公开(公告)号：CN116926106A

公开(公告)日：2023-10-24

申请号：CN202211523455.2

申请日：2022-11-30

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 柳李旺 ,  应佳丽 ,  王燕 ,  徐良 ,  马银波 ,  王沦 ,  姚数琦

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/84 ,  C12N15/53 ,  A01H5/00 ,  A01H6/20

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR/Cas9系统的萝卜基因编辑技术及其应用，首次在萝卜‘NAU‑067’中通过根癌农杆菌介导的遗传转化实现萝卜RsPDS基因编辑。将培养4～5d无菌苗切取带柄子叶后置于MS固体培养基上预培养3d，根癌农杆菌侵染萝卜带柄子叶后在MS固体培养基上共培养3d，之后置于MS+0.75mg/L TDZ+0.35mg/L NAA+300mg/L Carb的固体培养基上诱导不定芽。以RsPDS基因为例，出芽后采用GUS染色初步分析是否为转基因阳性愈伤组织，采用改良CTAB法提取白化苗DNA，PCR扩增发现1株新叶全白化苗在靶位点2存在3个碱基缺失和单个碱基替换，1株白化嵌合株在靶位点1存在3个碱基插入和单个碱基替换。本发明建立起一种基于CRISPR/Cas9系统的萝卜功能基因编辑技术体系，为创制突变体、高效验证基因的生物学功能以及创制萝卜优异种质提供了重要技术支撑。