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公开(公告)号：CN107177620B
公开(公告)日：2020-12-18
申请号：CN201710509031.3
申请日：2017-06-28
申请人： 南宁中诺生物工程有限责任公司 , 广西科学院
摘要： 本发明公开了一种利用廉价原料生产四甲基吡嗪的方法，将α‑乙酰乳酸合成酶基因、α‑乙酰乳酸脱羧酶基因和NADH氧化酶基因的核苷酸序列进行密码子优化；拼接获得包含该三个基因的基因簇；将基因簇插入表达载体中，获得多顺反子重组质粒；再导入宿主菌E.coli，获得生产乙偶姻的基因工程菌株；将活化的菌株接种至含廉价原料的发酵培养基进行发酵培养，获得含有乙偶姻的发酵液；取发酵液进行离心处理，取上清液，再加入磷酸氢二铵，发酵产生的乙偶姻与NH4+反应合成四甲基吡嗪。本发明提供的菌株能有效利用来源广泛、成本低廉的原料生产高浓度前体物质乙偶姻，氧化型辅酶NAD+能够有效再生，可提高乙偶姻产量和生产效率，从而有效降低四甲基吡嗪的生产成本，缩短生产周期。
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公开(公告)号：CN108588062A
公开(公告)日：2018-09-28
申请号：CN201810599106.6
申请日：2018-06-12
申请人： 南宁中诺生物工程有限责任公司
CPC分类号： C12N9/90 , C12P19/12 , C12P19/24 , C12Y504/99016
摘要： 本发明公开了一种获得海藻糖合成酶突变体的方法及其应用。具体是对来源于弯曲高温单孢菌(Thermomonospora curvata)的海藻糖合成酶活性位点附近的氨基酸进行饱和突变，以含有葡萄糖的麦芽糖溶液为底物，快速筛选海藻糖得率高的突变体酶。用此方法获得的突变体酶包括第286位的组氨酸突变为谷氨酰胺H286Q，第286位的组氨酸突变为天冬酰胺H286N和第339位的谷氨酸突变为精氨酸E339R。突变体酶能够利用常规生物工程的方法制备，并用于海藻糖的生产。本发明利用快速检测方法筛选海藻糖合成酶突变体，获得的突变体酶能够大幅降低葡萄糖对海藻糖合成酶活性的抑制作用，提高海藻糖合成酶转化效率，有很高的利用价值。
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公开(公告)号：CN107177620A
公开(公告)日：2017-09-19
申请号：CN201710509031.3
申请日：2017-06-28
申请人： 南宁中诺生物工程有限责任公司 , 广西科学院
摘要： 本发明公开了一种利用廉价原料生产四甲基吡嗪的方法，将α‑乙酰乳酸合成酶基因、α‑乙酰乳酸脱羧酶基因和NADH氧化酶基因的核苷酸序列进行密码子优化；拼接获得包含该三个基因的基因簇；将基因簇插入表达载体中，获得多顺反子重组质粒；再导入宿主菌E. coli，获得生产乙偶姻的基因工程菌株；将活化的菌株接种至含廉价原料的发酵培养基进行发酵培养，获得含有乙偶姻的发酵液；取发酵液进行离心处理，取上清液，再加入磷酸氢二铵，发酵产生的乙偶姻与NH4+反应合成四甲基吡嗪。本发明提供的菌株能有效利用来源广泛、成本低廉的原料生产高浓度前体物质乙偶姻，氧化型辅酶NAD+能够有效再生，可提高乙偶姻产量和生产效率，从而有效降低四甲基吡嗪的生产成本，缩短生产周期。
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