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公开(公告)号：CN117965416B
公开(公告)日：2024-10-11
申请号：CN202410143241.5
申请日：2024-02-01
申请人： 华南理工大学
IPC分类号： C12N1/38 , C12N1/15 , C12N15/80 , C12N15/65 , C12Q1/04 , C12R1/66 , C12R1/685 , C12R1/69 , C12R1/68 , C12R1/885
摘要： 本发明公开一种适合重组丝状真菌高通量筛选的培养方法，涉及生物工程技术领域。本发明将带有自主复制序列的外源蛋白表达载体转化到丝状真菌新鲜原生质体中。在液体培养基中培养转化的原生质体，在抑制原生质体萌发的同时使外源蛋白基因瞬时表达，之后可以借助流式细胞仪等仪器高通量筛选转化子。本发明的方法可以明显缩短丝状真菌原生质体转化周期，简化操作流程，提高丝状真菌转化成功率和筛选效率，为构建工业丝状真菌微生物细胞工厂拓展了思路，并对其他丝状真菌理性高通量筛选具有重要参考价值。
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公开(公告)号：CN114410608B
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202210054940.3
申请日：2022-01-18
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开一种高效表达及纯化Cas9蛋白的方法和应用。本发明主要包括Cas9表达载体的构建，大肠杆菌的转化，Cas9蛋白的诱导表达，Cas9蛋白的纯化，以及体内体外的应用。使用GB1作为促溶标签，可增加SpCas9的稳定性及溶解性，初步提高SpCas9的表达量，且GB1不影响SpCas9的功能，后续不需去除，简便可行。再通过使用10×His标记，有助于融合蛋白与Ni‑NTA树脂的高亲和力，并有助于高盐洗去除污染的核酸，提高纯化效果。使用串联T7启动子，明显提高SpCas9的表达量。通过体内外应用，证明了所纯化得到的SpCas9‑GB1蛋白正确折叠，具有切割DNA的能力，且可入核进行基因编辑。
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公开(公告)号：CN115820746A
公开(公告)日：2023-03-21
申请号：CN202211388724.9
申请日：2022-11-08
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了激酶基因在调控丝状真菌菌丝形态中的应用。本发明首次在丝状真菌中构建RNP基因编辑体系，构建的RNP体系可以编辑黑曲霉的基因，该方法免去构建重组载体的繁琐程序，操作简单，可以用于黑曲霉的基因编辑。结合RNP体系进行基因编辑发现，敲除MpkA基因时，黑曲霉菌落较小，生长缓慢，菌丝呈现短杆状，基本无分支。同时，黑曲霉MpkA基因被敲除时，可以促进其蛋白的分泌量。本发明在丝状真菌的遗传操作以及高通量技术的应用提供了良好的材料以及理论依据，为丝状真菌在工业酶制剂领域的发展提供了研究思路。
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公开(公告)号：CN113663640A
公开(公告)日：2021-11-19
申请号：CN202110962579.X
申请日：2021-08-20
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开一种多级孔炭材料及其制备方法和应用，涉及生物质炭吸附剂制备的技术领域。本发明将啤酒糟作为底物，运用黑曲霉产酶的特点，对啤酒糟进行微生物预处理，得到比表面积最高达1689m2/g，以及具备多级孔结构的炭材料。该炭材料具备高比表面积，以及微孔、介孔、大孔多孔径结构的特征，可有效提高炭材料的吸附性能。同时，该炭材料对甲苯具有很好的吸附性能，最高吸附量为0.399g/g。本发明中的底物啤酒糟和黑曲霉均为无毒无害的前体物质，制备工艺简单，绿色环保，成本低廉，可实现工业化；可广泛应用于吸附领域，也可应用于环保、催化、医药等其他领域；在吸附剂的开发以及空气的净化领域具有较大的应用前景。
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公开(公告)号：CN107857801B
公开(公告)日：2020-09-22
申请号：CN201710990135.0
申请日：2017-10-23
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了一种可用于提高分泌效率的信号肽及其应用。该信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码该信号肽的核苷酸序列选自如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为信号肽功能的核苷酸序列或者其互补序列。本发明提供了一种具有很强的分泌表达活性的信号肽，能实现外源基因的高表达，为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的元件。
