公开(公告)号：CN106084063A

公开(公告)日：2016-11-09

申请号：CN201610356325.2

申请日：2016-05-26

Applicant: 吉林大学

Inventor： 于彬 ,  于湘晖 ,  孔维 ,  闫晶怡 ,  王真

IPC: C07K19/00 ,  A61K38/17 ,  A61K38/16 ,  A61P35/00

CPC classification number: C07K14/70575 ,  A61K38/00 ,  C07K14/005 ,  C07K2319/00 ,  C12N2710/10022

Abstract: 本发明公开了一种利用腺病毒纤维蛋白片段作为三聚体模序与TRAIL融合表达，获得稳定性和活性提高的重组蛋白，作为抗肿瘤治疗药物。还提供融合蛋白表达纯化及活性检测的方法。具体为：第一步；设计并构建融合基因，利用大肠杆菌系统低温诱导表达；第二步：采用镍柱亲和层析的方法纯化目的蛋白，利用凝血酶酶切位点切除His标签，获得最终目的蛋白；第三步：体外检测融合蛋白对肿瘤细胞的杀伤活性和对正常细胞的毒性，第四步：不同条件下检测融合蛋白的稳定性，第五步：裸鼠模型上检测融合蛋白的体内抗肿瘤活性。有益效果：发明了2个腺病毒纤维蛋白片段作为三聚体模序的TRAIL融合蛋白。提供了一种简单，快速的获得高稳定性TRAIL蛋白的方法，可应用于TRAIL蛋白的抗肿瘤研究和应用。解决了TRAIL蛋白稳定性差，活性低的弊端。

公开(公告)号：CN106084063B

公开(公告)日：2020-10-30

申请号：CN201610356325.2

申请日：2016-05-26

Applicant: 吉林大学

Inventor： 于彬 ,  于湘晖 ,  孔维 ,  闫晶怡 ,  王真

IPC: C07K19/00 ,  A61K38/17 ,  A61K38/16 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明公开了一种利用腺病毒纤维蛋白片段作为三聚体模序与TRAIL融合表达，获得稳定性和活性提高的重组蛋白，作为抗肿瘤治疗药物。还提供融合蛋白表达纯化及活性检测的方法。具体为：第一步；设计并构建融合基因，利用大肠杆菌系统低温诱导表达；第二步：采用镍柱亲和层析的方法纯化目的蛋白，利用凝血酶酶切位点切除His标签，获得最终目的蛋白；第三步：体外检测融合蛋白对肿瘤细胞的杀伤活性和对正常细胞的毒性，第四步：不同条件下检测融合蛋白的稳定性，第五步：裸鼠模型上检测融合蛋白的体内抗肿瘤活性。有益效果：发明了2个腺病毒纤维蛋白片段作为三聚体模序的TRAIL融合蛋白。提供了一种简单，快速的获得高稳定性TRAIL蛋白的方法，可应用于TRAIL蛋白的抗肿瘤研究和应用。解决了TRAIL蛋白稳定性差，活性低的弊端。