公开(公告)号：CN103409455A

公开(公告)日：2013-11-27

申请号：CN201310383237.8

申请日：2013-08-29

申请人： 华中农业大学

发明人： 彭健 ,  王荣 ,  潘中勉 ,  蒋思文

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C07K16/12 ,  C07K16/02 ,  A61K39/40 ,  A61P31/04 ,  A61P1/12 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种含有人源肠毒素大肠杆菌的粘附素基因etpA与鞭毛基因fliC的重组质粒pET-EF，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用基因工程技术构建了重组质粒pET-EF，将上述重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，诱导重组表达菌BL21(DE3)/pET-EF表达融合蛋白EF。利用表达的重组蛋白主动免疫初产蛋鸡，制备了针对这种蛋白的卵黄抗体，提取的IgY验证了重组蛋白具有良好的抗原性，检测了在不同pH、温度及酶的条件下的稳定性，并利用小鼠肠道攻毒试验，证明提纯的IgY能够抑制ETEC菌株在体外对上皮细胞的粘附。

公开(公告)号：CN104789584B

公开(公告)日：2018-06-08

申请号：CN201410024763.X

申请日：2014-01-20

申请人： 华中农业大学

发明人： 彭健 ,  王荣 ,  蒋思文 ,  潘中勉

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C07K16/12 ,  C07K16/02 ,  A61K39/40 ,  A61P31/04 ,  A61P1/12 ,  C12P21/02 ,  C07K1/113

摘要： 本发明公开了一种人源肠毒素大肠杆菌粘附素EtpA融合蛋白及其应用，本发明提供了一种含有人源肠毒素大肠杆菌的粘附素基因的重组质粒pGEX‑etpA，将该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，诱导重组表达菌BL21(DE3)/pGEX‑etpA表达融合蛋白EtpA。利用表达的重组蛋白主动免疫初产蛋鸡，制备了针对这种蛋白的卵黄抗体，提取的卵黄抗体验证了重组蛋白具有良好的抗原性，并利用小鼠肠道攻毒试验及体外实验，证明提纯的卵黄抗体能够抑制ETEC菌株在小鼠肠道内及体外对上皮细胞的粘附。

公开(公告)号：CN104789589A

公开(公告)日：2015-07-22

申请号：CN201410024751.7

申请日：2014-01-20

申请人： 华中农业大学

发明人： 彭健 ,  潘中勉 ,  蒋思文 ,  王荣

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C07K16/12 ,  C07K16/02 ,  C07K1/14 ,  A61P31/04

摘要： 本发明公开了一种猪源产肠毒素大肠杆菌鞭毛蛋白3FliCon融合蛋白及其应用，本发明提供了一种猪源ETEC3个拷贝基因fliC的重组质粒pRSET-3FliCon。将该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，诱导重组表达菌BL21(DE3)/pRSET-3FliCon表达融合蛋白3FliCon。利用表达的重组蛋白主动免疫新西兰雄兔，制备了针对这种蛋白的血清抗体，验证了重组蛋白具有良好的抗原性，培养肠上皮细胞系IPEC-J2，利用抑制粘附试验，证明了猪源ETEC鞭毛在参与粘附小肠上皮细胞过程中起重要作用。利用该融合蛋白制备的鸡卵黄抗体能抑制ETEC在体外对上皮细胞的粘附，且抑制不同血清型的ETEC菌株。

公开(公告)号：CN103409455B

公开(公告)日：2015-08-26

申请号：CN201310383237.8

申请日：2013-08-29

申请人： 华中农业大学

发明人： 彭健 ,  王荣 ,  潘中勉 ,  蒋思文

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C07K16/12 ,  C07K16/02 ,  A61K39/40 ,  A61P31/04 ,  A61P1/12 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种含有人源肠毒素大肠杆菌的粘附素基因etpA与鞭毛基因fliC的重组质粒pET-EF，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用基因工程技术构建了重组质粒pET-EF，将上述重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，诱导重组表达菌BL21(DE3)/pET-EF表达融合蛋白EF。利用表达的重组蛋白主动免疫初产蛋鸡，制备了针对这种蛋白的卵黄抗体，提取的IgY验证了重组蛋白具有良好的抗原性，检测了在不同pH、温度及酶的条件下的稳定性，并利用小鼠肠道攻毒试验，证明提纯的IgY能够抑制ETEC菌株在体外对上皮细胞的粘附。

