公开(公告)号：CN101892262A

公开(公告)日：2010-11-24

申请号：CN201010000731.8

申请日：2010-01-15

Applicant: 北京科技大学

Inventor： 杜宏武 ,  李传宝 ,  金海明 ,  华甜

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/66 ,  C12N15/18 ,  C12N15/12 ,  A61K48/00 ,  A61P5/00

Abstract: 本发明是IRES介导的GH四种亚型与IGF-I双顺反子真核共表达载体的构建与应用，根据GH和IGF-I的mRNA序列和蛋白序列对比得出GH四种亚型和IGF-I的编码序列设计引物，以实验室的GH和IGF-I的DNA为模板通过PCR的方法得到GH四种亚型和IGF-I的目标DNA，将PCR产物连接到pBS-T载体中，获得GH和IGF-I的TA载体，然后将TA载体经XhO I和EcoR I双酶切将GH四种亚型的基因定向插入pCI-IRES中，成功构建了GH四种亚型的重组质粒pCI-22-IRES、pCI-20-IRES、pCI-17-IRES和pCI-5-IRES。然后将IGF-I的TA载体经Sam I和Not I双酶切将IGF-I的基因分别定向插入上述重组质粒中，成功构建了IRES介导的人生长激素(GH)四种亚型与IGF-I的双顺反子真核共表达载体：pCI-22-IRES-IGF-I、pCI-20-IRES-IGF-I、pCI-17-IRES-IGF-I、pCI-5-IRES-IGF-I。为进一步研究GH的四种亚型和IGF-I基因的生物学特性和功能提供了方便有效的基本资料。