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公开(公告)号：CN116622814A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202310349126.9
申请日：2023-04-04
申请人： 四川大学
IPC分类号： C12Q1/6858 , C12Q1/689 , C12N15/11 , C12R1/425
摘要： 本发明公开了一种细胞多突变位点基因成像方法，属于单细胞分析的领域。通过细胞内原位PCR实现信号放大与成像，利用连接反应识别单碱基突变基因，通过在不同引物上标记不同的荧光基团，实现了对于拥有不同突变位点的可视化区分。因此，本发明开发的同时成像细胞多个突变位点的成像方法，实现单个细菌的突变位点、细菌空间位置异质性的分析。
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公开(公告)号：CN116515970A
公开(公告)日：2023-08-01
申请号：CN202310386714.X
申请日：2023-04-12
申请人： 四川大学
IPC分类号： C12Q1/686 , C12Q1/6895
摘要： 本发明公开了一种鉴定转基因食品成分的基于CRISPR的DNA条形码方法，属于核酸检测领域。所述方法包括PCR扩增反应与CRISPR识别反应。所述PCR扩增反应体系包括通过在变温条件下重复打开、解旋、退火和延伸扩增靶核酸片段。所述CRISPR识别反应体系包括Cas14a效应蛋白、单链向导RNA和荧光报告探针。
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公开(公告)号：CN112501248B
公开(公告)日：2023-04-25
申请号：CN202011644377.2
申请日：2020-12-30
申请人： 四川大学华西医院
摘要： 本发明公开了一种可视化核酸检测试剂盒，属于分子检测领域。所述试剂盒包括分子识别试剂和信号转换试剂；所述分子识别试剂是嵌有金属离子的DNA双链分子，所述DNA双链分子由底物链和错配链碱基互补配对而成，其中底物链与错配链各有一个或多个C或者T碱基，在金属离子的作用下相互配对；所述信号转换试剂由脲酶、尿素和pH指示剂组成。当样品中存在靶标核酸时，靶标核酸序列与错配链竞争性结合底物链，置换出错配链，金属离子游离出来，抑制脲酶活性，进而抑制尿素分解；若无靶标核酸，脲酶会催化尿素分解产生氨，溶液pH增加，可通过pH指示剂表征。本发明的试剂盒不依赖核酸扩增反应，具有操作简便性和可视化结果呈现的功能。
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公开(公告)号：CN112501353B
公开(公告)日：2023-01-06
申请号：CN202011431411.8
申请日：2020-12-09
申请人： 四川大学华西医院
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6816
摘要： 本发明公开了一种检测新冠病毒及其突变体的试剂盒，其特征在于，包括如下部分：(1)前底物A链和前底物B链；(2)Cas 13a蛋白；(3)crRNA或其DNA模板；(4)核酸连接酶；(5)点亮型RNA适体或其DNA模板；(6)体外转录试剂。本发明的试剂盒可广泛用于多种样本的新冠病毒的检测，且相较于基于CRISPR‑Cas13a复合体的检测方法检测成本低，并且可以检测到新冠病毒的单碱基突变，操作步骤简单，能保证较高的特异性和灵敏度，应用前景良好。
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公开(公告)号：CN113174442A
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN202110465264.4
申请日：2021-04-28
申请人： 四川大学
摘要： 本发明公开了一种大曲中四甲基吡嗪合成关键基因表达的定量检测方法，属于白酒检测技术领域。本发明采用实时荧光定量法检测大曲中四甲基吡嗪合成的关键基因（alsS基因和alsD基因）来检测四甲基吡嗪的含量变化。首先利用细菌总RNA快速抽提试剂盒提取大曲中的基因组RNA；再利用RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit（逆转录试剂盒）将RNA转化为cDNA；随后进行实时荧光PCR检测，即可完成四甲基吡嗪含量检测。本发明利用分子生物学手段，通过检测四甲基吡嗪合成关键基因alsS基因和alsD基因，实现对其进行实时定量检测，评估芽孢杆菌产乙偶姻、四甲基吡嗪的情况。且相较于普通PCR方法具有操作简便、速度快，具有产物检测和定量分析一体化等优点。
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公开(公告)号：CN112501353A
公开(公告)日：2021-03-16
申请号：CN202011431411.8
申请日：2020-12-09
申请人： 四川大学华西医院
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6816
