公开(公告)号：CN112359082B

公开(公告)日：2023-02-21

申请号：CN202011267324.3

申请日：2020-11-13

申请人： 南京工业大学

发明人： 陈可泉 ,  周彩莲 ,  王昕 ,  许晟

IPC分类号： C12P19/30

摘要： 本发明公开了一种烟酰胺单核苷酸的制备方法，向缓冲液中加入烟酰胺、三磷酸腺苷、尿苷和含有Mg2+的化合物，调节pH为6.0～8.0，再加入嘌呤核苷磷酸化酶、嘧啶核苷磷酸化酶及烟酰胺核糖激酶制得的粗酶液，进行酶促反应，即得。本发明首次使用尿苷作为底物，且对底物烟酰胺以及ATP、尿苷的转化率达到90％以上。

公开(公告)号：CN113999807A

公开(公告)日：2022-02-01

申请号：CN202111287718.X

申请日：2021-11-02

申请人： 南京工业大学

发明人： 陈可泉 ,  李春秋 ,  冯娇 ,  张锟 ,  曾金磊 ,  周彩莲

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12P7/44 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种重组菌株的构建方法及其在产衣康酸上的应用，通过对顺乌头酸脱羧酶基因cadA进行定点突变，使得天然的顺乌头酸脱羧酶基因cadA的第470位的Arg突变为Glu，然后转入大肠杆菌进行异源表达。定点突变使用的是大引物PCR方法，该方法操作简单便捷，突变率高，且成本较低。本发明生产衣康酸使用了全细胞催化法，与常规发酵相比，可以降低生产成本，缩短生产时间，有效提高衣康酸的产量。此外，底物易于获得，生物转化产生的副产品较少，便于提纯，有效克服传统合成方法的产物复杂的缺点，并在工业生产中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN114958894A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210672219.0

申请日：2022-06-14

申请人： 南京工业大学

发明人： 王昕 ,  胡鑫峰 ,  陈可泉 ,  刘逸 ,  王靖 ,  周彩莲

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/31 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12P13/00

摘要： 本发明公开了一种基于CcmK2纤维状蛋白的亚精胺合成多酶复合体的构建方法及其应用。利用来源于自然界中的纤维小体中存在的相互作用蛋白对，将亚精胺合酶SpeE和S‑腺苷蛋氨酸脱羧酶SpeD分别融合粘连蛋白CohesinⅡ和锚定蛋白DockerinⅡ，利用CohesinⅡ和DockerinⅡ的相互作用，形成SpeE‑SpeD双酶结合体；再在CohesinⅡ上融合结合分子肽SpyTag，将SpeE‑SpeD双酶结合体组装到融合结合蛋白SpyCatche的纤维状蛋白CcmK2上；形成多酶复合体。本发明多酶复合体在多酶之间形成底物通道，拉近底物与酶之间的空间距离，提高了中间体的传递效率，充分发挥双酶间的协同作用，大大提高了亚精胺的合成效率。

公开(公告)号：CN114395573A

公开(公告)日：2022-04-26

申请号：CN202210085700.X

申请日：2022-01-25

申请人： 南京工业大学

发明人： 陈可泉 ,  李春秋 ,  冯娇 ,  曾金磊 ,  周彩莲

IPC分类号： C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/44 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种利用反乌头酸脱羧酶提高全细胞催化产衣康酸产量的方法，由擎科生物将玉米黑粉菌来源的反乌头酸脱羧酶（TcadA），优化合成，得到pETduet‑TcadA，与重组质粒pCDFduet‑acn‑cadA共转入大肠杆菌进行异源表达，采用全细胞催化法生产衣康酸，与出发菌株（pCDFduet‑acn‑cadA）相比，有效提高了衣康酸的产量。本发明生产衣康酸使用了全细胞催化法，与常规发酵相比，可以降低生产成本，缩短生产时间。此外，底物易于获得，生物转化产生的副产品较少，便于提纯，有效克服传统合成方法的产物复杂的缺点，并在工业生产中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN114395573B

