公开(公告)号：CN118325956A

公开(公告)日：2024-07-12

申请号：CN202410622831.6

申请日：2024-05-20

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 孙晶晶 ,  王长泉 ,  黄煜雯 ,  袁国振 ,  刘金义 ,  陆俊 ,  刘虹池

IPC: C12N15/82 ,  A01H5/06 ,  A01H6/74

Abstract: 一种利用发根农杆菌介导月季叶片产生转基因根系及基因定位鉴定的方法，包括以下步骤：构建目标基因的过表达载体，反应产物转化大肠杆菌后，采用LB固体培养基筛选阳性克隆，菌落PCR鉴定后摇菌提取质粒，得到含有目的基因的过表达重组质粒；将含有目的基因的过表达重组质粒转化发根农杆菌，在YEB固体培养基上筛选阳性克隆，在YEB固体培养基上进行划线培养得到发根农杆菌菌块；或摇菌到对数增长期，OD600＝0.6～0.8，即所得菌液离心后沉淀用，用1/2MS重新悬浮，调整OD600＝0.8，得到供侵染的发根农杆菌重悬菌液；采用发根农杆菌菌块或重悬菌液侵染月季叶片；培养后利用手持紫外灯进行阳性根系筛选，利用激光共聚焦鉴定目标基因位置。