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公开(公告)号：CN118325956A
公开(公告)日：2024-07-12
申请号：CN202410622831.6
申请日：2024-05-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 一种利用发根农杆菌介导月季叶片产生转基因根系及基因定位鉴定的方法，包括以下步骤：构建目标基因的过表达载体，反应产物转化大肠杆菌后，采用LB固体培养基筛选阳性克隆，菌落PCR鉴定后摇菌提取质粒，得到含有目的基因的过表达重组质粒；将含有目的基因的过表达重组质粒转化发根农杆菌，在YEB固体培养基上筛选阳性克隆，在YEB固体培养基上进行划线培养得到发根农杆菌菌块；或摇菌到对数增长期，OD600＝0.6～0.8，即所得菌液离心后沉淀用，用1/2MS重新悬浮，调整OD600＝0.8，得到供侵染的发根农杆菌重悬菌液；采用发根农杆菌菌块或重悬菌液侵染月季叶片；培养后利用手持紫外灯进行阳性根系筛选，利用激光共聚焦鉴定目标基因位置。
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公开(公告)号：CN107014792A
公开(公告)日：2017-08-04
申请号：CN201710259815.5
申请日：2017-04-20
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: G01N21/6428 , C12N15/8212
Abstract: 本发明公开了一种利用月季瞬时表达系统鉴定蛋白互作的方法，包括如下步骤：（1）提取含有目的基因的入门载体质粒；（2）将含有目的基因的入门载体质粒分别和含有萤火虫荧光素酶基因N端、C端的双元表达载体进行LR重组反应，提取质粒；（3）将LR反应后得到的含有目的基因和萤火虫荧光素酶基因片段的重组质粒转化农杆菌，制备转化液；（4）取继代培养1个月的月季无菌苗转移到上述所得转化液中，真空渗透3～5分钟，然后用无菌水清洗后将月季苗放回到继代培养基中培养；（5）取上述转化后月季苗均匀喷洒荧光素后放置CCD荧光照相系统的暗室中拍照，鉴定是否存在蛋白互作。本发明简便易行、设备要求不高、假阳性率低。
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公开(公告)号：CN114317570A
公开(公告)日：2022-04-12
申请号：CN202111633759.X
申请日：2021-12-29
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程应用技术领域，提供一种编码月季丙二烯氧化物合酶的基因RcAOS及其在抗月季灰霉病中的应用。本发明提供编码月季丙二烯氧化物合酶的基因RcAOS，所述基因RcAOS的CDS序列如SEQ ID NO.1所示；提供了编码月季丙二烯氧化物合酶的基因RcAOS的干扰RNA，所述干扰RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；以及所述编码月季丙二烯氧化物合酶的基因RcAOS在抗月季灰霉病中的应用。过表达基因RcAOS能够增强月季对灰霉病的抗性，而沉默该基因使得月季对灰霉病的防御减弱。该发明为通过提升植物内源茉莉酸合成来提高抗病性提供了指导与依据，为月季生产中病害的绿色防控提供新的思路。
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公开(公告)号：CN106868042A
公开(公告)日：2017-06-20
申请号：CN201710263493.1
申请日：2017-04-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种月季不定芽真空渗透转基因方法，包括以下步骤：切取月季无菌苗的幼嫩茎尖，在增殖培养基上诱导产生大量不定芽；切取不定芽在增殖培养基上预培养3天，然后转移到携带目的基因的农杆菌转化液中真空渗透5～10 min，充分浸湿；去除菌液后的不定芽转移到增殖培养基上在黑暗条件下共培养3天，然后把经无菌水彻底清洗后的不定芽转入抑菌培养基培养5天，再根据携带目的基因表达载体的选择标记转入到选择培养基上按由低到高梯度筛选，获得的抗性不定芽转移到生根培养基上诱导生根；采集阳性植株的叶片进行PCR鉴定和报告基因检测，都为阳性的植株为转基因植株。本发明增值系数高、繁殖周期短、基因转化率高、假阳性率低。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108719061B
公开(公告)日：2021-09-28
申请号：CN201810438916.3
申请日：2018-05-09
