公开(公告)号：CN109679982A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201811595939.1

申请日：2018-12-25

申请人： 华中科技大学鄂州工业技术研究院 ,  华中科技大学

发明人： 刘胜 ,  蒙亮 ,  刘欣 ,  王鹏 ,  顿先才 ,  徐国华 ,  申婵 ,  胡艳红

IPC分类号： C12N15/74 ,  C12P21/02 ,  C07K14/37 ,  C07K1/34 ,  A01N63/04 ,  A01P1/00 ,  A01P3/00

CPC分类号： C12N15/74 ,  A01N63/04 ,  C07K14/37

摘要： 本发明提供了一种利用短短芽孢杆菌制备高纯度隐地蛋白的方法，步骤包括：S1、将隐地蛋白的编码基因插入到以短短芽孢杆菌为宿主的质粒中；S2、将步骤S1所得质粒转入短短芽孢杆菌宿主中；S3、发酵培养步骤S2所得短短芽孢杆菌，所述发酵培养的培养条件为：T2培养基、温度30～33℃、转速120～200rpm、发酵培养时间24～60h；S4、收集发酵后的菌液，分离提取隐地蛋白液；所述分离提取方法包括：离心菌液收集上清，对上清液进行切向流超滤获得滤液、超滤浓缩滤液即得隐地蛋白液。该方法能够简便快速的获取高纯度的隐地蛋白，且所得的隐地蛋白溶液直接用作农用抗菌抑菌剂能够达到明显促进植物生长的效果，具备良好的应用前景。

公开(公告)号：CN109666686A

公开(公告)日：2019-04-23

申请号：CN201811593161.0

申请日：2018-12-25

申请人： 华中科技大学鄂州工业技术研究院 ,  华中科技大学

发明人： 刘胜 ,  蒙亮 ,  刘欣 ,  李维 ,  石聿勇 ,  李威 ,  胡艳红

IPC分类号： C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  A01N37/46 ,  A01P1/00 ,  A01P3/00 ,  A01P21/00

摘要： 本发明提供了一种高纯度隐地蛋白的制备方法，步骤包括：(1)将所述目的蛋白的编码基因与TEV蛋白酶、T4噬菌体Soc蛋白基因片段依次连接，制备融合重组蛋白编码基因；(2)将所述融合重组蛋白的编码基因转入质粒中；(3)将质粒转入大肠杆菌宿主中；(4)使用Soc蛋白缺失的Soc-T4噬菌体感染所述的大肠杆菌宿主，培养宿主表达展示所述融合重组蛋白的T4噬菌体；(5)分离展示有融合重组蛋白的T4噬菌体；(6)从所述T4噬菌体中分离融合重组蛋白，TEV蛋白酶切后获得所述目的蛋白。该方法能够简便快速的获取高纯度的隐地蛋白，且所得的隐地蛋白溶液直接用作农用抗菌抑菌剂能够达到明显促进植物生长的效果，具备良好的应用前景。

公开(公告)号：CN109652432A

公开(公告)日：2019-04-19

申请号：CN201811595046.7

申请日：2018-12-25

申请人： 华中科技大学鄂州工业技术研究院 ,  华中科技大学

发明人： 刘胜 ,  蒙亮 ,  刘欣 ,  李维 ,  石聿勇 ,  李威 ,  胡艳红

IPC分类号： C12N15/62 ,  C12N15/70 ,  C07K14/37 ,  A01N61/00 ,  A01P1/00 ,  A01P3/00

摘要： 本发明提供了一种高纯度隐地蛋白的制备方法，步骤包括：(1)将所述目的蛋白的编码基因与TEV蛋白酶、T4噬菌体Hoc蛋白基因片段依次连接，制备融合重组蛋白编码基因；(2)将所述融合重组蛋白的编码基因转入质粒中；(3)将质粒转入大肠杆菌宿主中；(4)使用Hoc蛋白缺失的Hoc-T4噬菌体感染所述的大肠杆菌宿主，培养宿主表达展示所述融合重组蛋白的T4噬菌体；(5)分离展示有融合重组蛋白的T4噬菌体；(6)从所述T4噬菌体中分离融合重组蛋白，TEV蛋白酶切后获得所述目的蛋白。该方法能够简便快速的获取高纯度的隐地蛋白，且所得的隐地蛋白溶液直接用作农用抗菌抑菌剂能够达到明显促进植物生长的效果，具备良好的应用前景。