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公开(公告)号：CN118185860A
公开(公告)日：2024-06-14
申请号：CN202410452024.4
申请日：2024-04-16
申请人： 南开大学
摘要： 本发明公开了一种体内来源单倍体细胞制作类脑器官的方法，包括以下步骤：步骤一：将BCL2过表达的小鼠单倍体胚胎干细胞通过胚胎注射的方法获得重构胚胎，并将重构胚胎移植回0.5天假孕母鼠的输卵管中，在胚胎发育到E8.5天时进行解剖，分离体节组织；步骤二：将分离后的体节组织培养于神经干细胞培养基中，并通过流式分选富集单倍体细胞，建立小鼠单倍体神经干细胞系；步骤三：将获得的小鼠单倍体神经干细胞系培养于类脑培养液中，经过生长和空间折叠获得单倍体神经干细胞来源的小鼠类脑器官；步骤四：采用免疫荧光细胞和分子生物学进行鉴定。本发明通过体外培养形成单倍体神经干细胞来源的小鼠类脑器官，异质性较小，有助于功能基因的探索。
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公开(公告)号：CN111876375B
公开(公告)日：2022-05-17
申请号：CN202010798579.6
申请日：2020-08-10
申请人： 南开大学
IPC分类号： C12N5/0735
摘要： 本发明公开了一种小鼠单倍体干细胞的获得方法，包括如下步骤：步骤一、将p53敲除的小鼠单倍体胚胎干细胞通过显微注射的方法，注射到野生型小鼠囊胚中得到重构胚胎；步骤二、将重构胚胎移植回0.5天的假孕母鼠的输卵管或2.5天假孕母鼠的子宫中，在胚胎发育到E6.5天时进行解剖，分离上胚层区域；步骤三、将上胚层区域种在培养基中培养，最终形成小鼠单倍体上胚层干细胞。本发明通过p53‑KO的方法，有效抑制了单倍体干细胞在体内分化过程中的自发二倍化，并借助嵌合体技术在体外成功建立了来源于着床后上胚层组织的小鼠单倍体上胚层干细胞系。
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公开(公告)号：CN111876375A
公开(公告)日：2020-11-03
申请号：CN202010798579.6
申请日：2020-08-10
申请人： 南开大学
IPC分类号： C12N5/0735
摘要： 本发明公开了一种小鼠单倍体干细胞的获得方法，包括如下步骤：步骤一、将p53敲除的小鼠单倍体胚胎干细胞通过显微注射的方法，注射到野生型小鼠囊胚中得到重构胚胎；步骤二、将重构胚胎移植回0.5天的假孕母鼠的输卵管或2.5天假孕母鼠的子宫中，在胚胎发育到E6.5天时进行解剖，分离上胚层区域；步骤三、将上胚层区域种在培养基中培养，最终形成小鼠单倍体上胚层干细胞。本发明通过p53-KO的方法，有效抑制了单倍体干细胞在体内分化过程中的自发二倍化，并借助嵌合体技术在体外成功建立了来源于着床后上胚层组织的小鼠单倍体上胚层干细胞系。
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公开(公告)号：CN118389597A
公开(公告)日：2024-07-26
申请号：CN202410543731.4
申请日：2024-05-06
申请人： 南开大学
IPC分类号： C12N15/85 , C12N5/0735 , C12N5/10 , C12N15/12
摘要： 本发明公开了一种小鼠全能性干细胞的获得方法，包括：构建Pdzk1基因敲除的载体质粒；Pdzk1基因敲除的小鼠胚胎干细胞的获得；通过嵌合体实验证明该干细胞具有全能性；通过在体外自组装囊胚后可建立三种不同谱系的干细胞系证明此细胞具有全能性。本发明通过在胚胎干细胞中敲除Pdzk1基因，并通过嵌合体实验和体外类囊胚建系实验证明其具有全能性，便于更好地推进哺乳动物早期胚胎发育的研究。
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公开(公告)号：CN117210498A
公开(公告)日：2023-12-12
申请号：CN202311175477.9
申请日：2023-09-13
申请人： 南开大学
摘要： 本发明公开了一种小鼠人造自组装囊胚的快速构建方法，包括如下步骤：步骤一、构建Dyrk1a基因敲除的载体；步骤二、将Dyrk1a基因敲除的载体转染至胚胎干细胞中，并等待流式分选；步骤三、分选获得顺利转染Dyrk1a基因敲除载体的胚胎干细胞，进一步培养并对其进行亚克隆挑取和基因型鉴定；步骤四、将Dyrk1a基因敲除的胚胎干细胞置于自组装囊胚培养体系中培养。本发明通过在胚胎干细胞中敲除Dyrk1a基因，使胚胎干细胞获得类全能性，以获得在体外可自组装形成囊胚样结构的能力，便于更好推进哺乳动物早期胚胎发育的研究。
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