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种诱导金樱子叶片直接产生不定芽及植株再生的方法，包括：切取金樱子无菌苗的带小柄单叶片接种到诱导培养基上暗培养8‑10天，暗培养后的叶片转移到光照时间16h/d、温度为25±2℃条件下培养25‑40天，叶柄处产生不定芽；切割分离不定芽，转移到增殖培养基中继续培养，生长20‑30天左右获得大量丛生芽；将丛生芽切割分离成单芽体，转移到壮苗培养基中壮苗25‑40天，芽苗可以生长成株高3‑5cm的幼苗，然后转移到生根培养基中诱导生根，20‑30天后生根率达95％以上；将生根的幼苗转移到盆栽基质培养，得到完整金樱子成年植株。本发明方法简便易行、诱导周期短、再生植株健壮并且生产迅速。
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公开(公告)号：CN111149527A
公开(公告)日：2020-05-15
申请号：CN202010048050.2
申请日：2020-01-16
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明提出了一种月季扦插生根能力的评价方法，属于植物栽培和繁育技术领域。主要方法是扦插多个品种月季，并于扦插后20天对月季扦插根系指标进行测定，包括平均生根率、平均根长、平均生根数、最长根长四项根系指标。对四项根系指标进行标准化处理，而后进行主成分分析，并进行隶属函数值计算，最终转化成生根综合评价值。综合评价值将四项根系指标归一化处理，最终的综合评价值大小可以用来衡量统一条件下不同月季品种的生根能力，综合评价值越大生根能力越强。本发明可以综合不同根系指标归一化考量不同品种月季的扦插生根能力，对于月季繁殖方式的选择和良种选育具有重要意义。
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公开(公告)号：CN107014792B
公开(公告)日：2019-08-09
申请号：CN201710259815.5
申请日：2017-04-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用月季瞬时表达系统鉴定蛋白互作的方法，包括如下步骤：（1）提取含有目的基因的入门载体质粒；（2）将含有目的基因的入门载体质粒分别和含有萤火虫荧光素酶基因N端、C端的双元表达载体进行LR重组反应，提取质粒；（3）将LR反应后得到的含有目的基因和萤火虫荧光素酶基因片段的重组质粒转化农杆菌，制备转化液；（4）取继代培养1个月的月季无菌苗转移到上述所得转化液中，真空渗透3～5分钟，然后用无菌水清洗后将月季苗放回到继代培养基中培养；（5）取上述转化后月季苗均匀喷洒荧光素后放置CCD荧光照相系统的暗室中拍照，鉴定是否存在蛋白互作。本发明简便易行、设备要求不高、假阳性率低。
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公开(公告)号：CN108719061A
公开(公告)日：2018-11-02
申请号：CN201810438916.3
申请日：2018-05-09
Applicant: 南京农业大学
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明公开了一种诱导金樱子叶片直接产生不定芽及植株再生的方法，包括：切取金樱子无菌苗的带小柄单叶片接种到诱导培养基上暗培养8-10天，暗培养后的叶片转移到光照时间16h/d、温度为25±2℃条件下培养25-40天，叶柄处产生不定芽；切割分离不定芽，转移到增殖培养基中继续培养，生长20-30天左右获得大量丛生芽；将丛生芽切割分离成单芽体，转移到壮苗培养基中壮苗25-40天，芽苗可以生长成株高3-5cm的幼苗，然后转移到生根培养基中诱导生根，20-30天后生根率达95％以上；将生根的幼苗转移到盆栽基质培养，得到完整金樱子成年植株。本发明方法简便易行、诱导周期短、再生植株健壮并且生产迅速。
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公开(公告)号：CN108611353A
公开(公告)日：2018-10-02
申请号：CN201810437844.0
申请日：2018-05-09
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，涉及一种用病毒诱导的基因沉默体系鉴定月季开花基因功能的方法。构建了烟草脆裂病毒TRV介导的RcCO基因病毒诱导基因沉默载体，并转化感受态农杆菌，继而通过真空渗透法对月季进行了瞬时转化，诱导了月季内源RcCO基因的沉默，实现病毒诱导的基因沉默体系鉴定月季开花基因功能。该种方法简便易行、材料易得，采用TRV 1/TRV 2-RcCO等比例混合的侵染液侵染月季，假阳性率低，表型鉴定周期短、转化效率高，便于高通量操作，为大规模开展月季基因功能研究提供依据。
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