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公开(公告)号：CN114350739B
公开(公告)日：2024-08-16
申请号：CN202111658178.1
申请日：2021-12-30
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开一种ε‑己内酯高产菌株的高通量筛选方法，属于高通量筛选技术领域。本发明将ADH和CHMO双酶级联反应产物ε‑己内酯的浓度与中间产物环己酮的浓度进行相关性分析发现，具有不同催化性能的菌株在全细胞催化反应后，中间产物环己酮浓度与产物ε‑己内酯浓度呈负相关关系，因此以环己酮为筛选标记，通过高通量筛选具有低环己酮浓度的菌株得到高产ε‑己内酯的菌株。本发明利用RBS工程技术构建ε‑己内酯产生菌的突变文库，筛选得到的七株突变菌株并进行摇瓶实验验证，催化70mM环己醇的ε‑己内酯产量，与出发菌株RCL0相比均获得显著提高。该方法操作步骤简单，可大幅降低菌株筛选过程的实验成本并缩短筛选周期。
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公开(公告)号：CN110938663B
公开(公告)日：2022-12-16
申请号：CN201911264718.0
申请日：2019-12-11
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种基于改造核糖体结合位点提高ε‑己内酯产量的方法。该方法以pRSFDuet为出发载体，将chmo基因和RBS21‑adh序列插入空载pRSFDuet中，得到pRSF‑RBS10‑CHMO‑RBS21‑ADH载体；根据核糖体结合位点的特征，设计新的CHMO RBS序列，构建含CHMO RBS序列的重组菌株，并诱导重组菌株表达ADH蛋白和CHMO蛋白后，收集活细胞进行静息催化，实现环己醇被催化高产ε‑己内酯。本发明提供的方法中得到的重组菌株能在16h内完全催化60mM环己醇，得到43.98mM的ε‑己内酯。该方法高效，周期短，节约资源，为工业高产ε‑己内酯提供了可能性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108384812B
公开(公告)日：2019-10-18
申请号：CN201810064104.7
申请日：2018-01-23
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母基因组编辑载体及其构建方法和应用，以gRNA编码质粒P为出发载体，在该载体的复制起始点Ori两端分别引入同向34bp的LoxP序列，并在质粒P骨架位置引入Cre重组酶基因表达盒，获得酵母基因组编辑载体。该载体在以CRISPR/Cas9为媒介的基因编辑中的应用，能实现对酿酒酵母基因组的高效、多轮编辑。
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公开(公告)号：CN115896156A
公开(公告)日：2023-04-04
申请号：CN202110962577.0
申请日：2021-08-20
Applicant: 华南理工大学
IPC: C12N15/81 , C12N15/65 , C12N15/55 , C12N15/90 , C12N15/60 , C12N15/53 , C12N1/19 , C12P7/26 , C12R1/865
Abstract: 本发明公开一种基于基因组位点精细调控基因表达的方法，涉及基因技术领域。本发明中将基因元件或模块整合至酵母基因组相对于与游离型质粒相比，具有可精确控制拷贝数、稳定强、无需抗生素或其他化合物的添加以维持筛选压力等优点。同时基于特定基因组位点精细调控基因表达的应用可以更加精准、定量的调控目的基因的表达，使代谢途径得到更加精准的调控，尤其是分支点处的流量调节，可提高目标产物产量，防止某些基因过度表达给细胞带来的代谢负担。本发明还提供了利用基因组位点精细调控酿酒酵母发酵生产圆柚酮的具体应用。
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公开(公告)号：CN114350739A
公开(公告)日：2022-04-15
申请号：CN202111658178.1
申请日：2021-12-30
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开一种ε‑己内酯高产菌株的高通量筛选方法，属于高通量筛选技术领域。本发明将ADH和CHMO双酶级联反应产物ε‑己内酯的浓度与中间产物环己酮的浓度进行相关性分析发现，具有不同催化性能的菌株在全细胞催化反应后，中间产物环己酮浓度与产物ε‑己内酯浓度呈负相关关系，因此以环己酮为筛选标记，通过高通量筛选具有低环己酮浓度的菌株得到高产ε‑己内酯的菌株。本发明利用RBS工程技术构建ε‑己内酯产生菌的突变文库，筛选得到的七株突变菌株并进行摇瓶实验验证，催化70mM环己醇的ε‑己内酯产量，与出发菌株RCL0相比均获得显著提高。该方法操作步骤简单，可大幅降低菌株筛选过程的实验成本并缩短筛选周期。
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公开(公告)号：CN110938663A
公开(公告)日：2020-03-31
申请号：CN201911264718.0
申请日：2019-12-11
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种基于改造核糖体结合位点提高ε-己内酯产量的方法。该方法以pRSFDuet为出发载体，将chmo基因和RBS21-adh序列插入空载pRSFDuet中，得到pRSF-RBS10-CHMO-RBS21-ADH载体；根据核糖体结合位点的特征，设计新的CHMO RBS序列，构建含CHMO RBS序列的重组菌株，并诱导重组菌株表达ADH蛋白和CHMO蛋白后，收集活细胞进行静息催化，实现环己醇被催化高产ε-己内酯。本发明提供的方法中得到的重组菌株能在16h内完全催化60mM环己醇，得到43.98mM的ε-己内酯。该方法高效，周期短，节约资源，为工业高产ε-己内酯提供了可能性。
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公开(公告)号：CN108384812A
公开(公告)日：2018-08-10
申请号：CN201810064104.7
申请日：2018-01-23
Applicant: 华南理工大学
Abstract: 本发明公开了一种酵母基因组编辑载体及其构建方法和应用，以gRNA编码质粒P为出发载体，在该载体的复制起始点Ori两端分别引入同向34bp的LoxP序列，并在质粒P骨架位置引入Cre重组酶基因表达盒，获得酵母基因组编辑载体。该载体在以CRISPR/Cas9为媒介的基因编辑中的应用，能实现对酿酒酵母基因组的高效、多轮编辑。
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