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公开(公告)号：CN106480036B
公开(公告)日：2019-04-09
申请号：CN201611083079.4
申请日：2016-11-30
申请人： 华南理工大学
IPC分类号： C12N15/113 , C12N15/63 , C12N1/15 , C12R1/685
摘要： 本发明公开了一种具有启动子功能的DNA片段及其应用。该DNA片段为为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列。该DNA片段具有启动子的功能，有很强的特异表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现CRISPR‑Cas9系统中gRNA的表达，使得黑曲霉来源的U6启动子可以在黑曲霉自身的CRISPR‑Cas9系统中运用。
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公开(公告)号：CN104630229B
公开(公告)日：2018-10-30
申请号：CN201510074949.0
申请日：2015-02-11
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了一种具有启动子功能的DNA片段与应用，所述DNA片段为如下任一序列：(a)如SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO:1相同的作为启动子功能的核苷酸序列或者其互补序列；(c)对SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列添加一个或多个核糖体结合位点的序列。该DNA具有启动子功能，具有很强的表达活性，在不需要添加诱导物的条件下即能实现外源基因的高表达，将其运用于耐热β‑半乳糖苷酶和转谷氨酰胺酶的表达。特别为解淀粉芽孢杆菌外源基因的表达提供了有效的工具。
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公开(公告)号：CN107936096A
公开(公告)日：2018-04-20
申请号：CN201710990073.3
申请日：2017-10-23
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明公开了一种能有效提高蛋白分泌效率的信号肽及其应用。该信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码该信号肽的核苷酸序列选自如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为信号肽功能的核苷酸序列或者其互补序列。本发明通过从枯草芽孢杆菌同源蛋白信号肽库中，构建该信号肽与β-半乳糖苷酶编码基因/转谷氨酰胺酶酶原编码基因相结合的表达载体，筛选出能提高β-半乳糖苷酶分泌的信号肽，实现转谷氨酰胺酶酶原的分泌表达。
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公开(公告)号：CN107857801A
公开(公告)日：2018-03-30
申请号：CN201710990135.0
申请日：2017-10-23
申请人： 华南理工大学
CPC分类号： C07K14/32 , C12N9/1044 , C12N9/2471 , C12N15/75 , C12Y203/02013 , C12Y302/01023
摘要： 本发明公开了一种可用于提高分泌效率的信号肽及其应用。该信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。编码该信号肽的核苷酸序列选自如下任一序列：(a)如SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列或者其互补序列；(b)对SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列进行一个或多个核苷酸取代、缺失或添加所获得的，具有与SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列相同的作为信号肽功能的核苷酸序列或者其互补序列。本发明提供了一种具有很强的分泌表达活性的信号肽，能实现外源基因的高表达，为枯草芽孢杆菌表达外源基因提供了有效的元件。
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公开(公告)号：CN1844384A
公开(公告)日：2006-10-11
申请号：CN200610035370.4
申请日：2006-05-08
申请人： 华南理工大学
摘要： 本发明涉及微生物菌种改良领域，具体涉及一种利用片段化基因改组筛选性状优良菌株的方法。本发明通过诱变育种获得目的性状提高的多株菌株，构成转化育种的候选亲株文库；在该文库中选出具有优良目的性状的菌株作为母本，也就是受体菌；再选出若干株优良性状的菌株作为多父本，即多供体菌；提取所选的多供体菌的总DNA，用DNase I酶切；然后将混合DNA片断转化受体菌，再生，筛选性状优良的再生菌株。利用本发明筛选方法所得的菌株的重组效率高，重组体筛选程序简单，所得菌株多样性高。
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