公开(公告)号：CN102732487B

公开(公告)日：2014-03-26

申请号：CN201210193365.1

申请日：2012-06-13

申请人： 武汉科前动物生物制品有限责任公司 ,  华中农业大学 ,  中国兽医药品监察所

发明人： 金梅林 ,  李国红 ,  蒋桃珍 ,  徐高原 ,  李俊平 ,  周明光 ,  洪灯 ,  左静 ,  涂加刚 ,  邸海波 ,  韦大坤 ,  徐玲莉 ,  陈焕春

IPC分类号： C12N7/00 ,  C12R1/93

摘要： 本发明一种生物反应器大规模培养的方法，其步骤：（1）重组H5N1禽流感病毒在MDCK细胞上适应；（2）病毒株作为反应器大规模培养病毒种子批制备，种子批病毒代次≥F6；血凝效价≥28；EID50≥107.5；（3）以聚酯片为载体培养MDCK细胞，以聚酯片为载体，反应器为篮式固定床，每克载体投放细胞；培养基为新生牛血清DMEM；（4）培养的MDCK细胞接种病毒，病毒稀释液清洗细胞，病毒接种；吸附后更换细胞维持液；（5）MDCK细胞维持和病毒增殖，搅拌，更换细胞维持液；（6）监测血凝效价收获病毒，收获反应器培养体积病毒液。方法易行，操作简便，适应后病毒HA效价>27，解决了目前重组H5亚型禽流感病毒在MDCK细胞上培养病毒滴度不能满足疫苗生产的难题。

公开(公告)号：CN102732487A

公开(公告)日：2012-10-17

申请号：CN201210193365.1

申请日：2012-06-13

申请人： 武汉科前动物生物制品有限责任公司 ,  华中农业大学 ,  中国兽医药品监察所

发明人： 金梅林 ,  李国红 ,  蒋桃珍 ,  徐高原 ,  李俊平 ,  周明光 ,  洪灯 ,  左静 ,  涂加刚 ,  邸海波 ,  韦大坤 ,  徐玲莉 ,  陈焕春

IPC分类号： C12N7/00 ,  C12R1/93

摘要： 本发明一种生物反应器大规模培养的方法,其步骤:（1）重组H5N1禽流感病毒在MDCK细胞上适应；（2）病毒株作为反应器大规模培养病毒种子批制备，种子批病毒代次≥F6；血凝效价≥28；EID50≥107.5；（3）以聚酯片为载体培养MDCK细胞，以聚酯片为载体，反应器为篮式固定床，每克载体投放细胞；培养基为新生牛血清DMEM；（4）培养的MDCK细胞接种病毒，病毒稀释液清洗细胞，病毒接种；吸附后更换细胞维持液；（5）MDCK细胞维持和病毒增殖，搅拌，更换细胞维持液；（6）监测血凝效价收获病毒，收获反应器培养体积病毒液。方法易行，操作简便，适应后病毒HA效价>27，解决了目前重组H5亚型禽流感病毒在MDCK细胞上培养病毒滴度不能满足疫苗生产的难题。

公开(公告)号：CN102199571A

公开(公告)日：2011-09-28

申请号：CN201110085153.7

申请日：2011-04-06

申请人： 华中农业大学 ,  武汉科前动物生物制品有限责任公司

发明人： 吴斌 ,  夏欣 ,  何启盖 ,  汤细彪 ,  陈焕春 ,  金梅林 ,  李伦勇 ,  陈冬焕 ,  余腾 ,  吴磊 ,  刘文静 ,  胡睿铭

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/34 ,  A61K39/295 ,  A61P31/20 ,  A61P31/04 ,  C12R1/01 ,  A61K39/02 ,  A61K39/12

摘要： 一种不含抗性标记的表达猪2型圆环病毒ORF2基因片段的重组支气管败血波氏杆菌株的构建、疫苗的制备与应用，属基因工程领域。得到一株不含抗性标记的表达猪2型圆环病毒ORF2基因片段的重组支气管败血波氏杆菌株QH0814ΔaroA/ORF2。该菌株缺失了支气管败血波氏杆菌的5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合成酶(aroA)基因，含有猪2型圆环病毒ORF2基因片段。公开了该重组株及疫苗的制备以及在制备猪2型圆环病毒和猪源支气管败血波氏杆菌疫苗中的应用。本发明的基因工程疫苗可以刺激猪产生抵抗猪2型圆环病毒和猪源支气管败血波氏杆菌野毒株的保护性免疫反应，能有效防止猪2型圆环病毒和猪源支气管败血波氏杆菌的感染。

