一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法

    公开(公告)号:CN112941075B

    公开(公告)日:2023-02-10

    申请号:CN202110142860.9

    申请日:2021-02-02

    Applicant: 同济大学

    Abstract: 本发明涉及一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法,主要基于KCNQ1基因修饰实现模型构建过程,本发明利用Crisper/Cas9技术全身敲除大鼠延迟整流钾离子通道KCNQ1基因,通过ELISA实验检测成年大鼠血清中甲状腺激素水平的变化,同时利用Powerlab数据分析系统检测大鼠心脏电活动的改变,成功获得了甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型。与现有技术相比,本发明通过大鼠体内KCNQ1基因的遗传操作,理解该基因对甲状腺功能和心脏功能的双重影响以及二者之间的关联,对全面解析KCNQ1基因突变影响心脏功能的复杂分子机制具有重要意义。

    一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法

    公开(公告)号:CN112941075A

    公开(公告)日:2021-06-11

    申请号:CN202110142860.9

    申请日:2021-02-02

    Applicant: 同济大学

    Abstract: 本发明涉及一种构建甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型的方法,主要基于KCNQ1基因修饰实现模型构建过程,本发明利用Crisper/Cas9技术全身敲除大鼠延迟整流钾离子通道KCNQ1基因,通过ELISA实验检测成年大鼠血清中甲状腺激素水平的变化,同时利用Powerlab数据分析系统检测大鼠心脏电活动的改变,成功获得了甲状腺功能障碍及心脏长QT综合征双表型大鼠模型。与现有技术相比,本发明通过大鼠体内KCNQ1基因的遗传操作,理解该基因对甲状腺功能和心脏功能的双重影响以及二者之间的关联,对全面解析KCNQ1基因突变影响心脏功能的复杂分子机制具有重要意义。

    定向诱导大鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的培养基及方法

    公开(公告)号:CN108531449A

    公开(公告)日:2018-09-14

    申请号:CN201810497255.1

    申请日:2018-05-22

    Applicant: 同济大学

    Inventor: 彭鲁英 王铎 李丽

    Abstract: 本发明涉及定向诱导大鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的培养基及方法。与现有技术相比,本发明研发了一种体外大鼠胚胎干细胞定向心肌细胞高效分化培养基,在此基础上结合细胞外基质小鼠来源的层粘连蛋白(laminin)共同构成大鼠胚胎干细胞体外定向心肌细胞高效分化系统,可以更好的促使大鼠拟胚体(rat embryonic body,rEB)贴附,增殖,定向心肌细胞分化。本发明体系体现为分化效率高,分化周期短,分化产生的细胞数目多等特点。

    一种大鼠胚胎干细胞高效培养基

    公开(公告)号:CN105483080A

    公开(公告)日:2016-04-13

    申请号:CN201510935009.6

    申请日:2015-12-15

    Applicant: 同济大学

    Abstract: 本发明涉及一种大鼠胚胎干细胞高效培养基,每40ml的大鼠胚胎干细胞高效培养基包括以下成分:DMEM/F12培养基20ml、Neurobasal培养基20ml、b-巯基乙醇1.65×10-8mol、CHIR99021 1.2×10-7mol、PD0325901 4×10-8mol、N-2添加剂0.2ml、B-27添加剂0.4ml、L-谷氨酰胺2×10-5mol、重组小鼠白血病抑制因子4.14ul。与传统“2i”培养基相比,本发明将抑制剂PD0325901、CHIR99021的使用量提升了一倍,并加入了重组小鼠白血病抑制因子,降低了传统“2i”培养基中的β-巯基乙醇浓度。使用传统“2i”培养基需要4-5天才可使大鼠胚胎干细胞长到合适大小及密度,而使用本发明培养基需要2-3天即可长到相同密度,且单个干细胞克隆要大于使用传统“2i”培养基所培养的大鼠胚胎干细胞。

    定向诱导大鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的培养基及方法

    公开(公告)号:CN108531449B

    公开(公告)日:2020-08-18

    申请号:CN201810497255.1

    申请日:2018-05-22

    Applicant: 同济大学

    Inventor: 彭鲁英 王铎 李丽

    Abstract: 本发明涉及定向诱导大鼠胚胎干细胞分化为心肌细胞的培养基及方法。与现有技术相比,本发明研发了一种体外大鼠胚胎干细胞定向心肌细胞高效分化培养基,在此基础上结合细胞外基质小鼠来源的层粘连蛋白(laminin)共同构成大鼠胚胎干细胞体外定向心肌细胞高效分化系统,可以更好的促使大鼠拟胚体(rat embryonic body,rEB)贴附,增殖,定向心肌细胞分化。本发明体系体现为分化效率高,分化周期短,分化产生的细胞数目多等特点。

    一步式真核细胞多基因修饰载体构建方法

    公开(公告)号:CN104531749B

    公开(公告)日:2018-10-26

    申请号:CN201410785444.0

    申请日:2014-12-16

    Applicant: 同济大学

    Abstract: 本发明涉及一步式真核细胞多基因修饰载体构建方法,首先应确定欲修饰的基因数目N,然后将各个基因的CDS区分别引入pOE‑1至pOE‑N中,同时也可以将每个基因对应的shRNA序列分别引入pSH‑1至pSH‑N中。通过将pOE‑1至pOE‑N和pDV‑N加入同一个反应体系中,即可一步式构建出N个基因串联过表达的最终质粒;或者将pSH‑1至pSH‑N和pDV‑N加入同一个反应体系中,即可一步式构建出N个基因同时knock‑down的最终质粒;同样的,也可以选择其中几个基因的过表达质粒和另外基因的knock‑down质粒和pDV‑N加入同一个反应体系中,即可一步式构建出既含有多个基因过表达,同时将另一些基因knock‑down的最终载体。与现有技术相比,本发明的构建过程一步式,过程简便,效率高,同时可对多个目的基因进行任意组合。

    一步式真核细胞多基因修饰载体构建方法

    公开(公告)号:CN104531749A

    公开(公告)日:2015-04-22

    申请号:CN201410785444.0

    申请日:2014-12-16

    Applicant: 同济大学

    Abstract: 本发明涉及一步式真核细胞多基因修饰载体构建方法,首先应确定欲修饰的基因数目N,然后将各个基因的CDS区分别引入pOE-1至pOE-N中,同时也可以将每个基因对应的shRNA序列分别引入pSH-1至pSH-N中。通过将pOE-1至pOE-N和pDV-N加入同一个反应体系中,即可一步式构建出N个基因串联过表达的最终质粒;或者将pSH-1至pSH-N和pDV-N加入同一个反应体系中,即可一步式构建出N个基因同时knock-down的最终质粒;同样的,也可以选择其中几个基因的过表达质粒和另外基因的knock-down质粒和pDV-N加入同一个反应体系中,即可一步式构建出既含有多个基因过表达,同时将另一些基因knock-down的最终载体。与现有技术相比,本发明的构建过程一步式,过程简便,效率高,同时可对多个目的基因进行任意组合。

Patent Agency Ranking