黄瓜单拷贝基因的染色体物理定位方法

    公开(公告)号:CN104419763B

    公开(公告)日:2017-01-18

    申请号:CN201310409784.9

    申请日:2013-09-11

    IPC分类号: C12Q1/68

    摘要: 本发明公开了黄瓜单拷贝基因在染色体上物理定位的方法,它是通过PCR扩增获得黄瓜单拷贝基因,然后对产物进行凝胶电泳回收纯化,以纯化产物为模板进行第二次PCR扩增,然后将第二次PCR产物标备探针。分别取黄瓜根尖和盛花期植株上的花蕾进行酶解,涂片法制片,挑选分散度高的片子,并进一步进行胃蛋白酶处理后,备用。最后将标好的探针杂交到处理好的载玻片上,在荧光显微镜下观察信号。本发明采用PCR扩增后切胶回收,之后再进行二次PCR扩增的方法,不仅可以去除基因组DNA的干扰,而且解决了切胶回收率低的问题;另外涂片法结合胃蛋白酶处理制作背景清晰且分散度高的片子可以提高信号的分辨率;通过此方法,可在染色体上直接检测到的最短长度为2kb的单拷贝基因,为黄瓜的细胞遗传学研究提供了可靠的保证。

    黄瓜单拷贝基因的染色体物理定位方法

    公开(公告)号:CN104419763A

    公开(公告)日:2015-03-18

    申请号:CN201310409784.9

    申请日:2013-09-11

    IPC分类号: C12Q1/68

    摘要: 本发明公开了黄瓜单拷贝基因在染色体上物理定位的方法,它是通过PCR扩增获得黄瓜单拷贝基因,然后对产物进行凝胶电泳回收纯化,以纯化产物为模板进行第二次PCR扩增,然后将第二次PCR产物标备探针。分别取黄瓜根尖和盛花期植株上的花蕾进行酶解,涂片法制片,挑选分散度高的片子,并进一步进行胃蛋白酶处理后,备用。最后将标好的探针杂交到处理好的载玻片上,在荧光显微镜下观察信号。本发明采用PCR扩增后切胶回收,之后再进行二次PCR扩增的方法,不仅可以去除基因组DNA的干扰,而且解决了切胶回收率低的问题;另外涂片法结合胃蛋白酶处理制作背景清晰且分散度高的片子可以提高信号的分辨率;通过此方法,可在染色体上直接检测到的最短长度为2kb的单拷贝基因,为黄瓜的细胞遗传学研究提供了可靠的保证。

    黄瓜高分辨率染色体荧光原位杂交的方法

    公开(公告)号:CN103114151A

    公开(公告)日:2013-05-22

    申请号:CN201310081001.9

    申请日:2013-03-14

    IPC分类号: C12Q1/68 G01N21/64

    摘要: 本发明提供了一种荧光原位杂交的方法,以黄瓜减数分裂粗线期染色体为靶DNA进行多探针的荧光原位杂交。精选染色体分散良好且形态结构清晰的高质量制片,在80℃的70%去离子甲酰胺中变性,梯度酒精中脱水干燥;采用碱裂解法提取目标质粒DNA,利用缺刻平移法进行标记,配制杂交混合液,90℃变性后,加到载玻片上使靶DNA与探针进行杂交,最后进行信号检测。本发明的荧光原位杂交技术,可用于黄瓜染色体物理图谱的绘制,由于其一次性可加入多个探针,避免了对一张制片多次重复杂交,大大提高了实验效率。本发明在配置杂交混合液的过程中加入了适量的黄瓜全基因组DNA和Cot-1DNA,用于封阻杂信号和重复序列信号,提高了靶信号的辨识率,增加了实验结果的准确性。

    抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法

    公开(公告)号:CN102257953B

    公开(公告)日:2013-04-10

    申请号:CN201110123037.X

    申请日:2011-05-12

    IPC分类号: A01H1/02 A01G7/06

    摘要: 本发明属于生物技术育种领域,涉及抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法。本发明通过野生种与栽培种的种间杂交,染色体加倍获得双二倍体新种,经回交、自交获得种间渐渗系,再对黄瓜渐渗系利用人工苗期卵液接种法进行鉴定,鉴定结果发现渐渗系10299F-5的病情指数均为2.0,表现为抗病,由此得到抗南方根结线虫病的黄瓜种间杂交渐渗系材料。该抗南方根结线虫病的黄瓜种间杂交渐渗系材料农艺性状优良,可直接作为育种材料,不仅填补了黄瓜抗南方根结线虫资源的空白,还为其它植物的接种鉴定提供参考,而且为今后黄瓜品种的改良、抗病基因转移、基因定位、分子标记、基因克隆等提供了有用的遗传材料。

    抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法

    公开(公告)号:CN102257953A

    公开(公告)日:2011-11-30

    申请号:CN201110123037.X

    申请日:2011-05-12

    IPC分类号: A01H1/02 A01G7/06

    摘要: 本发明属于生物技术育种领域,涉及抗南方根结线虫黄瓜渐渗系材料的培育方法。本发明通过野生种与栽培种的种间杂交,染色体加倍获得双二倍体新种,经回交、自交获得种间渐渗系,再对黄瓜渐渗系利用人工苗期卵液接种法进行鉴定,鉴定结果发现渐渗系10299F-5的病情指数均为2.0,表现为抗病,由此得到抗南方根结线虫病的黄瓜种间杂交渐渗系材料。该抗南方根结线虫病的黄瓜种间杂交渐渗系材料农艺性状优良,可直接作为育种材料,不仅填补了黄瓜抗南方根结线虫资源的空白,还为其它植物的接种鉴定提供参考,而且为今后黄瓜品种的改良、抗病基因转移、基因定位、分子标记、基因克隆等提供了有用的遗传材料。

    黄瓜单性结实主效QTL Parth2.1的连锁分子标记及其应用

    公开(公告)号:CN110195125B

    公开(公告)日:2020-04-07

    申请号:CN201910605499.1

    申请日:2019-07-05

    摘要: 本发明公开了黄瓜单性结实主效QTL Parth2.1的连锁分子标记及其应用。黄瓜单性结实主效QTL Parth2.1的连锁分子标记Indel‑16Y‑46,其上游引物:SEQ ID NO.1,下游引物:SEQ ID NO.2。本发明所述的分子标记在全雌强单性结实黄瓜新品种分子标记辅助育种中的应用。利用本发明分子标记对Parth2.1位点选择效率为100%。基于该分子标记开发了一种全雌强单性结实黄瓜新品种的分子标记辅助育种方法,获得的全雌强单性结实的黄瓜新品种是欧洲温室型黄瓜自交系品种,有较高的产量和优良的果实品质,可直接作为改良其他品种单性结实性和全雌性的骨干亲本。

    一种种间杂交改良栽培黄瓜霜霉病抗性的育种方法

    公开(公告)号:CN117546773A

    公开(公告)日:2024-02-13

    申请号:CN202311389380.8

    申请日:2023-10-25

    摘要: 本发明公开了一种种间杂交改良栽培黄瓜霜霉病抗性的育种方法,涉及黄瓜抗病育种技术领域,其技术方案要点是:包括人工授粉,授粉后,对果梗喷施坐果灵和对幼嫩子房喷TDZ激素,并挂牌标记;消毒取种:取授粉后成熟果实,先清洗表面,对其表面消毒,消毒后将种子取出、催芽种植:将获得的种子浸泡在水中,数个小时后将种子转移至盛有清水的容器中,置于光照培养箱中进行催芽,期间每天定时换水,出芽后进行田间常规种植管理等步骤。本发明具有克服黄瓜种间杂交障碍,通过进行霜霉病抗性的田间鉴定,利用重茬地块统计霜霉病自然发病情况,发现种间杂交后代的霜霉病抗性增强以及扩充栽培黄瓜资源遗传基础等效果。