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公开(公告)号：CN107014792B
公开(公告)日：2019-08-09
申请号：CN201710259815.5
申请日：2017-04-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种利用月季瞬时表达系统鉴定蛋白互作的方法，包括如下步骤：（1）提取含有目的基因的入门载体质粒；（2）将含有目的基因的入门载体质粒分别和含有萤火虫荧光素酶基因N端、C端的双元表达载体进行LR重组反应，提取质粒；（3）将LR反应后得到的含有目的基因和萤火虫荧光素酶基因片段的重组质粒转化农杆菌，制备转化液；（4）取继代培养1个月的月季无菌苗转移到上述所得转化液中，真空渗透3～5分钟，然后用无菌水清洗后将月季苗放回到继代培养基中培养；（5）取上述转化后月季苗均匀喷洒荧光素后放置CCD荧光照相系统的暗室中拍照，鉴定是否存在蛋白互作。本发明简便易行、设备要求不高、假阳性率低。
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公开(公告)号：CN107014792A
公开(公告)日：2017-08-04
申请号：CN201710259815.5
申请日：2017-04-20
Applicant: 南京农业大学
CPC classification number: G01N21/6428 , C12N15/8212
Abstract: 本发明公开了一种利用月季瞬时表达系统鉴定蛋白互作的方法，包括如下步骤：（1）提取含有目的基因的入门载体质粒；（2）将含有目的基因的入门载体质粒分别和含有萤火虫荧光素酶基因N端、C端的双元表达载体进行LR重组反应，提取质粒；（3）将LR反应后得到的含有目的基因和萤火虫荧光素酶基因片段的重组质粒转化农杆菌，制备转化液；（4）取继代培养1个月的月季无菌苗转移到上述所得转化液中，真空渗透3～5分钟，然后用无菌水清洗后将月季苗放回到继代培养基中培养；（5）取上述转化后月季苗均匀喷洒荧光素后放置CCD荧光照相系统的暗室中拍照，鉴定是否存在蛋白互作。本发明简便易行、设备要求不高、假阳性率低。
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公开(公告)号：CN106868042B
公开(公告)日：2020-04-03
申请号：CN201710263493.1
申请日：2017-04-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种月季不定芽真空渗透转基因方法，包括以下步骤：切取月季无菌苗的幼嫩茎尖，在增殖培养基上诱导产生大量不定芽；切取不定芽在增殖培养基上预培养3天，然后转移到携带目的基因的农杆菌转化液中真空渗透5～10 min，充分浸湿；去除菌液后的不定芽转移到增殖培养基上在黑暗条件下共培养3天，然后把经无菌水彻底清洗后的不定芽转入抑菌培养基培养5天，再根据携带目的基因表达载体的选择标记转入到选择培养基上按由低到高梯度筛选，获得的抗性不定芽转移到生根培养基上诱导生根；采集阳性植株的叶片进行PCR鉴定和报告基因检测，都为阳性的植株为转基因植株。本发明增值系数高、繁殖周期短、基因转化率高、假阳性率低。
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公开(公告)号：CN106868042A
公开(公告)日：2017-06-20
申请号：CN201710263493.1
申请日：2017-04-20
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种月季不定芽真空渗透转基因方法，包括以下步骤：切取月季无菌苗的幼嫩茎尖，在增殖培养基上诱导产生大量不定芽；切取不定芽在增殖培养基上预培养3天，然后转移到携带目的基因的农杆菌转化液中真空渗透5～10 min，充分浸湿；去除菌液后的不定芽转移到增殖培养基上在黑暗条件下共培养3天，然后把经无菌水彻底清洗后的不定芽转入抑菌培养基培养5天，再根据携带目的基因表达载体的选择标记转入到选择培养基上按由低到高梯度筛选，获得的抗性不定芽转移到生根培养基上诱导生根；采集阳性植株的叶片进行PCR鉴定和报告基因检测，都为阳性的植株为转基因植株。本发明增值系数高、繁殖周期短、基因转化率高、假阳性率低。
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