公开(公告)日：2024-02-13

申请号：CN202210085700.X

申请日：2022-01-25

申请人： 南京工业大学

发明人： 陈可泉 ,  李春秋 ,  冯娇 ,  曾金磊 ,  周彩莲

IPC分类号： C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12N1/21 ,  C12P7/44 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种利用反乌头酸脱羧酶提高全细胞催化产衣康酸产量的方法，由擎科生物将玉米黑粉菌来源的反乌头酸脱羧酶（TcadA），优化合成，得到pETduet‑TcadA，与重组质粒pCDFduet‑acn‑cadA共转入大肠杆菌进行异源表达，采用全细胞催化法生产衣康酸，与出发菌株pCDFduet‑acn‑cadA）相比，有效提高了衣康酸的产量。本发明生产衣康酸使用了全细胞催化法，与常规发酵相比，可以降低生产成本，缩短生产时间。此外，底物易于获得，生物转化产生的副产品较少，便于提纯，有效克服传统合成方法的产物复杂的缺点，并在工业生产中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN113999807B

公开(公告)日：2023-04-25

申请号：CN202111287718.X

申请日：2021-11-02

申请人： 南京工业大学

发明人： 陈可泉 ,  李春秋 ,  冯娇 ,  张锟 ,  曾金磊 ,  周彩莲

IPC分类号： C12N1/21 ,  C12N15/60 ,  C12N15/70 ,  C12P7/44 ,  C12R1/19

摘要： 本发明公开了一种重组菌株的构建方法及其在产衣康酸上的应用，通过对顺乌头酸脱羧酶基因cadA进行定点突变，使得天然的顺乌头酸脱羧酶基因cadA的第470位的Arg突变为Glu，然后转入大肠杆菌进行异源表达。定点突变使用的是大引物PCR方法，该方法操作简单便捷，突变率高，且成本较低。本发明生产衣康酸使用了全细胞催化法，与常规发酵相比，可以降低生产成本，缩短生产时间，有效提高衣康酸的产量。此外，底物易于获得，生物转化产生的副产品较少，便于提纯，有效克服传统合成方法的产物复杂的缺点，并在工业生产中具有广泛的应用前景。

公开(公告)号：CN113943372A

公开(公告)日：2022-01-18

申请号：CN202111321839.1

申请日：2021-11-09

申请人： 南京工业大学

发明人： 李辉 ,  曾金磊 ,  陈可泉 ,  李春秋 ,  周彩莲 ,  陆秋豪 ,  欧阳平凯

IPC分类号： C07K17/14 ,  C12N11/14 ,  C12N11/02 ,  C12N9/88

摘要： 本发明公开了一种利用三价钴离子提高固定化蛋白稳定性的方法。该方法基于固定化蛋白的角度，以固定化蛋白进而提高蛋白的耐受性和重复利用性；其次通过三价钴离子与组氨酸标签的结合实现对蛋白的固定化，进而提高目标蛋白的活性。该方法的过程简单，价格低廉，用于含组氨酸标签的蛋白的固定化的操作简单，时间较短，且相比于二价钴离子与组氨酸标签的结合，三价钴离子的稳定性更好，具有很好的应用前景。

公开(公告)号：CN112359082A

公开(公告)日：2021-02-12

申请号：CN202011267324.3

申请日：2020-11-13

申请人： 南京工业大学

发明人： 陈可泉 ,  周彩莲 ,  王昕 ,  许晟

IPC分类号： C12P19/30

摘要： 本发明公开了一种烟酰胺单核苷酸的制备方法，向缓冲液中加入烟酰胺、三磷酸腺苷、尿苷和含有Mg2+的化合物，调节pH为6.0～8.0，再加入嘌呤核苷磷酸化酶、嘧啶核苷磷酸化酶及烟酰胺核糖激酶制得的粗酶液，进行酶促反应，即得。本发明首次使用尿苷作为底物，且对底物烟酰胺以及ATP、尿苷的转化率达到90％以上。