公开(公告)号：CN113957071B

公开(公告)日：2023-07-18

申请号：CN202111161871.8

申请日：2021-09-30

申请人： 华南理工大学

发明人： 潘力 ,  陈倩琳 ,  王斌 ,  辛青龙

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/125

摘要： 本发明公开一种具有双重启动子和双重分泌信号功能的组合DNA片段及其应用，属于基因工程技术领域。本发明采用双启动子双信号肽Pcd‑P43‑SamyQ‑SBsGGT表达系统在枯草芽孢杆菌中合成γ‑谷氨酰胺转肽酶，其效果显著较双启动子单信号肽Pcd‑P43‑SamyQ表达系统的单位酶活力提高至161.45％，而Pcd‑P43‑SBsGGT‑SamyQ表达效果微弱。不需要添加诱导剂进行蛋白的诱导表达，为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的元件；不仅能够简化生产工艺流程，降低生产成本，同时能使制备的蛋白酶产品达到符合食品安全级别酶制剂的要求。

公开(公告)号：CN113957071A

公开(公告)日：2022-01-21

申请号：CN202111161871.8

申请日：2021-09-30

申请人： 华南理工大学

发明人： 潘力 ,  陈倩琳 ,  王斌 ,  辛青龙

IPC分类号： C12N15/113 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/125

摘要： 本发明公开一种具有双重启动子和双重分泌信号功能的组合DNA片段及其应用，属于基因工程技术领域。本发明采用双启动子双信号肽Pcd‑P43‑SamyQ‑SBsGGT表达系统在枯草芽孢杆菌中合成γ‑谷氨酰胺转肽酶，其效果显著较双启动子单信号肽Pcd‑P43‑SamyQ表达系统的单位酶活力提高至161.45％，而Pcd‑P43‑SBsGGT‑SamyQ表达效果微弱。不需要添加诱导剂进行蛋白的诱导表达，为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的元件；不仅能够简化生产工艺流程，降低生产成本，同时能使制备的蛋白酶产品达到符合食品安全级别酶制剂的要求。

公开(公告)号：CN115976082A

公开(公告)日：2023-04-18

申请号：CN202210816750.0

申请日：2022-07-12

申请人： 华南理工大学

发明人： 潘力 ,  陈倩琳

IPC分类号： C12N15/66 ,  C12N15/113 ,  C12N9/22 ,  C12N15/70 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12R1/125

摘要： 本发明提供了一种无抗性标记基因枯草表达重组质粒及其构建方法与应用。本发明利用枯草芽孢杆菌SCK6超级感受态直接构建不含大肠杆菌复制起始位点Ori及氨苄抗性基因的Bsggt重组表达质粒，能够获得更小的游离质粒表达系统，为异源蛋白在生产应用过程中提供了更小质粒的稳定表达工具。本发明使用Cas9n‑AID碱基编辑技术进行无抗性标记表达质粒的构建对于菌株的筛选过程简单，所构建的无抗性标记表达质粒相对于传统的穿梭质粒更小，且表达过程中不需要添加诱导剂进行蛋白的诱导表达，由于表达质粒无抗性标记，在培养过程中由于没有抗生素的压力生长速度能明显提高，高表达的同时无抗生素的引入更适用于食品安全级别的生产应用。