公开(公告)号：CN103468647B

公开(公告)日：2015-04-22

申请号：CN201310396627.9

申请日：2013-09-03

申请人： 华中农业大学 ,  武汉科前动物生物制品有限责任公司

发明人： 金梅林 ,  杨影 ,  徐高原

IPC分类号： C12N7/00 ,  A61K39/295 ,  A61K39/145 ,  A61P31/16 ,  C12R1/93

摘要： 本发明属于动物病毒学技术领域，具体涉及一种猪流感H1N1和 H3N2亚型的二价灭活疫苗与应用。所述的二价灭活疫苗是由H1N1亚型猪流感病毒H1N1 SIV TJ株，保藏号为：CCTCC NO：V201107和H3N2亚型猪流感病毒HuN-1株，保藏号为：CCTCC NO：V201308制备而成。本发明的猪流感H1N1和 H3N2亚型的二价灭活疫苗安全性好，免疫保护效果达到80%以上。

公开(公告)号：CN102864157B

公开(公告)日：2014-03-05

申请号：CN201110197503.9

申请日：2011-07-05

申请人： 华中农业大学 ,  武汉科前动物生物制品有限责任公司

发明人： 金梅林 ,  周明光 ,  赵建平 ,  张强 ,  张安定 ,  康超 ,  徐高原

IPC分类号： C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12N15/63 ,  C07K14/285 ,  A61K39/102 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

摘要： 本发明属于动物传染病亚单位疫苗制备技术领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌保护性抗原的制备及应用。本发明克隆了一种副猪嗜血杆菌外膜蛋白Hbp B基因，其核苷酸序列如SEQID NO：1所示，该基因编码的序列如SEQ ID NO：2所示。构建了一种重组大肠杆菌(Escherichia coli) BL21/pET-28a-Hbp B(保藏号为CCTCC NO：M 2011228)，它包含序列表SEQID NO：1所述的基因。申请人还得到一种副猪嗜血杆菌的抗原蛋白：它是由SEQ ID NO：1所述的基因转化大肠杆菌所表达的。本发明还公开了该重组大肠杆菌的制备方法与应用。本发明制备的副猪嗜血杆菌亚单位疫苗具有良好的安全性，其免疫保护效果达到83％。

公开(公告)号：CN103468647A

公开(公告)日：2013-12-25

申请号：CN201310396627.9

申请日：2013-09-03

申请人： 华中农业大学 ,  武汉科前动物生物制品有限责任公司

发明人： 金梅林 ,  杨影 ,  徐高原

IPC分类号： C12N7/00 ,  A61K39/295 ,  A61K39/145 ,  A61P31/16 ,  C12R1/93

摘要： 本发明属于动物病毒学技术领域，具体涉及一种猪流感H1N1和H3N2亚型的二价灭活疫苗与应用。所述的二价灭活疫苗是由H1N1亚型猪流感病毒H1N1 SIV TJ株，保藏号为：CCTCC NO：V201107和H3N2亚型猪流感病毒HuN-1株，保藏号为：CCTCC NO：V201308制备而成。本发明的猪流感H1N1和H3N2亚型的二价灭活疫苗安全性好，免疫保护效果达到80%以上。

公开(公告)号：CN102949714A

公开(公告)日：2013-03-06

申请号：CN201110376199.4

申请日：2011-11-23

申请人： 华中农业大学 ,  武汉科前动物生物制品有限责任公司

发明人： 金梅林 ,  康超 ,  陈波 ,  尹珍艳 ,  徐高原 ,  陈关平 ,  滑亚峰 ,  陈章表

IPC分类号： A61K39/09 ,  A61P31/04

摘要： 本发明属于动物疫苗制备技术领域，具体涉及一种马链球菌兽疫亚种、猪链球菌2型、猪链球菌7型的三价灭活疫苗及制备方法与应用。本发明的灭活疫苗主要适用于母猪，公猪及仔猪对猪链球菌病的防治。本发明公开了三株专用于制备猪链球菌病三价灭活疫苗的菌株的分离、鉴定及应用，三株疫苗菌株分别为猪链球菌2-LT株(保藏号为CCTCC NO：M2011282)；猪链球菌7-YZ株(保藏号为CCTCC NO：M2011160)和马链球菌兽疫亚种XS株(保藏号为CCTCC NO：M2011405)。本发明的灭活疫苗能够达到“一针多防”的效果，减少猪只应激，且灭活疫苗安全可靠，不存在散毒的隐患。