摘要： 本发明公开了一种检测新冠病毒及其突变体的试剂盒，其特征在于，包括如下部分：(1)前底物A链和前底物B链；(2)Cas 13a蛋白；(3)crRNA或其DNA模板；(4)核酸连接酶；(5)点亮型RNA适体或其DNA模板；(6)体外转录试剂。本发明的试剂盒可广泛用于多种样本的新冠病毒的检测，且相较于基于CRISPR‑Cas13a复合体的检测方法检测成本低，并且可以检测到新冠病毒的单碱基突变，操作步骤简单，能保证较高的特异性和灵敏度，应用前景良好。
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公开(公告)号：CN109406475A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811527942.X
申请日：2018-12-13
申请人： 四川大学
IPC分类号： G01N21/64
摘要： 一种双标记快速响应核酸适配体探针，该探针由5’端、3’端分别被荧光显色基团标记的核酸适配体和5’端、3’端分别被荧光淬灭基团标记的互补探针组成，该核酸适配体为可特异性识别黄曲霉毒素B1的核酸适配体核，即AFB1核酸适配体，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：1所示，该互补探针与AFB1核酸适配体双端互补，其核苷酸序列为序列表中SEQ ID NO：2所示。使用本发明所述方法可对黄曲霉毒素B1快速检测，其加入黄曲霉毒素B1后的识别过程可在一分钟完成，并且一个黄曲霉毒素B1分子可引发两个荧光基团信号的恢复，灵敏度高，整个反在均相和恒温的溶液环境中进行，操作简单。
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公开(公告)号：CN114350853B
公开(公告)日：2023-12-22
申请号：CN202111675548.2
申请日：2021-12-31
申请人： 四川大学华西医院
IPC分类号： C12Q1/70 , C12Q1/6844 , C12N15/11 , C12R1/93
摘要： 本发明公开了一种无标记和等温检测病毒及其突变体的试剂盒，其特征在于，包括如下部分：(1)含切割识别序列的预引物；(2)从5’端至3’端由适配体互补序列(L‑broccoli)、T7启动子互补序列(L‑T7启动子)、间隔序列和引物前锚序列依次连接构成的转录模板。(3)crRNA或其DNA模板；(4)Cas13蛋白(5)体外转录试剂；(6)病毒和/或其突变体的ssRNA体外扩增用引物；(7)去磷酸化试剂。本发明的试剂盒对新冠病毒及变体检测的灵敏度、特异性高、检测限为0.216fM，操(56)对比文件Yuxi Wang等.CRISPR-Cas13a cascade-based viral RNA assay for detecting SARS-CoV-2 and its mutations in clinicalsamples《.Sens Actuators B Chem》.2022,第362卷131765.
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公开(公告)号：CN117074373A
公开(公告)日：2023-11-17
申请号：CN202210502498.6
申请日：2022-05-10
申请人： 四川大学
IPC分类号： G01N21/64
摘要： 本发明提供了一种基于Csm6的脱氧核酶传感器，其特征在于，包括如下部分：（1）脱氧核酶酶链和脱氧核酶底物链，所述脱氧核酶底物链的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.1或SEQ ID No.2所示，所述脱氧核酶酶链的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No.10所示；（2）Csm6蛋白酶；（3）被荧光与猝灭基团修饰的单链RNA报告探针，所述被荧光与猝灭基团修饰的单链RNA报告探针序列如序列表中SEQ ID No.16所示。本发明还提供了一种该脱氧核酶传感器对铅检测的应用。本发明提供的脱氧核酶传感器可以提高现有生物传感器在铅离子检测中的灵敏度和高选择性。
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公开(公告)号：CN116287153A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310210110.X
申请日：2023-03-07
申请人： 四川大学
IPC分类号： C12Q1/6858 , C12N15/113
摘要： 本发明公开了一种基于原位ARMS‑PCR和Cas标记的单碱基突变成像方法。本方法属于单细胞分析的领域。利用在PCR引物上增加碱基错配位点，实现菌内对单核苷酸变异信息的有效扩增和特异性识别。同时，通过改造后的gRNA/Cas12a 对扩增产物进行标记。使用本方法还可以在复杂环境中精准量化沙门氏菌耐药菌，并获取细胞异质性信息和空间位置信息。
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