公开(公告)号：CN106566845B

公开(公告)日：2018-01-16

申请号：CN201610990205.8

申请日：2016-11-10

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王权 ,  沈其荣 ,  刘东阳 ,  王佳音 ,  朱瀚

IPC: C07H19/213 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种霍氏肠杆菌生产的生物表面活性剂及其应用。利用霍氏肠杆菌Enterobacter hormaechei生产了生物表活性剂，对配方及生产条件进行了深入探索。对碳源、氮源的加入量进行了改良，并对生产发酵条件进行了改良，使得表面活性剂产量每升达到了2g以上。创新性的将生物表面活性剂与废弃畜禽氨基酸水解液进行伍配，使产物成分不流失，且避免了提纯工作。

公开(公告)号：CN116286403A

公开(公告)日：2023-06-23

申请号：CN202211121153.2

申请日：2022-09-15

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 沈其荣 ,  刘东阳 ,  朱瀚 ,  李驰 ,  李托 ,  刘洋

IPC: C12N1/15 ,  C12N15/12 ,  C12N15/31 ,  C12N15/65 ,  G01N21/64 ,  C12R1/885

Abstract: 本发明公开了一种丝状真菌氧化还原指示传感器及其构建方法和应用。本发明所涉及的传感器，以avGFP为原型，通过定点突变氨基酸位点并在avGFP的149和202位引入一对半胱氨酸最终形成相应序列；以哈茨木霉NJAU 4742的基因组DNA为模板，克隆长度为1308 bp的U3基因片段，基因合成潮霉素B抗性表达片段，以哈茨木霉NJAU 4742的基因组DNA为模板，克隆长度为532bp的U3基因上游同源臂，克隆长度为1663bp的强启动子片段，以pUC57质粒为模板扩增的氧化还原指示传感器功能性片段以及长度为1185bp的U3基因下游同源臂，并将6个片段利用融合PCR技术进行融合，再通过转化的方式最终形成氧化还原指示荧光菌株。本发明的传感器，将为实现丝状真菌胞内氧化还原状态的可视化操作提供理论和应用基础。

公开(公告)号：CN116064637A

公开(公告)日：2023-05-05

申请号：CN202211121243.1

申请日：2022-09-15

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 沈其荣 ,  刘东阳 ,  刘洋 ,  朱瀚 ,  李托 ,  孔志坚

IPC: C12N15/80 ,  C12N15/65 ,  C12N15/31 ,  C12N1/15 ,  G01N21/64 ,  C12R1/885

Abstract: 本发明公开了一种适用于丝状真菌胞内葡萄糖含量原位实时监测感受器及其构建方法和应用。本发明的一种适用于丝状真菌胞内葡萄糖含量原位实时监测感受器的编码基因，其核苷酸序列选自如下（1）或（2）：（1）如SEQ ID NO.1所示；（2）与SEQ ID NO.1所示的序列具有至少80%、至少85%、至少90%、至少95%、至少98%或至少99%同源性的核苷酸序列。本发明中所涉及的胞内葡萄糖含量原位实时监测感受器，将为提高丝状真菌胞内葡萄糖含量的精准监测和调控提供坚实的理论和应用基础。

公开(公告)号：CN115960254A

公开(公告)日：2023-04-14

申请号：CN202211121257.3

申请日：2022-09-15

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 沈其荣 ,  刘东阳 ,  朱瀚 ,  李托 ,  刘洋 ,  孔志坚

IPC: C07K19/00 ,  C12N15/62 ,  C12N15/80 ,  C12N15/31 ,  C12N1/15 ,  C12Q1/6897 ,  C12R1/885

Abstract: 本发明公开了一种适用于丝状真菌胞内氢离子浓度原位监测的传感器及其构建方法和应用。本发明的传感器，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。构建时，以质粒pME pHluorin2为模板，扩增获得氢离子浓度敏感基因片段；以质粒pcDNA为模板，扩增HygB和Mcherry片段；以哈茨木霉NJAU 4742的基因组为模板，扩增基因启动子、ura3功能基因片段、ura3上游500bp片段、ura3上游1200bp片段；利用重叠延伸PCR方法将这些片段以U3‑hygB‑U3 up‑promotor‑M‑pHluorin2‑U3 down的顺序连接，形成含有潮霉素抗性的Mcherry与氢离子浓度传感器双荧光示踪工作片段。本发明的传感器，将为提高丝状真菌胞内氢离子浓度的精准监测和调控提供充实的理论和应用基础。

公开(公告)号：CN119242450A

公开(公告)日：2025-01-03

申请号：CN202410810093.8

申请日：2024-06-21

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 沈其荣 ,  刘东阳 ,  朱瀚 ,  李托 ,  刘洋 ,  史晓腾

IPC: C12N1/14 ,  C12N13/00 ,  C12N15/04 ,  C12N1/02 ,  C12Q1/6895 ,  C12Q1/6869 ,  C12Q1/04 ,  C12R1/885

Abstract: 本发明公开了一种无性繁殖类丝状真菌新功能基因的挖掘方法及其应用，涉及应用微生物技术领域，保藏编号：CGMCC No.12166；保藏单位：中国普通微生物菌种保藏管理中心；保藏日期：2016年4月11日。本发明公开了一种无性繁殖类丝状真菌新功能基因的挖掘方法：S1、构建脲苷合成缺陷型但具有潮霉素抗性的木霉菌株A；S2、获取随机突变株B；S3、通过原生质体融合方法构建暂时性拟似“二倍体”；S4、通过核内的两套染色体通过同源重组进行随机突变子染色体基因随机回补，并通过表型变化筛选获得表型回补突变子；S5、利用重测序技术确定回补的关键突变位点并通过基因编辑方法反向验证基因功能。本发明方法给研究无性繁殖类丝状真菌的功能基因提供了新的方法。

公开(公告)号：CN106566845A

公开(公告)日：2017-04-19

申请号：CN201610990205.8

申请日：2016-11-10

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 王权 ,  沈其荣 ,  刘东阳 ,  王佳音 ,  朱瀚

IPC: C12P1/04 ,  C12N1/20 ,  C05G3/00 ,  C12R1/01

CPC classification number: C12P1/04 ,  C05C11/00 ,  C05G3/00 ,  C05G3/0064 ,  C12R1/01

Abstract: 本发明公开了一种霍氏肠杆菌生产的生物表面活性剂及其应用。利用霍氏肠杆菌Enterobacter hormaechei生产了生物表活性剂，对配方及生产条件进行了深入探索。对碳源、氮源的加入量进行了改良，并对生产发酵条件进行了改良，使得表面活性剂产量每升达到了2g以上。创新性的将生物表面活性剂与废弃畜禽氨基酸水解液进行伍配，使产物成分不流失，且避免了提纯工作。