公开(公告)号：CN104789583A

公开(公告)日：2015-07-22

申请号：CN201410024732.4

申请日：2014-01-20

申请人： 华中农业大学

发明人： 彭健 ,  王荣 ,  蒋思文 ,  潘中勉

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C07K16/12 ,  C07K16/02 ,  A61K39/40 ,  A61P31/04 ,  A61P1/12 ,  C12P21/02 ,  C07K1/113

摘要： 本发明公开了一种人源产肠毒素大肠杆菌鞭毛蛋白2FliC融合蛋白及其应用，本发明提供了一种含有人源产肠毒素大肠杆菌fliC基因的重组质粒pRSET-B-2fliC，将该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，诱导重组表达菌BL21(DE3)/pRSET-B-2fliC表达2FliC融合蛋白。利用表达的重组蛋白主动免疫初产蛋鸡，制备了针对这种蛋白的卵黄抗体，提取的卵黄抗体验证了重组蛋白具有良好的抗原性，并利用小鼠肠道攻毒试验及体外实验，证明提纯的卵黄抗体能够抑制ETEC菌株在小鼠肠道内及体外对细菌的粘附。

公开(公告)号：CN104789584A

公开(公告)日：2015-07-22

申请号：CN201410024763.X

申请日：2014-01-20

申请人： 华中农业大学

发明人： 彭健 ,  王荣 ,  蒋思文 ,  潘中勉

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C07K16/12 ,  C07K16/02 ,  A61K39/40 ,  A61P31/04 ,  A61P1/12 ,  C12P21/02 ,  C07K1/113

摘要： 本发明公开了一种人源肠毒素大肠杆菌粘附素EtpA融合蛋白及其应用，本发明提供了一种含有人源肠毒素大肠杆菌的粘附素基因的重组质粒pGEX-etpA，将该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，诱导重组表达菌BL21(DE3)/pGEX-etpA表达融合蛋白EtpA。利用表达的重组蛋白主动免疫初产蛋鸡，制备了针对这种蛋白的卵黄抗体，提取的卵黄抗体验证了重组蛋白具有良好的抗原性，并利用小鼠肠道攻毒试验及体外实验，证明提纯的卵黄抗体能够抑制ETEC菌株在小鼠肠道内及体外对上皮细胞的粘附。

公开(公告)号：CN104789589B

公开(公告)日：2018-01-09

申请号：CN201410024751.7

申请日：2014-01-20

申请人： 华中农业大学

发明人： 彭健 ,  潘中勉 ,  蒋思文 ,  王荣

IPC分类号： C12N15/85 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C07K19/00 ,  C07K16/12 ,  C07K16/02 ,  C07K1/14 ,  A61P31/04

摘要： 本发明公开了一种猪源产肠毒素大肠杆菌鞭毛蛋白3FliCon融合蛋白及其应用，本发明提供了一种猪源ETEC3个拷贝基因fliC的重组质粒pRSET‑3FliCon。将该重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)，诱导重组表达菌BL21(DE3)/pRSET‑3FliCon表达融合蛋白3FliCon。利用表达的重组蛋白主动免疫新西兰雄兔，制备了针对这种蛋白的血清抗体，验证了重组蛋白具有良好的抗原性，培养肠上皮细胞系IPEC‑J2，利用抑制粘附试验，证明了猪源ETEC鞭毛在参与粘附小肠上皮细胞过程中起重要作用。利用该融合蛋白制备的鸡卵黄抗体能抑制ETEC在体外对上皮细胞的粘附，且抑制不同血清型的ETEC菌株。