号:CN202311452554.0

    申请日:2023-11-02

    IPC分类号: C12N1/21 C12R1/125

    摘要: 本发明涉及一株敲除枯草芽胞杆菌168非必需基因大片段获得的21号菌株,可以用于底盘菌改造、耐受性提升、菌株性能优化、代谢工程等领域,属于合成生物学技术领域。所述菌株是通过对枯草芽胞杆菌168基因组上SEQ ID NO.1所示的序列进行敲除获得的,能够显著提高在低pH及高浓度尿素条件下的生长能力,可应用于耐酸底盘菌构建、尿素耐受底盘菌构建、氨基酸生产、乳酸生产、脲酶生产、尿素降解等领域。

    一株耐受低pH和高浓度尿素的枯草芽胞杆菌

    公开(公告)号:CN118620810A

    公开(公告)日:2024-09-10

    申请号:CN202311452002.X

    申请日:2023-11-02

    IPC分类号: C12N1/21 C12R1/125

    摘要: 本发明涉及一株敲除枯草芽胞杆菌168非必需基因大片段获得的5号菌株,可以用于底盘菌改造、耐受性提升、菌株性能优化、代谢工程等领域,属于合成生物学技术领域。所述菌株是通过对枯草芽胞杆菌168基因组上第608,246到634,651位的序列进行敲除获得的,能够显著提高在低pH及高浓度尿素条件下的生长能力,可应用于耐酸底盘菌构建、尿素耐受底盘菌构建、氨基酸生产、乳酸生产、脲酶生产、尿素降解等领域。

    一种适用于筛选高产天然氨基酸的菌株的方法

    公开(公告)号:CN116376946A

    公开(公告)日:2023-07-04

    申请号:CN202111597667.0

    申请日:2021-12-24

    摘要: 本发明涉及一种适用于筛选高产天然氨基酸的菌株的方法,属于生物工程技术领域。本发明所提供的筛选方法是按照包括以下步骤进行:以蛋白质氨基酸的翻译元件作为筛选标记,将其核酸序列中某一氨基酸的部分或全部密码子替换为不编码氨基酸的核苷酸序列组合,在微生物的突变库中转化入筛选标记,通过检测筛选标记造成的菌株表型差异,可以从突变菌株中挑选出高产氨基酸的菌株。本发明所提供的方法可以高通量从不同微生物菌种筛选高产天然氨基酸的菌株。本发明所提供的方法可以高通量从不同微生物菌种筛选高产天然氨基酸的菌株。

    一种筛选氨基酸高产菌株和氨基酸合成途径酶的方法

    公开(公告)号:CN116103361A

    公开(公告)日:2023-05-12

    申请号:CN202111325512.1

    申请日:2021-11-10

    摘要: 一种筛选氨基酸高产菌株和氨基酸合成途径酶的方法。高效稳定的氨基酸生产菌株是支撑氨基酸发酵产业的关键和保障。目前的氨基酸高产菌株筛选方法存在假阳性、高毒性、易引入额外突变、无法维持高产量、普适性差等问题。本发明利用高敏感型密码子改造指示基因建立了基于抗性活力选择和荧光强度筛查的氨基酸高产菌株筛选技术,为氨基酸高产菌株的筛选提供了一种新型的筛选系统,同时为氨基酸合成途径关键酶的改造提供便捷准确的高通量筛选方法。