一种新型的产植酸酶基因工程菌及其培养方法

    公开(公告)号:CN1644676A

    公开(公告)日:2005-07-27

    申请号:CN200410081442.X

    申请日:2004-12-10

    IPC分类号: C12N1/19 C12N15/81 C12N9/16

    摘要: 本研究属于生物技术领域。采用PCR技术对来源于自主分离隆的黑曲霉(Arpergillusniger)N25的植酸酶phyA基因(GenBank注册号AF218813)的表达片段进行定点突变,构建含突变基因phyAm的酵母表达载体pPIC9k-phyAm,转化毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,获得重组基因工程酵母菌株PP-NPm-8。该菌种经传代实验证实具有良好的遗传稳定性。本实验室以植酸酶phyAm基因重组酵母菌株PP-NPm-8工程菌为对象。研究了麦芽汁培养基和麦芽高温浸提培养基。培养基成本比BMGY/BMMY降低了218倍。对基因工程菌PP-NPm-8的培养方法进行研究,获得最佳种龄、接种量、诱导时间、培养基pH、甲醇诱导浓度。在此条件下所培养的工程菌酶活可达85067U/ml(在37℃、pH4.6的条件下,1分钟内从0.0051mol/L的植酸钠溶液中释放出1nmol无机磷所需要的植酸酶量为一个酶活性单位)。

    一种提高酶基因在酵母中高效表达的方法

    公开(公告)号:CN104694565A

    公开(公告)日:2015-06-10

    申请号:CN201310653776.9

    申请日:2013-12-09

    IPC分类号: C12N15/81 C12N15/55 C12N15/10

    摘要: 一种提高酶基因在酵母中高效表达的方法Genbank中获得酶基因,用Lasergene软件分析酶基因的碱基含量、密码子、编码氨基酸数量等生物学信息,判断密码子偏爱性。根据酵母相对同义密码子数(RSCU)值,优化设计酶基因,选用酵母高频密码子,减少基因中低频密码子。调整优化基因,消除AT富含区。分析酶基因的mRNA5’及3’端非翻译区,优化设计起始密码子的旁侧序列,避免起始密码子包裹于发夹结构中。用RNAstructure5.4,GeneBeeservice(http://www.genebee.mus.su)软件分析优化基因mRNA二级结构,计算mRNA自由能ΔG值。合成最终优化基因,用相同方法分析优化基因,在合成基因上游5’端加入XbaI/NdeI/KasI/SnaBI等酶切位点,下游3’端加入NsiI/NspI/KpnI/NotI等酶切位点后连接入pPIC9K/pPIC3.5K,获得重组表达载体pP-B,电转酵母中诱导表达,鉴定后获取转化子。

    一种高分子量导电聚苯胺材料的制备方法

    公开(公告)号:CN102174196A

    公开(公告)日:2011-09-07

    申请号:CN201110058271.9

    申请日:2011-03-11

    IPC分类号: C08G73/02

    摘要: 本发明公开了一种合成高分子量导电聚苯胺的新方法,将对苯二胺与1,4-二氧六环-醋酸/醋酸钠缓冲液有机互溶体系混合,并在N2气氛,40℃水浴下搅拌至完全溶解;在缓慢加入Fe3O4磁性纳米粒子和引发剂过氧化氢溶液后继续反应12h,待聚合产物沉淀出来后,抽滤,洗涤,重析,利用强磁体除去Fe3O4磁性纳米粒子,过滤悬液,将沉淀溶解于DMF,缓慢滴加到无水乙醇中使聚合物析出,过滤,将沉淀真空干燥得到高分子量的本征态黑色产物导电聚苯胺。该方法合成条件简单,易于控制,分离提纯等后处理过程简便,且磁性纳米粒子易于磁分离、本征态导电聚苯胺具有超高分子量易溶于普通有机溶剂,具有良好的氧化还原可逆性和热稳定性的特性。

    一种苦荞的遗传转化方法

    公开(公告)号:CN115005099A

    公开(公告)日:2022-09-06

    申请号:CN202210646308.8

    申请日:2022-06-09

    IPC分类号: A01H4/00 C12N15/82

    摘要: 本发明涉及植物组织培养及遗传转化领域,具体是一种苦荞的遗传转化方法,该方法包括:(1)无菌苗的制备(2)农杆菌的培养(3)外植体制备(4)侵染与共培养(5)不定芽诱导培养(6)生根培养。该方法利用子叶节为起始外植体,通过直接器官发生途径建立一种快速有效的再生体系,不经由愈伤组织的诱导及分化,简化了培养流程,在短时间内便可获得苦荞再生植株;该方法培养的组培苗植株表型一致性高,稳定地保持母体的优良特性。