公开(公告)号：CN102864157A

公开(公告)日：2013-01-09

申请号：CN201110197503.9

申请日：2011-07-05

申请人： 华中农业大学 ,  武汉科前动物生物制品有限责任公司

发明人： 金梅林 ,  周明光 ,  赵建平 ,  张强 ,  张安定 ,  康超 ,  徐高原

IPC分类号： C12N15/31 ,  C12N1/21 ,  C12N15/63 ,  C07K14/285 ,  A61K39/102 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

摘要： 本发明属于动物传染病亚单位疫苗制备技术领域，具体涉及一种副猪嗜血杆菌保护性抗原的制备及应用。本发明克隆了一种副猪嗜血杆菌外膜蛋白Hbp B基因，其核苷酸序列如SEQID NO：1所示，该基因编码的序列如SEQ ID NO：2所示。构建了一种重组大肠杆菌(Escherichia coli) BL21/pET-28a-Hbp B(保藏号为CCTCC NO：M2011228)，它包含序列表SEQID NO：1所述的基因。申请人还得到一种副猪嗜血杆菌的抗原蛋白：它是由SEQ ID NO：1所述的基因转化大肠杆菌所表达的。本发明还公开了该重组大肠杆菌的制备方法与应用。本发明制备的副猪嗜血杆菌亚单位疫苗具有良好的安全性，其免疫保护效果达到83％。

公开(公告)号：CN102559531A

公开(公告)日：2012-07-11

申请号：CN201010596059.3

申请日：2010-12-15

申请人： 武汉科前动物生物制品有限责任公司 ,  华中农业大学

发明人： 陈关平 ,  陈守文 ,  顾伟 ,  金梅林 ,  冀志霞 ,  徐高原 ,  韩进 ,  尹争艳 ,  曹毅 ,  方玉林 ,  何伟 ,  蔡旭旺 ,  周锐 ,  陈焕春

IPC分类号： C12N1/20 ,  C12R1/21

摘要： 本发明属于农业微生物技术领域，具体涉及一种适用于副猪嗜血杆菌5型的高密度发酵培养基，其包括下列组分：按照重量/体积计，谷氨酸钠1～10g/L，酵母粉5～50g/L，氯化钠1～10g/L，无水磷酸二氢钾0.063～2.502g/L，三水磷酸氢二钾0.351～14.044g/L；按体积比计牛血清5～40％，烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)1～10‰，余量是水。本发明有利于副猪嗜血杆菌5型的高密度发酵，菌体生长速度快，能获得较高菌量，培养后的副猪嗜血杆菌5型活菌数可达到50亿。本发明的培养基材料来源广泛，成本低廉，可有效扩增副猪嗜血杆菌5型，能满足大规模疫苗生产的需要。

公开(公告)号：CN101979501B

公开(公告)日：2012-05-23

申请号：CN201010286731.9

申请日：2010-09-17

申请人： 华中农业大学 ,  武汉科前动物生物制品有限责任公司

发明人： 金梅林 ,  石建 ,  陈焕春 ,  黄灿辉 ,  康超 ,  郭爱珍 ,  徐高原 ,  吴斌

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C12N15/74 ,  A61K39/116 ,  A61K39/112 ,  A61K39/09 ,  A61P31/04 ,  C12R1/42

摘要： 本发明属于动物细菌基因工程领域，具体涉及一种不含抗性标记的表达猪链球菌2型表面抗原sao基因片段的重组猪霍乱沙门氏菌株的构建、疫苗制备及应用。获得一株无抗性标记的表达猪链球菌2型sao基因片段的重组猪霍乱沙门氏菌asd-C500/Pya-saoA，其保藏号为CCTCC NO：M2010156。该重组菌缺失了猪霍乱沙门氏菌的asd基因，含有能在该菌株中表达asd和猪链球菌2型sao基因片段的质粒pYA-saoA。本发明还公开了该重组菌株与疫苗的制备方法以及在制备猪霍乱沙门氏菌-猪链球菌2型疫苗中的应用。